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        參藍膠原栓的研制

        2009-10-20 04:28:46林慧文李斯明鄭愛華張紫萍
        中國當代醫(yī)藥 2009年15期
        關(guān)鍵詞:止血消炎膠原蛋白

        林慧文 李斯明 鄭愛華 張紫萍

        [摘要] 目的:以膠原蛋白為主要原料,配以中藥苦參、板藍根,通過適當?shù)姆椒?制備一種用于宮頸創(chuàng)面止血、消炎并能加速創(chuàng)面愈合的新型栓劑材料。方法:制備高純度的膠原蛋白溶液,栓劑基質(zhì),加入中藥苦參、板藍根制成栓劑,然后進行理化性能檢測及質(zhì)量監(jiān)測、毒理學試驗和藥效學試驗,并對其止血、消炎性能進行評價。結(jié)果:該栓劑質(zhì)量穩(wěn)定, pH值為5.5,毒理學試驗均為陰性。藥效學動物試驗顯示一期愈合率為90%,平均愈合時間為5~6 d。實驗組與對照組相比較,止血和愈合的效果比較具差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。結(jié)論:參藍膠原栓,既可止血、抗菌消炎,又有利于創(chuàng)面愈合、縮短愈合時間,具有臨床應用價值。

        [關(guān)鍵詞] 膠原蛋白;止血;消炎

        [中圖分類號]R944.23

        [文獻標識碼]B

        [文章編號]1674-4721(2009)08(a)-150-02

        宮頸病變是常見的婦科疾病,EPPL術(shù)是治療宮頸病變的重要手段。但因創(chuàng)面大,愈合時間長,存在有局部出血、感染等并發(fā)癥,是目前面臨及亟需解決的問題。

        膠原是動物體內(nèi)含量最多的蛋白質(zhì),是創(chuàng)面愈合與修復中的重要物質(zhì),能促使上皮細胞覆蓋傷口,完成組織的重建。因此,設計以膠原蛋白為主要原料,配以中藥苦參、板藍根制備一種陰道栓劑,具有止血、抗菌和促進傷口愈合作用,可用于宮頸炎治療后及ELLP的創(chuàng)面愈合。

        1 材料與方法

        1.1膠原蛋白原料的制備

        以牛筋腱為主要原料,去除牛筋表皮、肌肉脂肪等雜質(zhì),利用的鹽水脫脂、去血清等成分,搗碎,然后用0.5 mol/L的醋酸和胃蛋白酶溶解,鹽析,再酸溶,用水透析至中性得到膠原蛋白原液(由廣州市紅十字會醫(yī)院、廣州市創(chuàng)傷外科研究所研制并提供),冷凍干燥后備用。

        1.2栓劑基質(zhì)組方的改進

        主要采用甘油明膠水溶性基質(zhì),確定基質(zhì)中明膠、甘油、添加物甘露醇的最佳比例,控制基質(zhì)含水量為10%。

        1.3 中藥板藍根、苦參濃縮提取制備

        取適量板藍根、苦參分別粉碎成粗粉,混合均勻,加水煎煮兩次,第一次1.5 h,第二次1 h,合并煎液,濾過,濾液濃縮至相對密度為1.18~1.23(60~80℃),待冷至40℃左右,緩慢加入乙醇使含醇量達70%,充分攪拌,靜置12 h,過濾,濃縮到糊狀物,備用。

        1.4參藍膠原栓劑的制備方法

        凍干膠原蛋白經(jīng)無菌稀醋酸溶解后,用無菌蒸餾水透析至中性;取處方量明膠加入適量純水浸漬12 h,加入甘油,置沸水浴上加熱約10 min,趁熱用紗布過濾,在濾液中加入適量板藍根、苦參濃縮液,待35℃左右加入膠原蛋白,入栓劑模具中,待凝即得。共制得栓劑50粒供性能檢測和動物實驗使用。

        1.5參藍膠原栓劑的理化性能及質(zhì)量監(jiān)測

        酸度測定:取本品3 粒,加水30 ml ,使溶解,依法測定(《中國藥典》2000 年版一部附錄XIII B) pH 值。

        無菌試驗:參照《中華人民共和國藥典》中有關(guān)的微生物檢測方法進行試驗,檢測樣品的微生物含量。

        穩(wěn)定性試驗:樣品在室溫和4℃冰箱中保存,同批樣品每個月取2粒進行膠原蛋白的性質(zhì)檢測。

        1.6 動物實驗

        1.6.1 實驗動物

        新西蘭大白兔20只,體重(2.0±0.5) kg,均為雌兔 。將實驗動物隨機分為對照組和實驗組,每組10只,分籠標準喂養(yǎng),飼料為全價營養(yǎng)兔顆粒飼料。

        1.6.2 毒理學實驗

        根據(jù)國際標準ISO10993-1即國家標準GB/T16886.1的規(guī)定進行細胞毒性試驗、致敏試驗、刺激試驗、亞急性毒性試驗以及遺傳毒性試驗。

        1.6.3藥效學試驗

        兩組新西蘭雌性大白兔分為實驗組和對照組。用速眠新注射液(846)給大白兔肌注(0.02~0.04 ml/kg),麻醉滿意后將動物仰綁于手術(shù)臺 ,剪去術(shù)區(qū)周圍毛約4 cm×6 cm,在陰道內(nèi)側(cè)選取1 cm×0.5 cm組織兩處,形成滲血創(chuàng)面,用制備好的參藍膠原栓劑貼敷。對照組以凡士林紗布貼敷。

        療效觀察:記錄止血時間,并定期作菌落計數(shù)以及創(chuàng)面面積測量,記錄創(chuàng)面愈合時間;分別于術(shù)后第7、14天,每組各處死5只大白兔,肉眼觀察創(chuàng)面情況,并取陰道內(nèi)創(chuàng)傷部位組織進行病理組織活檢。

        2 結(jié)果

        2.1 參藍膠原栓劑的理化性能檢測及質(zhì)量監(jiān)測結(jié)果

        pH值為5.5。栓劑的質(zhì)量穩(wěn)定,穩(wěn)定性試驗顯示:栓劑在1~6個月內(nèi)膠原蛋白的比黏度、蛋白質(zhì)的性質(zhì)、含量是穩(wěn)定的,在6個月以后,比黏度開始下降,蛋白質(zhì)的含量基本不變,電泳結(jié)果表明逐漸有蛋白質(zhì)降解發(fā)生。因此,暫定該栓劑的保存期為40℃以下半年。

        2.2 無菌試驗結(jié)果

        參藍膠原栓劑經(jīng)過細菌和真菌培養(yǎng),無細菌和真菌檢出。

        2.3 毒理學試驗

        急性毒性試驗、刺激性試驗、過敏性試驗和溶血性試驗均為陰性結(jié)果。

        2.4動物實驗結(jié)果

        一般情況:術(shù)后1 d內(nèi)各組動物納差,活動量小,反應遲鈍,2 d后基本恢復。

        肉眼觀察:術(shù)后兩組止血和愈合的效果明顯不同 ,實驗組以止血和愈合的效果明顯一期愈合為9例,占90%;在開始的24 h內(nèi),傷口組織周圍發(fā)生輕度的應急反應,在第2天開始,上皮細胞也從邊緣向傷口生長,創(chuàng)面縮小。術(shù)后第5~6天傷口愈合完成,對照組止血和愈合的效果有改變的共3例,占30%。隨時間延長止血和愈合的效果明顯有差異,且創(chuàng)面愈合不整,瘢痕較明顯。

        2.5統(tǒng)計學分析結(jié)果

        第一周實驗組與對照組相比較,止血和愈合的效果比較具差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),術(shù)后 2周分析結(jié)果顯示第二周實驗組與對照組相比較,止血和愈合的效果均具差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。實驗組止血和愈合的效果與對照組比較明顯提高。

        2.6 組織病理學改變

        用光學顯微鏡(德國LAIKA D2000)觀察。術(shù)后第一周、第二周與對照組相比,組織學表現(xiàn)為實驗組炎性反應明顯減少,創(chuàng)緣基底細胞分裂增生,損傷組織修復良好,創(chuàng)面修復情況明顯優(yōu)于對照組。

        3 討論

        膠原蛋白是動物體內(nèi)含量最多、分布最廣的蛋白質(zhì),膠原是細胞間質(zhì)的主要成分,它可以促進上皮細胞及成纖維細胞的增殖和分化,為多種細胞因子的黏附提供基質(zhì)。對細胞的分化、運動、化學趨向性、結(jié)締組織的修復、關(guān)節(jié)潤滑、傷口愈合、水電解質(zhì)的分布及血液凝固等均起重要作用,在創(chuàng)傷愈合過程中膠原纖維形成網(wǎng)絡和支架,連接細胞,引導細胞遷入組織缺損區(qū),是創(chuàng)面愈合與修復中的重要物質(zhì),能促使上皮細胞覆蓋傷口,完成組織的重建。特別是Ⅰ型膠原由于其優(yōu)越的生物相容性和安全性以及來源豐富性,被認為是最有用的生物材料之一[1]。而且膠原蛋白的pH值為4~6,適用于人體的微酸環(huán)境[2-6]。

        中藥板藍根為十字花科大青葉屬植菘藍根,功效清熱解毒,對多種細菌、病毒有抑制和殺滅作用,尤其對大腸桿菌、金黃葡萄球菌作用顯著;苦參堿是燥熱,殺蟲,對多種桿菌與真菌、滴蟲有抑制和殺滅作用,并能升高白細胞,加強免疫力[7]。

        宮頸炎、宮頸病變是常見的婦科疾病目前,臨床用于宮頸糜爛及創(chuàng)面修復的治療多采用以化學合成藥物或中藥為主藥結(jié)合一些基質(zhì)而制成的栓劑,雖然有一定的療效,但宮頸創(chuàng)面貼附不緊密,故修復創(chuàng)面的效果欠佳。我們設計以膠原蛋白為主要原料,配合中藥板藍根、苦參堿,通過適當?shù)姆椒?制備一種膠原蛋白參藍陰道栓劑。試驗結(jié)果顯示既止血、抗菌消炎,又有利于創(chuàng)面愈合、縮短愈合時間,適用于宮頸物理治療后及LEEP后創(chuàng)面的止血、抗菌消炎,并能促進宮頸愈合。

        [參考文獻]

        [1]王玉麗. 膠原在生物醫(yī)學中的應用[J].國外醫(yī)學·藥物學分冊, 2002, 29 (2):113-116.

        [2]Low RK, Moran ME, Goodnight JE. Clinical correspondence microfibrillar collagen hemostat during laparoscopically directed liver biosy[J].J of Laparoendoscopic Surgery, 1993,3(4):415.

        [3]李小華, 何綺文, 李斯明, 等.膠原-氧氟沙星凝膠治療褥瘡的療效觀察[J].實用護理雜志,2003,l9(3):49.

        [4]葉春婷,陳鴻輝,李斯明,等.幾丁糖-膠原止血海綿的研制及其生物相容性評價[J].中華創(chuàng)傷骨科雜志, 2002, 4 (4):64-66.

        [5]梁佩紅,葉春婷,李斯明,等.復合I型膠原海綿創(chuàng)傷止血的動物實驗研究[J]. 創(chuàng)傷外科雜志,2002,4(5):274-275.

        [6]高智仁,李毅,蘇青和.膠原凝膠治療燒傷的臨床評價[J].中華整形燒傷外科雜志,1995,11(5): 237.

        [7]陳新謙.新編藥物學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:274.

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