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        參藍(lán)膠原栓的研制

        2009-10-20 04:28:46林慧文李斯明鄭愛華張紫萍
        中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2009年15期
        關(guān)鍵詞:止血消炎膠原蛋白

        林慧文 李斯明 鄭愛華 張紫萍

        [摘要] 目的:以膠原蛋白為主要原料,配以中藥苦參、板藍(lán)根,通過適當(dāng)?shù)姆椒?制備一種用于宮頸創(chuàng)面止血、消炎并能加速創(chuàng)面愈合的新型栓劑材料。方法:制備高純度的膠原蛋白溶液,栓劑基質(zhì),加入中藥苦參、板藍(lán)根制成栓劑,然后進(jìn)行理化性能檢測(cè)及質(zhì)量監(jiān)測(cè)、毒理學(xué)試驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn),并對(duì)其止血、消炎性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果:該栓劑質(zhì)量穩(wěn)定, pH值為5.5,毒理學(xué)試驗(yàn)均為陰性。藥效學(xué)動(dòng)物試驗(yàn)顯示一期愈合率為90%,平均愈合時(shí)間為5~6 d。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較,止血和愈合的效果比較具差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論:參藍(lán)膠原栓,既可止血、抗菌消炎,又有利于創(chuàng)面愈合、縮短愈合時(shí)間,具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

        [關(guān)鍵詞] 膠原蛋白;止血;消炎

        [中圖分類號(hào)]R944.23

        [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]B

        [文章編號(hào)]1674-4721(2009)08(a)-150-02

        宮頸病變是常見的婦科疾病,EPPL術(shù)是治療宮頸病變的重要手段。但因創(chuàng)面大,愈合時(shí)間長(zhǎng),存在有局部出血、感染等并發(fā)癥,是目前面臨及亟需解決的問題。

        膠原是動(dòng)物體內(nèi)含量最多的蛋白質(zhì),是創(chuàng)面愈合與修復(fù)中的重要物質(zhì),能促使上皮細(xì)胞覆蓋傷口,完成組織的重建。因此,設(shè)計(jì)以膠原蛋白為主要原料,配以中藥苦參、板藍(lán)根制備一種陰道栓劑,具有止血、抗菌和促進(jìn)傷口愈合作用,可用于宮頸炎治療后及ELLP的創(chuàng)面愈合。

        1 材料與方法

        1.1膠原蛋白原料的制備

        以牛筋腱為主要原料,去除牛筋表皮、肌肉脂肪等雜質(zhì),利用的鹽水脫脂、去血清等成分,搗碎,然后用0.5 mol/L的醋酸和胃蛋白酶溶解,鹽析,再酸溶,用水透析至中性得到膠原蛋白原液(由廣州市紅十字會(huì)醫(yī)院、廣州市創(chuàng)傷外科研究所研制并提供),冷凍干燥后備用。

        1.2栓劑基質(zhì)組方的改進(jìn)

        主要采用甘油明膠水溶性基質(zhì),確定基質(zhì)中明膠、甘油、添加物甘露醇的最佳比例,控制基質(zhì)含水量為10%。

        1.3 中藥板藍(lán)根、苦參濃縮提取制備

        取適量板藍(lán)根、苦參分別粉碎成粗粉,混合均勻,加水煎煮兩次,第一次1.5 h,第二次1 h,合并煎液,濾過,濾液濃縮至相對(duì)密度為1.18~1.23(60~80℃),待冷至40℃左右,緩慢加入乙醇使含醇量達(dá)70%,充分?jǐn)嚢?靜置12 h,過濾,濃縮到糊狀物,備用。

        1.4參藍(lán)膠原栓劑的制備方法

        凍干膠原蛋白經(jīng)無菌稀醋酸溶解后,用無菌蒸餾水透析至中性;取處方量明膠加入適量純水浸漬12 h,加入甘油,置沸水浴上加熱約10 min,趁熱用紗布過濾,在濾液中加入適量板藍(lán)根、苦參濃縮液,待35℃左右加入膠原蛋白,入栓劑模具中,待凝即得。共制得栓劑50粒供性能檢測(cè)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用。

        1.5參藍(lán)膠原栓劑的理化性能及質(zhì)量監(jiān)測(cè)

        酸度測(cè)定:取本品3 粒,加水30 ml ,使溶解,依法測(cè)定(《中國(guó)藥典》2000 年版一部附錄XIII B) pH 值。

        無菌試驗(yàn):參照《中華人民共和國(guó)藥典》中有關(guān)的微生物檢測(cè)方法進(jìn)行試驗(yàn),檢測(cè)樣品的微生物含量。

        穩(wěn)定性試驗(yàn):樣品在室溫和4℃冰箱中保存,同批樣品每個(gè)月取2粒進(jìn)行膠原蛋白的性質(zhì)檢測(cè)。

        1.6 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

        1.6.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

        新西蘭大白兔20只,體重(2.0±0.5) kg,均為雌兔 。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每組10只,分籠標(biāo)準(zhǔn)喂養(yǎng),飼料為全價(jià)營(yíng)養(yǎng)兔顆粒飼料。

        1.6.2 毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)

        根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)ISO10993-1即國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T16886.1的規(guī)定進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)、致敏試驗(yàn)、刺激試驗(yàn)、亞急性毒性試驗(yàn)以及遺傳毒性試驗(yàn)。

        1.6.3藥效學(xué)試驗(yàn)

        兩組新西蘭雌性大白兔分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。用速眠新注射液(846)給大白兔肌注(0.02~0.04 ml/kg),麻醉滿意后將動(dòng)物仰綁于手術(shù)臺(tái) ,剪去術(shù)區(qū)周圍毛約4 cm×6 cm,在陰道內(nèi)側(cè)選取1 cm×0.5 cm組織兩處,形成滲血?jiǎng)?chuàng)面,用制備好的參藍(lán)膠原栓劑貼敷。對(duì)照組以凡士林紗布貼敷。

        療效觀察:記錄止血時(shí)間,并定期作菌落計(jì)數(shù)以及創(chuàng)面面積測(cè)量,記錄創(chuàng)面愈合時(shí)間;分別于術(shù)后第7、14天,每組各處死5只大白兔,肉眼觀察創(chuàng)面情況,并取陰道內(nèi)創(chuàng)傷部位組織進(jìn)行病理組織活檢。

        2 結(jié)果

        2.1 參藍(lán)膠原栓劑的理化性能檢測(cè)及質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果

        pH值為5.5。栓劑的質(zhì)量穩(wěn)定,穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示:栓劑在1~6個(gè)月內(nèi)膠原蛋白的比黏度、蛋白質(zhì)的性質(zhì)、含量是穩(wěn)定的,在6個(gè)月以后,比黏度開始下降,蛋白質(zhì)的含量基本不變,電泳結(jié)果表明逐漸有蛋白質(zhì)降解發(fā)生。因此,暫定該栓劑的保存期為40℃以下半年。

        2.2 無菌試驗(yàn)結(jié)果

        參藍(lán)膠原栓劑經(jīng)過細(xì)菌和真菌培養(yǎng),無細(xì)菌和真菌檢出。

        2.3 毒理學(xué)試驗(yàn)

        急性毒性試驗(yàn)、刺激性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)和溶血性試驗(yàn)均為陰性結(jié)果。

        2.4動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        一般情況:術(shù)后1 d內(nèi)各組動(dòng)物納差,活動(dòng)量小,反應(yīng)遲鈍,2 d后基本恢復(fù)。

        肉眼觀察:術(shù)后兩組止血和愈合的效果明顯不同 ,實(shí)驗(yàn)組以止血和愈合的效果明顯一期愈合為9例,占90%;在開始的24 h內(nèi),傷口組織周圍發(fā)生輕度的應(yīng)急反應(yīng),在第2天開始,上皮細(xì)胞也從邊緣向傷口生長(zhǎng),創(chuàng)面縮小。術(shù)后第5~6天傷口愈合完成,對(duì)照組止血和愈合的效果有改變的共3例,占30%。隨時(shí)間延長(zhǎng)止血和愈合的效果明顯有差異,且創(chuàng)面愈合不整,瘢痕較明顯。

        2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果

        第一周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較,止血和愈合的效果比較具差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),術(shù)后 2周分析結(jié)果顯示第二周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比較,止血和愈合的效果均具差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。實(shí)驗(yàn)組止血和愈合的效果與對(duì)照組比較明顯提高。

        2.6 組織病理學(xué)改變

        用光學(xué)顯微鏡(德國(guó)LAIKA D2000)觀察。術(shù)后第一周、第二周與對(duì)照組相比,組織學(xué)表現(xiàn)為實(shí)驗(yàn)組炎性反應(yīng)明顯減少,創(chuàng)緣基底細(xì)胞分裂增生,損傷組織修復(fù)良好,創(chuàng)面修復(fù)情況明顯優(yōu)于對(duì)照組。

        3 討論

        膠原蛋白是動(dòng)物體內(nèi)含量最多、分布最廣的蛋白質(zhì),膠原是細(xì)胞間質(zhì)的主要成分,它可以促進(jìn)上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞的增殖和分化,為多種細(xì)胞因子的黏附提供基質(zhì)。對(duì)細(xì)胞的分化、運(yùn)動(dòng)、化學(xué)趨向性、結(jié)締組織的修復(fù)、關(guān)節(jié)潤(rùn)滑、傷口愈合、水電解質(zhì)的分布及血液凝固等均起重要作用,在創(chuàng)傷愈合過程中膠原纖維形成網(wǎng)絡(luò)和支架,連接細(xì)胞,引導(dǎo)細(xì)胞遷入組織缺損區(qū),是創(chuàng)面愈合與修復(fù)中的重要物質(zhì),能促使上皮細(xì)胞覆蓋傷口,完成組織的重建。特別是Ⅰ型膠原由于其優(yōu)越的生物相容性和安全性以及來源豐富性,被認(rèn)為是最有用的生物材料之一[1]。而且膠原蛋白的pH值為4~6,適用于人體的微酸環(huán)境[2-6]。

        中藥板藍(lán)根為十字花科大青葉屬植菘藍(lán)根,功效清熱解毒,對(duì)多種細(xì)菌、病毒有抑制和殺滅作用,尤其對(duì)大腸桿菌、金黃葡萄球菌作用顯著;苦參堿是燥熱,殺蟲,對(duì)多種桿菌與真菌、滴蟲有抑制和殺滅作用,并能升高白細(xì)胞,加強(qiáng)免疫力[7]。

        宮頸炎、宮頸病變是常見的婦科疾病目前,臨床用于宮頸糜爛及創(chuàng)面修復(fù)的治療多采用以化學(xué)合成藥物或中藥為主藥結(jié)合一些基質(zhì)而制成的栓劑,雖然有一定的療效,但宮頸創(chuàng)面貼附不緊密,故修復(fù)創(chuàng)面的效果欠佳。我們?cè)O(shè)計(jì)以膠原蛋白為主要原料,配合中藥板藍(lán)根、苦參堿,通過適當(dāng)?shù)姆椒?制備一種膠原蛋白參藍(lán)陰道栓劑。試驗(yàn)結(jié)果顯示既止血、抗菌消炎,又有利于創(chuàng)面愈合、縮短愈合時(shí)間,適用于宮頸物理治療后及LEEP后創(chuàng)面的止血、抗菌消炎,并能促進(jìn)宮頸愈合。

        [參考文獻(xiàn)]

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        [3]李小華, 何綺文, 李斯明, 等.膠原-氧氟沙星凝膠治療褥瘡的療效觀察[J].實(shí)用護(hù)理雜志,2003,l9(3):49.

        [4]葉春婷,陳鴻輝,李斯明,等.幾丁糖-膠原止血海綿的研制及其生物相容性評(píng)價(jià)[J].中華創(chuàng)傷骨科雜志, 2002, 4 (4):64-66.

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        [6]高智仁,李毅,蘇青和.膠原凝膠治療燒傷的臨床評(píng)價(jià)[J].中華整形燒傷外科雜志,1995,11(5): 237.

        [7]陳新謙.新編藥物學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:274.

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