潘小炎　李天資　周喜漢　尹毅霞　潘興壽

【摘要】目的探討石斛治療慢性萎縮性胃炎(CAG)的療效及其機(jī)制。方法用氨水、乙醇和去氧膽酸鈉灌胃法，制成大鼠CAG模型。造模后治療組以石斛治療5周，觀察血胃泌素（GAS）、生長(zhǎng)抑素（SS）和胃黏膜前列腺素E2（PGE₂）的變化情況，并與模型組和對(duì)照組比較。結(jié)果石斛治療組治療前SS 、GAS和PGE2分別為7.95±2.14 ng/L，216.13±77.21 ng/L，1435.10±200.53 pg/mp，均較對(duì)照組低（P＜0.01），治療后分別為9.58±1.01 ng/L，328.53±84.74 ng/L，1715.66±125.49 pg/mp；治療后除SS外，各觀察指標(biāo)水平均較治療前高（P＜0.01），與對(duì)照組比較差異不大(P＞0.05)。結(jié)論石斛可使GAS和 PGE₂增多，對(duì)CAG有良好的治療作用。

【關(guān)鍵詞】萎縮性胃炎;石斛;大鼠

文章編號(hào)：1003-1383(2009)01-0001-03中圖分類號(hào)：R 573.32；R285.6文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

材料與方法

1.動(dòng)物及分組采用2 m±2 d齡，體重200±10 g，一級(jí)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的雌性遠(yuǎn)交系Wistar大鼠，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供。購(gòu)回后采用架式籠養(yǎng)，室溫為20±2℃，濕度50%～60%，光照明暗各12 h交替，單獨(dú)空調(diào)。先在動(dòng)物室飼養(yǎng)4 d后隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、石斛治療組3組，分籠喂養(yǎng)，每組一籠，每籠25只。

2.實(shí)驗(yàn)用藥物及試制氨水：中國(guó)瓶窯醫(yī)藥化工試制廠，批號(hào)20060431，現(xiàn)用現(xiàn)配成濃度0.1%氨水；乙醇：純度＞99.5%，宜興市鈕家化工助劑廠，批號(hào)20060113，現(xiàn)用現(xiàn)配成60%乙醇溶液；去氧膽酸鈉：Serva公司生產(chǎn)，上?；瘜W(xué)試制采購(gòu)供應(yīng)站進(jìn)口分裝經(jīng)銷，批號(hào)2005618，現(xiàn)用現(xiàn)配成20 mmol/L溶液；石斛煎劑：石斛300 g加水2000 ml于陶瓷皿慢火煎60分鐘，過濾備用。

3.實(shí)驗(yàn)方法①對(duì)照組：不造模，灌服生理鹽水；②模型組和石斛治療組：用0.1%氨水作為飲用水自由飲用；20 mmol的去氧膽酸鈉溶液每日灌胃一次，每次2 ml；60%的乙醇每周空腹灌胃2次，每次2 ml。上述三因素共處理16周建立鼠CAG模型；對(duì)照組用生理鹽水灌胃， 每只5 ml，每日1次， 連續(xù)5周。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至16周(治療前)每組取11只大鼠處死；取標(biāo)本備檢，對(duì)照組鼠胃病檢無明確病態(tài)表現(xiàn)，模型組和石斛治療組鼠胃病檢均符合慢性萎縮性胃炎表現(xiàn)，表示造模成功。③模型組停止造模，灌服生理鹽水，石斛治療組也停止造模，每日每只大鼠灌服石斛水煎劑5 ml，連續(xù)5周。

4.標(biāo)本及化驗(yàn)試制胃泌素（GAS）酶聯(lián)免疫試劑盒，美國(guó)Lifkey公司生產(chǎn)；生長(zhǎng)抑素（SS）、胃黏膜前列腺素E2（PGE2）放免試劑盒，第二軍醫(yī)大學(xué)神經(jīng)生物學(xué)教研室提供。

5.檢測(cè)方法①血清GAS含量檢測(cè):采用ELISA法，將受實(shí)驗(yàn)的大鼠斷頭處死，取頸動(dòng)脈血5 ml(分為2管，各2.5 ml，另一管加1 g/l肝素25 μl抗凝和抑肽酶1250 U用作血漿SS檢測(cè))，將1管1500 r/min離心5 rain取10 μl血清，分別加入包被好抗原的96孔酶標(biāo)板的孔板中，每孔中加入GAS抗體50 μl和POD(緩沖液)50 μl，輕輕混勻30 s，封住蓋板，室溫孵育45 min，棄除混合物，PBS洗滌5次，甩盡板內(nèi)液體，用吸水紙拍干，加入100 μl的TMB(酶底物)，輕輕混勻10 s，室溫孵育20 min，加入100 μl終止液，混勻30 s后，在酶標(biāo)儀450 nm波長(zhǎng)下，測(cè)A值，計(jì)算血清中GAS含量。

②血漿SS含量檢測(cè)：采用RIA法，將加入肝素和抑肽酶的全血離心，取血漿。在試管上分別標(biāo)上管號(hào)，標(biāo)準(zhǔn)品管中各加入100 μl不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，實(shí)驗(yàn)管中各加入300 μl待測(cè)血漿；所有管中分別加入SS抗血清100 μl和緩沖液200 μl，4℃孵育24 h后，分別加入125I AVP 100 μl混勻，再次4℃孵育24 h，加分離劑500 μl，混勻，室溫放置45 min后，4000 r/min離心，20 min，棄上清液，上放免計(jì)數(shù)儀測(cè)定cpm值，由放免數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算SS含量。

③胃黏膜前列腺素E2（Prostaglandin E2，PGE2）的測(cè)定方法：取出鼠胃，迅速刮取胃黏膜，于液氮中速凍，稱重后，放入勻漿器中，加無水乙醇 0.4 ml，輕研磨后，再加入生理鹽水 1.6 ml，研磨制成勻漿，離心10 min(3500 r/rain)，取上清液，放-30℃冰箱保存?zhèn)錂z。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-±s）表示，運(yùn)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行檢驗(yàn)，三組資料比較用F檢驗(yàn)，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有顯著性意義。

結(jié)果

各組大鼠治療前后各觀察指標(biāo)變化情況，石斛組治療前后GAS和PGE2均有下降（P＜0.01），SS治療后較治療前有上升，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），模型組治療前后GAS和PGE2均有下降但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），對(duì)照組治療前后SS、GAS和PGE2變化不大（P＞0.05），GAS和PGE2石斛組治療后與模型組治療后和對(duì)照組治療后比較均有顯著性差異（P＜0.01），見表1。SS石斛組治療后與對(duì)照組治療后比較差異無顯著性（P＞0.05）。

討論

胃黏膜是前列腺素的主要合成場(chǎng)所之一，其中PGE2是其重要的一種，后者有很強(qiáng)的抑制胃酸參傅鞍酌岡分泌、刺激黏液和碳酸氫鹽分泌、增加黏膜血流和促使上皮再生等作用，又有增強(qiáng)黏膜抵抗力的作用(細(xì)胞保護(hù)作用)。PGE2的細(xì)胞保護(hù)作用與改善胃黏膜血流有關(guān)。 PGE2可保持胃黏膜微血管的完整性，減少血管充血，使完好的胃小凹細(xì)胞快速移行，修復(fù)破壞了的上皮。PGE2對(duì)胃黏膜損傷有較好的保護(hù)作用，而提高胃黏膜保護(hù)能力又具有一定的防治胃癌前病變和胃癌的作用，大量的研究表明，對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用是通過提高內(nèi)源性PGE2的含量來實(shí)現(xiàn)的。GAS是胃酸分泌的主要調(diào)節(jié)激素，其分子量2100，是含有17個(gè)氨基酸的多肽，GAS分泌受胃內(nèi)pH、進(jìn)食、胃內(nèi)壓變化、SS和其他胃腸激素及交感神經(jīng)興奮等諸多因素的影響，同時(shí)GAS分泌又可引起近端胃舒張、胃竇收縮的作用。而SS是一種對(duì)外分泌、內(nèi)分泌、旁分泌及自分泌均起作用的調(diào)節(jié)肽，對(duì)消化系統(tǒng)的生物學(xué)作用主要是抑制胃泌素等各種胃腸激素的分泌，亦可抑制胃腸運(yùn)動(dòng)和黏膜細(xì)胞的增生，減少胃腸道壁血流量，抑制胃酸、胃蛋白酶、胰液分泌。GAS可直接刺激SS分泌，而SS又可抑制GAS的分泌，二者間具有獨(dú)特的區(qū)域性調(diào)節(jié)作用。近年來對(duì)GAS、SS和PGE2在模型動(dòng)物或患者外周血中含量水平高低有不同的認(rèn)識(shí)，不但其研究結(jié)果報(bào)道不一致，而且對(duì)其在外周血中的含量變化與CAG的關(guān)系也有不同的認(rèn)識(shí)。我們的研究結(jié)果表明，CAG大鼠SS、GAS和PGE2水平均有下降(P＜0.01)；而且從模型組實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，由于不給予治療藥物，結(jié)果大鼠仍維持CAG的病理狀態(tài)。

CAG是消化系統(tǒng)常見病，其胃黏膜上皮遭到反復(fù)損害后導(dǎo)致固有腺體的減少或消失。CAG屬中醫(yī)的“胃痛”、“痞滿”范疇，由于其發(fā)病日久，多種致病因素長(zhǎng)期損害，病變漸呈復(fù)雜化；或因飲食、情志、勞倦、外邪等因素影響反復(fù)發(fā)作，故常兼見脾陽虛或胃陰虧之證，或有兼熱夾濕；而氣滯血瘀、熱郁濕阻又可蘊(yùn)結(jié)成毒。這些總的形成了CAG的本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜的病機(jī)，因此，對(duì)CAG的治療要針對(duì)病因，且標(biāo)本同治。本實(shí)驗(yàn)用單味中藥石斛制成水煎劑對(duì)CAG大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療。其具有益氣健脾、理氣活血，兼以補(bǔ)脾陽益胃陰、清胃熱祛瘀毒等功效，從而標(biāo)本兼治，虛實(shí)共調(diào)，恰中CAG的病機(jī)。從現(xiàn)代藥理學(xué)分析，本方諸藥有調(diào)節(jié)免疫功能、改善胃黏膜血液循環(huán)、清除自由基及抑制組織細(xì)胞癌變的作用。本實(shí)驗(yàn)可以證實(shí)，石斛具有使CAG大鼠前列腺素和胃泌素明顯增高之功效。由此可以推測(cè)石斛對(duì)慢性萎縮性胃炎有修復(fù)和促進(jìn)其康復(fù)之功效。

參考文獻(xiàn)

［1］Machida-Montani A，Sasazuki S，et al.Atrophic Gastritis，Helicobacter pylori，and Colorectal Cancer Risk： A Case-Control Study［J］.Helicobacter，2007；12(4)：328-332.

［2］Liu WL，Chen SJ，Chen Y，et al.Protective effects of heat shock protein70 induced by geranylgeranylacetone in atrophic gastritis in rats［J］.Acta Pharmacol Sin，2007，28(7)：1001-1006.

［3］Kodama M，Murakami K，Sato R，et al.Helicobacter pylori-infected animal models are extremely suitable for the investigation of gastric carcinogenesis［J］.World J Gastroenterol，2005，11(45)：7063-7071.

［4］Campana D，Nori F，Pagotto U，et al.Plasma acylated ghrelin levels are higher in patients with chronic atrophic gastritis［J］.Clin Endocrinol (Oxf)，2007 Jul 5；［Epub ahead of print］.

［5］Cindoruk M，Yetkin I，Deger SM，et al.Influence of H pylori on plasma ghrelin in patients without atrophic gastritis［J］.World J Gastroenterol，2007，13(10)：1595-1598.

［6］黃妙珍，陳芝蕓，嚴(yán)茂祥，等.補(bǔ)氣養(yǎng)陰解毒方對(duì)慢性萎縮性胃炎大鼠表皮生長(zhǎng)因子和生長(zhǎng)抑素的影響［J］.浙江中醫(yī)雜志，20038：314-316.

［7］王茜，龔其海，關(guān)芹，等.石斛生物總堿對(duì)原代皮層神經(jīng)元氧糖剝奪的保護(hù)作用［J］.中國(guó)藥理通報(bào)，2006，23（4）：44.

(收稿日期：2008-12-05修回日期：2009-01-23)

(編輯：潘明志英文審校：鐘京梓)