李立梅　王靜力　曹　陽(yáng)

【摘 要】 精液處理是輔助生育技術(shù)中人工授精所必須的。目的：將非正常的精液處理后達(dá)到符合WHO要求的活動(dòng)精子密度和活力；減少或去除精漿內(nèi)前列腺素、免疫活性細(xì)胞、抗精子抗體、細(xì)胞與碎片；降低精子的粘稠度。除了精子本身受精功能障礙或卵子異常外，精液處理方法的選擇和效果也是重要的原因之一。方法：本文采用兩次洗滌、上游、非連續(xù)梯度離心三種基本方法，來(lái)處理不同的精液標(biāo)本。結(jié)果：精液處理后的活率和妊娠率分別為：>60% 29.5%(20% 19.2%)、>95% 32.8%、>85% 30.5%。結(jié)論：不同的方法對(duì)不同精液標(biāo)本的處理，可以從體外提取形態(tài)正常、無(wú)精漿和其它成分的優(yōu)質(zhì)活精子，增加精子的運(yùn)動(dòng)能力和穿卵能力，以及體外精子獲能等。做人工授精使之有效地與卵結(jié)合，提高妊娠率[1]。

【關(guān)鍵詞】 精液處理； 人工授精； 妊娠率

1 材料與方法

1.1 精液標(biāo)本的收集

1.1.1 取精前一般禁欲5~7天，通過(guò)手淫的方式取精液，收集在無(wú)菌、無(wú)毒的取精杯內(nèi)，如不成功，可通過(guò)性交將精液收集于無(wú)毒的避孕套內(nèi)。

1.1.2 粘稠或有精子抗體的精液，可以收集在一個(gè)含有培養(yǎng)液的取精杯內(nèi)；若精液量少于1ml，最好分次收集射精的精液標(biāo)本。

1.1.3 逆射精：向病人仔細(xì)地解釋整個(gè)過(guò)程，取得他的合作理解；在試驗(yàn)前一晚的9時(shí)，要他將4g NaHCO₃沖一杯水，溶解后服下；在取樣前一小時(shí)，他必須再飲一杯含4g NaHCO₃的水，并且再多飲1~2杯水；在射精前排尿（即小便后立即射精）；射精后他將小便排入一含有5％血清HEPES-HTF液的容器內(nèi)；逆射出的精子必須立即檢查和處理。

1.2 精液處理

1.2.1 試劑 ①Hepes-HTF（In Vitro Care公司）;②SSS（Irvine Scientific公司）;③Isolate（Irvine Scientific公司）;④10％SSS Hepes-HTF液（1ml ②+9ml ①）。

1.2.2 精液處理方法[2]

1.2.2.1 兩次洗滌法 一份精液加一份④稀釋，300g離心10分鐘，去上清，沉淀加1ml④懸浮，離心洗滌兩次后，沉淀加0.5ml④懸浮做授精用。

1.2.2.2 上游法 方法一：上述洗精第二遍離心沉淀，棄去上清，輕輕指彈試管底讓沉淀松散，小心沿著管壁加1ml④置37℃的CO₂培養(yǎng)內(nèi)孵育30~60min，吸出沉淀上方呈云霧狀的上游精子層培養(yǎng)液0.5ml懸浮做授精用。

方法二：將精液標(biāo)本置試管底部，小心沿著管壁加入含有2ml④傾斜45度置37℃的CO₂培養(yǎng)內(nèi)孵育90min，收集云霧狀的上層培養(yǎng)液再次離心300g×10min，沉淀用0.5ml④懸浮做授精用。

1.2.2.3 Isolate非連續(xù)梯度離心法 取一支15ml尖底離心管，先加1~2ml Upper液，后加1~2ml Lower液于底部（每層梯度量必須是1∶1，若精液差，應(yīng)適當(dāng)減少每層梯度用量），再加精液離心300g×20min，去上清；連續(xù)懸浮離心兩次，200g×10min，去上清，沉淀加0.5ml ④懸浮做授精用（③、④用前只需預(yù)熱即可，不得放CO₂培養(yǎng)）。

2 結(jié)果

精液處理前應(yīng)取少許精液做常規(guī)檢查：測(cè)量精液量、精子濃度、活率及活力，并根據(jù)檢查結(jié)果選擇處理方式。從2006年1月~2007年12月共作113份標(biāo)本分析，見(jiàn)表1。

3 討論

在人工授精中，選擇好精液處理方法是人工授精取得成功的關(guān)鍵因素。精子數(shù)目正常，活動(dòng)力好，比較清潔的精液標(biāo)本或向前運(yùn)動(dòng)精子總數(shù)（a+b）級(jí)低于200萬(wàn)的病人，雖然用非梯度離心法處理精液活率會(huì)增加，但I(xiàn)solate對(duì)精液有一定的影響，所以兩次洗滌法適合精子活力尚可、精液不液化的患者，但是多次的洗滌和離心會(huì)對(duì)精子微觀結(jié)構(gòu)造成破壞，同時(shí)長(zhǎng)時(shí)間的操作會(huì)增加活性氧的含量[3]。精液粘稠度高或不液化不適宜上游法，因?yàn)榫颖仨毧朔亓?lái)游動(dòng)，雖然上游法處理的精液可達(dá)到100％，但一般上游法的回收率較低。Isolate非連續(xù)梯度離心法適合正常精液、精液極度粘稠、精子密度低下及精子活動(dòng)力低的精液標(biāo)本[4]，離心效果和臨床妊娠率較高[5]，但是，由于不可能將離心液的成分清除徹底，有可能對(duì)受孕造成影響。

在以上方法使用中，盡量本著去繁就簡(jiǎn)的原則，如果一種方法解決不了時(shí)，可使用兩種或兩種以上的方法綜合應(yīng)用來(lái)提高優(yōu)化效果。

參考文獻(xiàn)

1 Carrel DT，Ewing L，Moder C，el a1．An evaluation of Various treatments to increase sperm penetration capacity for potential use in an in vitro fertifization program[J]．Fertil Steril，1992，57：134-136．

2 莊廣倫，周燦權(quán)，梁曉燕．現(xiàn)代輔助生育技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005，6．

3 商學(xué)軍，熊承良，夏文家，等．活性氧與弱精子癥[J]．國(guó)外醫(yī)學(xué)?計(jì)劃生育分冊(cè)，2001，(5)20：18-20．

4 BeerninkEJ，SouthwickGJ，YatesCD，et al．Sex preselection through albumn separation of sperm [J]．Fertil Steril，1993，59(2)：382-386.

5 Xu L，Lu RK，Zheng YL，et al．Comparative study on efficacy ofthree sperm —separation techniques[J]．Asia J Androl，2000，2(2)：131-134．

［收稿日期：2009-03-02］