楊婷

摘要：通過介紹人工授精技術(shù)的發(fā)展，簡(jiǎn)述人工授精技術(shù)的操作程序，并指出人工授精技術(shù)存在的問題，并對(duì)該技術(shù)的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。旨在為實(shí)際的奶牛人工授精操作提供部分技術(shù)指導(dǎo)和參考。

關(guān)鍵詞：奶牛；人工授精；應(yīng)用前景

中圖分類號(hào)：S823.3+4 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1007-273X（2015）08-0050-02

采用人工授精技術(shù)，可以使優(yōu)秀種公牛冷凍精液大面積推廣，迅速提高后代的生產(chǎn)水平，避免牛群繁殖疾病的交叉?zhèn)魅?，可防止各種疾病，提高供配種效率，降低牛群管理成本。

1 人工授精技術(shù)的發(fā)展歷程

1938年至1942年間， 精子冷貯技術(shù)取得了第一次突破。將人類精液用快速冷凍法貯存于液態(tài)氮中（-196 ℃）， 復(fù)溫后存活率為20%～40%， 改進(jìn)技術(shù)后可達(dá)更高。但精子在冷貯過程中不可避免地受到了損傷。1949年，波爾用甘油稀釋雞的精液， 在酒精干冰（-79 ℃）下冷凍， 使部分精子保持存活， 可稱為精子冷貯技術(shù)的第二次突破。此后， 由于精液冷凍保存技術(shù)的逐步成熟， 使家畜人工授精技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用又進(jìn)入了一個(gè)新階段。20世紀(jì)70年代以來， 牛的人工授精中用冷凍精液幾乎完全取代了用新鮮精液， 甚至用冷凍保存20多年的精液給母牛輸精也成功生下了小牛。1980年， 中國(guó)采用冷凍精液授精的奶牛已占90%以上[1]。

2 人工授精技術(shù)要點(diǎn)

2.1 發(fā)情鑒定、適時(shí)配種

2.1.1 發(fā)情鑒定 母牛的發(fā)情鑒定是適時(shí)配種和提高人工授精率的重要前提。凡是接受其他牛（包括母牛）爬跨和陰部流出透明分泌物有15 cm以上的，就可以判定為發(fā)情牛。出現(xiàn)外陰紅腫、頻頻叫喚、弓腰舉背、排尿、追趕其他牛只時(shí)就要留意和識(shí)別發(fā)情奶牛，通?？赏ㄟ^外部行為進(jìn)行觀察，可總結(jié)為“五看”：一看外部表現(xiàn)。發(fā)情初期的母牛興奮不安、反應(yīng)敏感、哞叫，不接受其他牛爬跨；發(fā)情盛期則接受爬跨，被爬跨時(shí)舉尾，四肢站立不動(dòng)。二看外陰的變化。母牛發(fā)情時(shí)，陰戶由微腫而逐漸腫大飽滿，柔軟而松弛，繼而陰戶由腫脹慢慢消退，縮小而顯出皺褶。三看陰道黏膜和子宮頸口的變化。發(fā)情初期陰道壁因充血而潮紅有光澤；發(fā)情盛期子宮頸紅潤(rùn)，頸口開張，約能容納一個(gè)手指；末期陰道黏膜充血、潮紅現(xiàn)象逐漸消退，子宮頸口慢慢閉合。四看陰戶流出黏液的變化。發(fā)情初期排出的黏液清亮，像蛋清；發(fā)情盛期母牛陰戶排出如玻璃棒樣，具有高度的黏性，易粘于尾根、臀端或后肢飛節(jié)處的被毛上；排卵前排出的黏液逐漸變白而濃厚黏稠，量也減少；黏性又變差，可用拇指和食指沾取少量黏液，若牽拉5～7次不斷，此時(shí)母牛已接近排卵，應(yīng)在3～4 h內(nèi)輸精，若牽拉8次以上不斷者為時(shí)尚早，3～5次即斷則為時(shí)已晚。五看產(chǎn)奶量。大多數(shù)母牛在發(fā)情時(shí)，產(chǎn)奶量均有所下降[2]。

2.1.2 適時(shí)配種 對(duì)鑒定發(fā)情的牛要進(jìn)行適時(shí)配種。研究表明，在發(fā)情期的前期進(jìn)行配種，所產(chǎn)母牛比例高，繁殖率不受影響；而在發(fā)情期的后期進(jìn)行授精，所產(chǎn)公牛的比例高，并且對(duì)繁殖率有不良影響。通常9時(shí)以前發(fā)現(xiàn)發(fā)情，當(dāng)日午后配種；9～14時(shí)發(fā)現(xiàn)發(fā)情，當(dāng)日晚配種；下午或晚上發(fā)現(xiàn)發(fā)情，次日早晨配種。配種時(shí)還應(yīng)注意個(gè)體差異，如體弱、老齡、肢蹄有毛病等不好確定發(fā)情時(shí)間的牛，提早排卵或排卵延遲的牛，應(yīng)進(jìn)行直腸檢查來確定宜時(shí)的配種時(shí)間。當(dāng)發(fā)情母牛陰戶紅腫、黏液透明、流出呈棒狀，直腸檢查時(shí)，卵泡發(fā)育成熟，泡壁變薄，即為最佳輸精時(shí)間[3]。

2.2 精液準(zhǔn)備

凍精品質(zhì)檢查方法：取凍精液前，先將1～2 mL稀釋液倒入已消毒的小瓶?jī)?nèi)，置水浴鍋中加溫至40 ℃。經(jīng)消毒后的玻棒蘸取少許解凍精液，置顯微鏡載玻片上進(jìn)行鏡檢。冷凍精液解凍后精子活力不低于0.35，精子復(fù)蘇率不低于50%。精子畸形率不高于20%。精子頂體完整率不低于40%，無病原微生物[4]。

2.3 凍精解凍和輸精技術(shù)

2.3.1 精液解凍 精液解凍時(shí)要做到快取、快投、快融解。用鑷子從液氮罐中迅速取出1支細(xì)管凍精，立即投入到38～40 ℃的溫水中，擺動(dòng)10 s左右使其融化，擦干細(xì)管上的水珠，用細(xì)管剪剪掉細(xì)管封口端1 cm左右，裝入輸精槍外套中，細(xì)管凍精封口端在前，棉塞端朝后。細(xì)管凍精直接放入（38±2） ℃水中解凍。精液解凍后必須保持所要求的溫度，嚴(yán)防在操作過程中溫度出現(xiàn)回升或回降，冷凍精液解凍后應(yīng)在1 h 內(nèi)輸精[5]。

2.3.2 輸精消毒 人工授精人員操作前必須剪平指甲、洗凈消毒，并戴上乳膠手套、涂上潤(rùn)滑劑。人工授精器械使用前后必須嚴(yán)格消毒。玻璃器械先用溫肥皂水洗刷后，用清水沖洗，然后蒸氣消毒10～15 min。金屬器械先用肥皂水洗凈后，清水沖洗；使用前再用清水沖洗，然后經(jīng)酒精火焰消毒。為防止疾病傳播，必須做到每頭牛用1支輸精管，嚴(yán)禁使用未經(jīng)消毒處理的輸精器。

2.3.3 輸精技術(shù) 配種時(shí)左手戴好長(zhǎng)臂手套，用肥皂水沾濕后插入母牛直腸，握住子宮頸的入口處，同時(shí)胳膊向下用力開陰門，右手持輸精槍由陰門插入陰道，先向上斜插一段，避開尿道口，而后平插，一直插到子宮頸口。此后要雙手配合把輸精槍前端引入子宮頸管內(nèi)，接著再往里插，穿過2～4道皺褶樣的螺旋狀組織就進(jìn)入了子宮體，即可將精液注入子宮體基部。注入精液時(shí)，要把輸精槍稍微往后拉一下，避免輸精槍口被阻。如果發(fā)現(xiàn)大量精液殘留在輸精槍內(nèi)，要重新輸精。輸精時(shí)推射速度不宜過快，應(yīng)一邊推進(jìn)，一邊緩緩活動(dòng)輸精槍。輸精完畢后，應(yīng)用左手捏住陰唇下部有節(jié)奏地按摩幾下，這樣可以刺激陰蒂，提高母牛的興奮性，從而提高受胎率。授精結(jié)束后應(yīng)及時(shí)填寫授精記錄[4]。

2.4 解凍后精液的保存

一般常溫情況下放置1 h，精液活力無明顯變化，但在氣溫低于8 ℃時(shí)應(yīng)注意保溫；高于30 ℃時(shí)，將精液放置在涼水中降溫，延長(zhǎng)精子的保存時(shí)間。

2.5 重視早期妊娠檢查，注意復(fù)配

母牛配種后及時(shí)進(jìn)行妊娠檢查。采用直腸檢查，觸摸子宮角的形狀、大小、質(zhì)地變化和卵巢、孕動(dòng)脈的變化，可以診斷出妊娠時(shí)間超過30 d以上的奶牛。對(duì)已妊娠的母牛加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，防流保胎，對(duì)未妊娠的母牛要查出原因，采用相應(yīng)措施及時(shí)補(bǔ)救。

3 人工授精技術(shù)存在的問題及展望

3.1 發(fā)情鑒定中存在的問題

牛發(fā)情鑒定的目的是為了把發(fā)情母牛找出來，以及時(shí)配種、提高受胎率。但要注意以下情況。

3.1.1 安靜發(fā)情 安靜發(fā)情又稱安靜排卵，即母牛無發(fā)情征狀，但卵泡能發(fā)育成熟并排卵。母牛分娩后第一個(gè)發(fā)情周期以及帶仔的母牛或者每日擠奶次數(shù)多的母牛，年輕或體弱的母牛均易發(fā)生安靜發(fā)情。

3.1.2 假發(fā)情 母牛只有外部發(fā)情表現(xiàn)而不排卵，但突然有性欲表現(xiàn)，如接受其他牛的爬跨，但陰道無黏液，子宮頸口閉鎖。多數(shù)是患有子宮炎、陰道炎和卵巢機(jī)能不全的牛常有此表現(xiàn)。

3.1.3 持續(xù)發(fā)情 母牛連續(xù)發(fā)情不止，有的持續(xù)一周以上，其原因是卵巢囊腫，即卵泡不斷發(fā)育，使母牛發(fā)情而不排卵，所以表現(xiàn)持續(xù)發(fā)情和卵泡交替發(fā)育，即兩側(cè)卵巢交替有卵泡發(fā)育會(huì)使母牛發(fā)情而不排卵。

3.1.4 孕期發(fā)情 直腸檢查時(shí)能摸到胎兒，但有性欲表現(xiàn)，接受其他牛的爬跨，但陰道無黏液。其原因不清，但千萬不能配種。

3.2 人工授精過程中存在的問題

3.2.1 消毒不嚴(yán) 授精之前如果疏忽了消毒這一環(huán)節(jié)就容易出現(xiàn)生殖道的疾病，子宮炎等疾病，影響了受胎率：①器材使用前后都要洗液刷洗，利用高壓蒸汽或煮沸；②外陰消毒，配種前母牛外陰部清水沖洗，再用0.1%的高錳酸鉀溶液清洗；③洗手消毒，最好使用消毒皂和流水洗手[4]。

3.2.2 解凍精液注意事項(xiàng) 提取細(xì)管放入解凍液時(shí)，一定要快、準(zhǔn)。細(xì)管精液剪口放入輸精槍后槍頭略高放置，以避免精液流出，否則影響精子活力和受胎率。

3.2.3 適時(shí)輸精 絕大多數(shù)的配種員都是通過觀察母牛發(fā)情后確定輸精時(shí)間，早上發(fā)情下午配，下午發(fā)情次日早上配，這樣的方法有一定的道理，但不夠準(zhǔn)確，還需結(jié)合以下幾點(diǎn)來準(zhǔn)確把握輸精時(shí)間：①母牛神態(tài)由不安轉(zhuǎn)為安定，即發(fā)情表現(xiàn)開始轉(zhuǎn)弱；②外陰部腫脹開始消失，子宮頸稍有收縮，黏膜由潮紅變?yōu)榉奂t或紫青色；③黏液量由多到少且成渾濁狀；④卵泡體積不再增大，皮變薄有彈力，泡液波動(dòng)明顯，有一觸即破之感。

3.2.4 防治母牛生殖器官的各種疾病 應(yīng)及早治療母牛的子宮炎、乳房炎、各種不孕癥等。母牛的不孕癥除了輸精液部位不正確外，還有母牛自身的生殖器官發(fā)育不正常，子宮頸狹窄、位置不正、陰道狹窄等原因。是因?yàn)檩斁僮魇д`的應(yīng)加強(qiáng)學(xué)習(xí)、及早改正；是母牛自身疾病的應(yīng)找出原因、及早治療。母牛受胎率除了自身的不孕癥以外，許多輸精員在牛人工授精技術(shù)的操作上不規(guī)范，造成母牛生殖道損傷不僅降低了受胎率、擴(kuò)大了胎間距，還大大降低了奶牛的產(chǎn)奶量，影響了經(jīng)濟(jì)效益。

4 小結(jié)

當(dāng)前，中國(guó)奶牛人工受精技術(shù)已經(jīng)很普及了，這對(duì)我國(guó)奶牛改良起到了很重要的作用，良種覆蓋率不斷提升，奶牛的單產(chǎn)量也有很大程度的提高，為我國(guó)的國(guó)民經(jīng)濟(jì)發(fā)展起到了推動(dòng)作用。但是，必須清醒地看到，許多輸精員在奶牛人工授精的操作上存在問題，給畜牧生產(chǎn)帶來很大的損失。具體說來，不規(guī)范的牛人工授精方法會(huì)造成生殖道疾病，同時(shí)也會(huì)傳播生殖道疾病，降低受胎率，降低奶牛的產(chǎn)奶量，影響奶牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。定時(shí)人工授精技術(shù)可以獲得較高的受胎率。

參考文獻(xiàn)：

[1] 孫長(zhǎng)青.動(dòng)物人工授精的意義與程序[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2014（5）：55.

[2] 顧桂華.顧國(guó)慶.奶牛的人工授精技術(shù)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2015（2）：66.

[3] 王玉亮 奶牛的人工授精技術(shù)要點(diǎn)[J].中國(guó)奶牛，2012（3）：53-55.

[4] 胡益源，王俊良.奶牛人工授精的關(guān)鍵技術(shù)[J].河南畜牧獸醫(yī)：綜合版，2012（10）：11-13.

[5] 巴特爾，孫 偉，蘇 和，等. 用荷斯坦奶牛性控精液生產(chǎn)體內(nèi)性控胚胎[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（4）：68-74.