郭麗麗　劉近春

【摘要】 目的 探討趨化因子受體CXCR4及血管內(nèi)皮生長因子VEGF在食管鱗狀細胞癌組織中的表達情況及其與食管鱗癌各臨床病理資料的關(guān)系。方法 免疫組化S-P染色法檢測85例食管癌標本中CXCR4、VEGF的表達，并對其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系進行分析。結(jié)果 CXCR4、VEGF在食管鱗癌中的陽性表達率分別為45.9%、50.5%，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCR4、VEGF的表達水平均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。而且，CXCR4陽性表達與VEGF陽性表達呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 CXCR4和VEGF的表達與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，兩者在食管癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中可能起著協(xié)調(diào)作用。

【關(guān)鍵詞】 食管癌；CXCR4；VEGF；免疫組化染色

Expressions and clinical significance of CXCR4 and VEGF in esophageal squamous cell carcinoma tissue

GUO Li-li,LIU Jin-chun.Graduate,Shanxi Medical University,Taiyuan,Shanxi 030000,China

【Abstract】 Objective This study was designed to observe the expressions of chemokine receptorCXCR4 and vascular endothelial growth factor(VEGF)in esophageal squamous cell carcinoma tissue and study the relationship between the expressions of CXCR4、VEGF and different clinicopathlogical characteristics.Methods Immuohistochemical staining was used to detect the expressions of CXCR4 and VEGF in 85 samples of esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)tissue.The relationship between CXCR4 and VEGF expressions was analyzed.Results The positive rates ofCXCR4 and VEGF in ESCC were 45.9%and 50.5%respectively.The expression rates of CXCR4 and VEGF were higher in the group of lymph node metastasis than those in the group without lymph node metastasis.CXCR4 expression was significantly correlated with VEGF expression(P<0.01).Conclusion The expressions of CXCR4 and VEGF were closely correlated with lymph node metastasis of ESCC.Both in the incidence and metastasis of esophageal cancermay play a coordinating role.

【Key words】Esophageal cancer；Chemokine receptor CXCR4； Vascular endothelial growth factor；Immuohistochemical stainin

在我國，食管癌的發(fā)病率和死亡率僅次于胃癌，居消化道腫瘤第2位。臨床上主要采取以手術(shù)為主的綜合治療，但其5年生存率僅為在20%~30%左右。而導致治療失敗、患者死亡的主要原因常由腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移引起。因此，食管癌復發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)機制的研究具有重要意義。最近研究表明CXCR4、VEGF與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究采用免疫組織化學方法檢測趨化因子受體4(CXCR4)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在食管鱗癌組織中的表達，對影響食管癌淋巴轉(zhuǎn)移的某些因素進行初步探討。

1 材料與方法

1.1 標本收集及臨床資料 隨機選擇長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院2006年1月12日至2008年5月17日食管癌根治術(shù)后石蠟包埋組織85例。男57例，女28例，年齡42~75歲，平均(59±6)歲。標本均經(jīng)病理學確診，均為鱗狀細胞癌。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例；高分化鱗癌25例，中分化鱗癌39例，低分化鱗癌21例；侵及外膜的54例，未侵及外膜的31例。所有患者送病理前均未放療和化療，有完整的臨床和病理資料。另取20例經(jīng)病理確診為正常食管粘膜的癌旁組織切片為對照。

1.2 試劑來源采用免疫組化SP法，鼠抗人CXCR4單克隆抗體為R&D公司產(chǎn)品(由上海晶美公司代理購買)。鼠抗人VEGF單克隆抗體，SP試劑盒，DAB顯色劑，均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。其他試劑如：PBS溶液，檸檬酸修復液，抗體稀釋液，梯度酒精等均由長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院病理科提供。

1.3 方法全部石蠟標本連續(xù)切片，厚度為4 μm，免疫組化染色采用SP法，所有標本均在同一條件下嚴格按試劑盒說明書操作，DAB顯色，以已知陽性切片作陽性對照，以PBS代替一抗進行陰性對照。

1.4染色結(jié)果評定 在光學顯微鏡下觀察以細胞膜、細胞漿或胞核染成棕黃色或棕褐色為陽性細胞。每張切片隨機選取5個視野，分別計數(shù)陽性細胞數(shù)與腫瘤細胞總數(shù)的比值，從陽性腫瘤細胞百分數(shù)和染色強度兩個方面加以評分。染色強度通過觀察腫瘤細胞與間質(zhì)細胞相比較，定為無著色：0分，淺黃色1分，黃色：2分，棕黃色3分。根據(jù)陽性腫瘤細胞占總的觀察細胞的<10%、10%~49%、50%~74%、>75%分別定為0、1、2、3分，兩項最后相加，0~1分為陰性，2分為弱陽性(+)，3~4分為中等陽性(++)，5~6分為強陽性(+++)?！?~+++”定義為陽性表達。所有切片都由兩位高級病理醫(yī)師對免疫組化的染色結(jié)果進行評定，如評分相差一個等級以上需共同協(xié)商確定。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，各組之間樣本率的比較采用χ²檢驗，各指標相關(guān)分析采用Spearman等級相關(guān)。本研究采用雙尾檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌和癌旁組織CXCR4、VEGF蛋白的表達情況。

2.1.1 陽性染色特點 CXCR4蛋白在39例食管癌腫瘤細胞及2例癌旁粘膜細胞有表達，陽性表達定位于細胞質(zhì)或(和)細胞膜，呈淡黃色至棕黃色，部分腫瘤細胞細胞核也有染色。VEGF蛋白在43例食管癌腫瘤細胞及3例癌旁粘膜細胞有表達，陽性表達定位于細胞漿中，呈棕黃色顆粒；部分腫瘤細胞細胞膜也有染色；在強陽性染色的癌組織附件可見淋巴管內(nèi)皮著色。

2.1.2 食管癌和癌旁正常粘膜組織CXCR4、VEGF蛋白的表達比較,見表1。

2.2 食管癌組織CXCR4和VEGF蛋白的表達與臨床病理特征的關(guān)系 由表2可看出，食管癌組織CXCR4、VEGF蛋白的表達：①在不同性別、年齡、侵潤深度、分期及腫瘤細胞的分化程度組別差異無統(tǒng)計學意義，P>0.05；②與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，P<0.05。

2.3 CXCR4、VEGF蛋白表達間的相關(guān)性 本組資料食管癌組織中，CXCR4與VEGF蛋白表達間的相關(guān)情況如(表3)所示，應(yīng)用Spearman相關(guān)分析表明，CXCR4與VEGF蛋白表達存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r=0.436，P<0.05)。

3 討論

CXCR4是趨化因子基質(zhì)細胞衍生因子(SDF-1)的特異性受體。研究表明CXCL12與CXCR4相互作用構(gòu)成的生物學軸，可以傳導特定的信號，介導不同的效應(yīng)，CXCL12-CXCR4反應(yīng)軸參與了機體的多種生理和病理過程如造血系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的發(fā)育和成熟、血管生成、造血干細胞的歸巢、炎癥細胞的活化和遷移等^[1]。此外，CXCL12-CXCR4生物學軸如同牽引機一樣在某些腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的導向、驅(qū)動和定位作用。其分子機制可能是高表達CXCR4的腫瘤細胞，在SDF1趨化和牽引下，逆濃度梯度轉(zhuǎn)移至作為配體產(chǎn)生源的某些器官，從而形成器官特異性的轉(zhuǎn)移。目前已分別在乳腺癌、非小細胞肺癌和橫紋肌肉瘤等的研究中得到初步證實^[2]，然而，有關(guān)CXCR4表達與食管癌患者的臨床相關(guān)性研究較少，國內(nèi)尚未報道。Kawamata H等^[3]用微點陣分析cDNA，表明在食管癌中CXCR4高表達。Jussuf等^[4]研究發(fā)現(xiàn) CXCR4的表達與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且多因素分析CXCR4的表達是患者生存的獨立危險因素。Gock I^[5]等認為 CXCR4可能成為食管癌治療新的靶點。本研究中，筆者采用免疫組化S-P法檢測85例食管鱗癌及20例癌旁正常食管粘膜組織中CXCR4蛋白的表達情況，陽性表達率分別為45.5%、10%，差異有統(tǒng)計學意義，提示CXCR4可能與食管癌發(fā)病有關(guān)。筆者也發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCR4的陽性表達率(60.4%)，顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達率(27.0%)，提示食管癌組織表達CXCR4可能與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。一般認為，不同的器官存在不同的趨化因子，對特異性表達相應(yīng)受體的腫瘤細胞產(chǎn)生不同的趨化或寡集作用，從而導致腫瘤細胞選擇性地向相應(yīng)器官轉(zhuǎn)移。在對乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細胞高表達CXCR4，從而易于向表達其配體的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移^[6]。由此推測，食管癌腫瘤細胞從母瘤上脫落后，經(jīng)遷移，容易趨向并滯留于表達CXCR4配體的部位，諸如淋巴結(jié)、肝臟等部位，在其內(nèi)增殖而形成轉(zhuǎn)移瘤。

血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是最重要的血管源性生長因子，它可直接作用于血管內(nèi)皮細胞，刺激其有絲分裂的發(fā)生，從而促進新生血管的生長，并可通過增加血管的通透性，為血管內(nèi)皮細胞的遷移及腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。本研究中VEGF的表達量在正常食管黏膜中明顯低于癌組織中,并且在癌組織的表達集中于腫瘤浸潤的前緣，說明ESCC的浸潤與VEGF的高表達密切相關(guān)。進一步分析顯示，VEGF的表達量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移浸潤有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF表達量明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，說明VEGF的表達與食管癌的淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

近年國外研究發(fā)現(xiàn)CXCL12/CXCR4生物學軸除了在腫瘤定向轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用外，還可促進腫瘤細胞中VEGF的分泌，CXCR4可能通過上調(diào)VEGF的表達，在腫瘤的生長、侵潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。黃俊輝、李洋等^[7]學者認為乳腺癌中存在VEGF-CXCR4-SDF-1信息通路。本研究結(jié)果表明，人食管癌中CXCR4與VEGF的表達呈正相關(guān)，據(jù)此推測在人類食管癌中也可能存在類似于乳腺癌的VEGF-CXCR4-SDF-1信息通路，兩者的表達可能存在某種相關(guān)關(guān)系。

本實驗結(jié)果表明，CXCR4、VEGF在食管癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中均呈高表達，且兩者高度相關(guān)，提示CXCR4在食管鱗癌中的轉(zhuǎn)移作用與VEGF介導的新生血管形成密切相關(guān)。且為食管癌的治療提供了新思路。近年來許多動物模型實驗證實，中和CXCR4受體可抑制血管生成，發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)并抑制腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移^[8，9]，因此抑制CXCR4生成或阻斷其與配體結(jié)合可能會為食管癌治療帶來進展。

參 考 文 獻

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