張永梅 李 霞 盧兵遠(yuǎn) 李 芬 李豐宜

摘要于2008年秋季進(jìn)行了日照市亞I-O型口蹄疫疫苗免疫效果檢測,結(jié)果表明,日照市牛亞I型口蹄疫和O型口蹄疫免疫合格率都達(dá)到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求。對豬O型口蹄疫免疫合格率偏低的原因進(jìn)行了分析,建議要針對檢測情況抓緊時間組織補免,確保免疫程度達(dá)到1 000%。

關(guān)鍵詞豬O型口蹄疫;牛亞I型口蹄疫;牛O型口蹄疫;免疫效果;檢測

中圖分類號S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739(2009)08-0175-01

2008年11月,日照市秋季重大動物疫病防疫結(jié)束后,為及時對免疫效果進(jìn)行檢測,筆者按照《山東省2008年高致病性禽流感、口蹄疫等主要動物疫病監(jiān)測方案》要求,對全市的種畜禽場、養(yǎng)殖場、活禽交易市場、豬屠宰場進(jìn)行集中采樣檢測。隨機抽查了16個場(戶),采集血清樣品232份,其中7個養(yǎng)豬場、6個奶牛場、3個屠宰場。

1檢測方法

采用蘭州獸醫(yī)研究所研制的亞州I型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測試劑盒(生產(chǎn)批號:2008052802)、O型口蹄疫液相阻斷ELISA檢測試劑盒(生產(chǎn)批號2008052801)進(jìn)行檢測。

2器材的準(zhǔn)備

亞I-O型口蹄疫液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測試劑盒,5～50μL移液器:多道與單道各數(shù)把,37℃溫箱,酶標(biāo)儀,其他試驗耗材。

3試驗操作步驟

3.1包被固相

用包被緩沖液稀釋兔抗血清至工作濃度,在ELISA板每孔加50μL。室溫振蕩30min,然后置濕盒中室溫過夜。

3.2抗原-抗體(對照和待檢血清)的預(yù)告結(jié)合(液相阻斷)

各對照和待檢血清在LB-ELISA中的布局,在第1行1～10孔加入不同樣品,按12.5μL樣品+87.5μL PBST工作液,按列倍比稀釋。封板后室溫振蕩30min,然后置濕盒中4℃過夜。

3.3轉(zhuǎn)移抗原-血清混合液

將包被的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。將抗原-血清混合液反應(yīng)板取出,室溫放置20～30min。將抗原-血清混合液轉(zhuǎn)移到ELISA板相應(yīng)各孔中,每孔50μL,置37℃溫箱1h。

3.4加檢測抗體

將裝有抗原—血清混合液的ELISA板取出,洗滌5次,扣干。以豚鼠抗血清稀釋液將豚鼠抗血清稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.5加酶結(jié)合物

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。以PBST工作液將酶結(jié)合物稀釋至工作濃度,混勻后每孔加50μL,置37℃溫箱1h。

3.6加底物溶液

取出ELISA板,洗滌5次,扣干。加入底物溶液,每孔加50mL,置37℃溫箱15min。

3.7加終止液

如表1所示,每孔加50μL終止液,輕輕振蕩混勻,在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

4檢測結(jié)果

如表1所示,本次集中檢測,共抽查了16個場戶,采集血清樣品232份。其中7個種豬場、3個屠宰場,采樣105份,進(jìn)行O型口蹄疫檢測,合格81份,免疫合格率為77.1%;6個牛場,采樣127份,進(jìn)行O型口蹄疫檢測,合格118份,免疫合格率為92.9%;進(jìn)行亞I型檢測,合格107份,免疫合格率為84.3%。

5檢測結(jié)果分析

根據(jù)本次檢測結(jié)果,日照市牛亞I型和O型口蹄疫免疫合格率都能達(dá)到80%以上;而豬O型口蹄疫免疫合格率偏低,剛達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求,明顯低于2007年,屠宰場的表現(xiàn)尤其明顯。其主要原因可能有:①在秋防集中免疫過程中,4種強制免疫疫苗,有3種是豬用疫苗,3種疫苗的免疫必須間隔一定的時間;加上近幾年來高致病性豬藍(lán)耳病危害性已經(jīng)引起了養(yǎng)殖場戶的高度重視,豬藍(lán)耳、豬瘟疫苗大都優(yōu)先免疫,而將口蹄疫疫苗免疫拖后,免疫時間距離采樣時間太短。②本次抽查加大了豬屠宰場的比重,而屠宰場豬的來源多是農(nóng)村的散養(yǎng)戶,其免疫密度低于養(yǎng)殖場。③奶牛場戶的免疫質(zhì)量較好,但免疫效果不平衡。目前,日照市注射的都是亞I-O型口蹄疫二聯(lián)苗,但二者的免疫效果卻不一樣,O型疫苗的免疫效果明顯好于亞I,可能是兩毒株的免疫原性有差異或由于常期使用O型口蹄疫疫苗有關(guān)。另外,本次抽查的牛場除1個肉牛場外,其他都是奶牛場戶,說明日照市奶牛場戶的免疫質(zhì)量比較好。

6建議

根據(jù)本次檢測結(jié)果,日照市豬O型、牛亞I-O型口蹄疫免疫合格率雖然都能達(dá)到農(nóng)業(yè)部70%以上的要求,但有關(guān)區(qū)縣應(yīng)針對各養(yǎng)殖場的檢測情況抓緊時間組織補免,確保免疫密度達(dá)到100%,以達(dá)到重大動物疫病的防控效果。