[摘要] 目的 觀察變態(tài)反應(yīng)性鼻炎SD大鼠血清內(nèi)源性硫化氫(H2S)、一氧化氮(NO)表達(dá)水平變化，并探討其意義。方法 20SD大鼠只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組，用甲苯-2，4-二異氰酸酯建立變應(yīng)性鼻炎大鼠模型，用敏感硫電極法檢測(cè)血清H2S水平，酶法檢測(cè)血清一氧化氮水平，進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 對(duì)照組血清內(nèi)源性H2S:3.01μmol/L，NO:38.4μmol/L，模型組血清內(nèi)源性H2S:4.25μmol/L，NO:46.2μmol/L，對(duì)照組低于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 變態(tài)反應(yīng)性鼻炎大鼠血清內(nèi)源性H2S、NO表達(dá)水平增高，可能對(duì)鼻粘膜的變態(tài)反應(yīng)性炎癥起到調(diào)節(jié)作用，起到保護(hù)鼻粘膜的作用。

[關(guān)鍵詞] 硫化氫;一氧化氮;變應(yīng)性鼻炎

[中圖分類號(hào)] R765.22[中圖分類號(hào)] A[文章編號(hào)] 1673-9701(2009)24-47-02

H2S和NO是機(jī)體內(nèi)正常表達(dá)的氣體信號(hào)分子，具有廣泛的生理作用，并對(duì)機(jī)體免疫功能，炎癥反應(yīng)等具有調(diào)節(jié)作用，有研究表明[1]，在變態(tài)反應(yīng)性鼻炎時(shí)NO及INOS表達(dá)會(huì)發(fā)生改變，參與變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的發(fā)病及調(diào)節(jié)，本文就變態(tài)反應(yīng)性鼻炎大鼠血清H2S和NO表達(dá)水平變化進(jìn)行研究，并探討其機(jī)制及意義。

1資料與方法

1.1主要儀器及試劑

甲苯-2，4-二異氰酸酯(Toluene 2， 4-diisocyanate， 2， 4- TDI)(美國(guó)Sigma公司)，橄欖油(中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上海試劑公司)，水合氯醛(北京化學(xué)試劑公司)，721型分光光度計(jì)(上海精密儀器儀表有限公司)，敏感硫電極(PAG/SI上海雷磁)，離心機(jī)3K30型(德國(guó)Sigma公司)，硫氫化鈉(南京建成生物工程研究所)，抗壞血酸南京建成生物工程研究所)，乙二胺四乙酸(南京建成生物工程研究所)。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與模型建立

30只健康SD大鼠，(購(gòu)自鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)6～8周齡，體重(200±25)g，雄性，隨機(jī)數(shù)字表發(fā)分為兩組，對(duì)照組、造模組，用橄欖油將2，4-TDI配成濃度為10%溶液作為致敏劑滴鼻，每側(cè)5μL，每日1次，共致敏7次。此后每2日1次，共致敏4次，致敏時(shí)間共15d。從第1次給藥開(kāi)始記錄鼻部癥狀如鼻癢(致敏動(dòng)物用前爪抓鼻)、噴嚏、清涕，評(píng)分，疊加分?jǐn)?shù)，記總分?？偡殖^(guò)5分者模型成功，②激發(fā):致敏結(jié)束、模型成功后每2天用10% 2，4-TDI溶液滴鼻，激發(fā)1次，維持癥狀。鼻部癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[2]:①鼻癢:輕度，輕擦鼻幾次，1分;重度，抓撓鼻、面不止，到處擦磨，2分;②噴嚏:1～3個(gè)1分，4～10個(gè)2分，11個(gè)以上3分;③流清涕:流至前鼻孔1分，超過(guò)前鼻孔2分，流涕滿面3分。對(duì)照組給藥方法，藥品為單純橄欖油。

1.3標(biāo)本采集

最后一次激發(fā)24h后腹腔注射10%水合氯醛(0.6g/kg)麻醉小鼠，麻醉后經(jīng)中線無(wú)菌開(kāi)胸，剪開(kāi)心包膜，打開(kāi)心臟，取血2mL，于4℃2000r/min低溫離心10min，取血清保存于-70℃深低溫冰箱待測(cè)。

1.4血清內(nèi)源性H2S檢測(cè)

采用敏感硫電極法:配制標(biāo)準(zhǔn)硫離子溶液濃度分為1mol/L，分別稀釋至1、10、20、30、40、50、60、80μmol/L，測(cè)定S離子濃度后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，血清中加入抗氧化液使H2S、NaTris生成S2-，每次測(cè)定前將敏感硫電極及試管用去離子水沖洗3次，將敏感硫電極與參比電極一起浸入到樣品中，測(cè)定血清H2S濃度，待讀數(shù)穩(wěn)定后紀(jì)錄，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出H2S的濃度。

1.5血清NO檢測(cè)

采用硝酸銀還原酶法:在標(biāo)準(zhǔn)管及樣品管依次加入操作步驟:空白管加0.1mL雙蒸水，標(biāo)準(zhǔn)管加0.1mL標(biāo)準(zhǔn)液，樣品管加0.1mL血清，各管加0.1mL緩沖液，0.1mL硝酸還原酶，37℃孵育30min。加顯色劑A 0.5mL，顯色劑B 30.5mL，室溫靜置10min， 550mn比色，空白管調(diào)零，測(cè)定各管A值，按說(shuō)明書(shū)給定公式計(jì)算NO濃度(測(cè)定過(guò)程嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)及分析使用SPSS11.5軟件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ±s)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用方差分析。

2結(jié)果

模型組H2S及NO濃度同向升高，同對(duì)照組相比，具有顯著差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

3討論

H2S及NO是近年來(lái)相繼發(fā)現(xiàn)的氣體信號(hào)分子，對(duì)機(jī)體的生理功能具有廣泛的調(diào)節(jié)作用，在肝臟疾病，心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病中扮演著重要角色，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，H2S及NO對(duì)疾病狀態(tài)下機(jī)體的免疫功能及炎癥反應(yīng)起著調(diào)節(jié)作用，NO能直接介導(dǎo)趨化中性粒細(xì)胞及對(duì)內(nèi)皮誘發(fā)的血管收縮發(fā)揮反饋調(diào)節(jié)作用，而抑制內(nèi)皮素的生物合成，抑制肥大細(xì)胞增殖，脫顆粒，調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞釋放多種介質(zhì)[3]。NO活化無(wú)活性的GTP環(huán)化酶，致cAMP/ cGMP比值下降，能觸發(fā)過(guò)敏細(xì)胞釋放遞質(zhì)，導(dǎo)致過(guò)敏癥狀的發(fā)生[4]。NO可抑制嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophile granulocyte，EOS)的程序性死亡，引起EOS及其釋放的炎癥介質(zhì)的聚集，從而加重及延長(zhǎng)了變態(tài)反應(yīng)的程度及時(shí)間[5]。變應(yīng)性鼻炎時(shí)Thl激活產(chǎn)生大量NO，抑制其自身細(xì)胞因子的產(chǎn)生及增殖，形成負(fù)反饋環(huán)，從而限制自身激活增殖，對(duì)Thl/Th2的平衡具有調(diào)節(jié)作用[6]。H2S在炎癥反應(yīng)中具有明顯的抑制多形核中性白細(xì)胞聚集、減輕內(nèi)毒素引起的肺水腫和肺毛細(xì)血管通透性增高等炎癥反應(yīng)的作用，而且能有效減少丙二醛的產(chǎn)生，可能為一種炎癥抑制因子[7]。在本組試驗(yàn)中，模型組H2S與NO較對(duì)照組明顯升高，與周衛(wèi)東在試驗(yàn)中觀察到的NO變化一致，推測(cè)可能與變態(tài)反應(yīng)性鼻炎后及鼻粘膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)增強(qiáng)有關(guān)[1]，其次變應(yīng)性鼻炎時(shí)TH1細(xì)胞的增量上調(diào)，可能促進(jìn)了NO的合成，H2S主要由胱硫醚-β-合成酶(cystanthionine-β- synthetase，CBS)與胱硫醚-γ-裂解酶(cystanthionine-γ-splitting enzyme，CES)合成，目前尚未見(jiàn)關(guān)于CBS、CES在鼻粘膜表達(dá)的報(bào)道，其增高可能與變應(yīng)性鼻炎時(shí)局部的微循環(huán)改變及炎性介質(zhì)的釋放引起H2S表達(dá)上調(diào)有關(guān)，在變應(yīng)性鼻炎時(shí)NO表達(dá)增高能促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，介導(dǎo)過(guò)敏反應(yīng)，H2S的表達(dá)上調(diào)，可能與NO表達(dá)上調(diào)有關(guān)[8]，抑制局部的炎癥及過(guò)敏反應(yīng)，維持氣體信號(hào)的表達(dá)及作用平衡，其具體機(jī)制及其對(duì)鼻粘膜產(chǎn)生的作用有待進(jìn)一步研究。

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(收稿日期:2009-03-02)