劉忠德

摘要采用甲醇冷浸法進(jìn)行提取及濃縮，從臭椿中分離到提取物，并進(jìn)行了化學(xué)成分的初步分析和生物活性測(cè)定。根據(jù)化學(xué)分析初步推斷，臭椿葉提取液里含有生物堿、蒽醌類化合物、有機(jī)酸或酚類化合物和鞣質(zhì)、糖類、多糖和甙類；但不含有羥基香豆素、香豆素化合物、氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)、黃酮類成分。臭椿提取物對(duì)雜草水芹種子的發(fā)芽具有明顯的抑制作用。

關(guān)鍵詞臭椿提取物；化學(xué)成分；生物活性

中圖分類號(hào) O658 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739（2009）04-0011-02

我國(guó)對(duì)臭椿提取物的研究，主要集中于臭椿提取物對(duì)光肩星天牛取食、產(chǎn)卵的驅(qū)避作用，但在植物化感和除草活性方面的研究尚未見報(bào)道。本文主要采用甲醇冷浸法進(jìn)行提取及濃縮得到臭椿提取物，進(jìn)行化學(xué)成分初步分析和生物測(cè)定，為下一步分離、純化和應(yīng)用提供參考。

1材料與方法

1.1臭椿提取物的制備方法

準(zhǔn)確稱取臭椿葉粉碎干粉30g，分為3份（每份10g），分別用10倍體積的甲醇于室溫下浸泡72h后抽濾，殘?jiān)偌尤軇┙?，連續(xù)浸提3次，合并濾液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)減壓濃縮至稠膏狀。將膏狀物用甲醇溶解稀釋定容到50mL，然后分別裝入磨口棕色廣口瓶密封，置于-4℃冰箱中備用。

1.2臭椿提取物組分的化學(xué)初步分析

采用液-液分配法（圖1）對(duì)臭椿提取物進(jìn)行初步分離，量取15mL提取物，加入約10倍體積的蒸餾水溶解樣品，再于分液漏斗中分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取。選取活性物質(zhì)層——水部，對(duì)水部進(jìn)行化學(xué)成分預(yù)試驗(yàn)分析。

1.3 臭椿提取物的生物活性測(cè)定

試驗(yàn)設(shè)5個(gè)處理，即原液（1X）、稀釋2倍（2X）、5倍（5X）、10倍（10X）和對(duì)照（CK）。具體測(cè)定方法：在放有2層濾紙的潔凈9cm培養(yǎng)皿中，加入10mL不同濃度的提取物，待有機(jī)溶劑甲醇揮發(fā)后，加入10mL蒸餾水，均勻擺放30粒飽滿的待測(cè)水芹種子，對(duì)照組用10mL蒸餾水，同樣每個(gè)處理30粒水芹種子，重復(fù)3次，然后放入25℃的培養(yǎng)箱萌發(fā)。

2結(jié)果與分析

2.1臭椿提取物的化學(xué)成分分析

（1）糖類、多糖和甙類。采用α-萘酚試驗(yàn)法。取上述水萃取液1mL，加入10% α-萘酚乙醇試劑2~3滴振搖后，傾斜試管，沿管壁緩緩加入0.5 mL濃硫酸，使分2層。在2層交界面出現(xiàn)清晰的紫色光環(huán)，表明含有糖類、多糖和甙類。

（2）酚類和鞣質(zhì)。采用三氯化鐵試驗(yàn)方法。取上述水萃取液1mL，加醋酸酸化后，加1%的三氯化鐵試劑數(shù)滴，溶液呈現(xiàn)藍(lán)綠和藍(lán)黑色之間，表明含有酚類和鞣質(zhì)。

（3）有機(jī)酸類。①pH試紙?jiān)囼?yàn)。取上述水萃取液，以pH試紙檢查，pH值為4，呈酸性，表明含有有機(jī)酸或酚類化合物。②溴酚藍(lán)試驗(yàn)。取上述水萃取液點(diǎn)于濾紙片上，噴灑0.1%溴酚藍(lán)的70%乙醇溶液，在藍(lán)色背景上立即顯黃色斑點(diǎn)，表明含有機(jī)酸。

（4）黃酮類。采用三氯化鋁試驗(yàn)方法。取上述水萃取液點(diǎn)于濾紙片上，噴霧三氯化鋁試劑，干燥后，沒有呈現(xiàn)黃色斑點(diǎn)，并與紫外燈下觀察，沒有明顯熒光，表明沒有黃酮類成分。

（5）蒽醌類。采用堿液試驗(yàn)方法。取上述水萃取液1mL，加10%苛性堿試劑呈紅色，再加酸，使呈酸性，則紅色褪去，表明含有蒽醌類化合物。

（6）生物堿類。采用硅鎢酸試驗(yàn)方法。取上述水萃取液1mL，滴加幾滴鹽酸，再加硅鎢酸試劑2~3滴，可以看到產(chǎn)生黃色沉淀并有少部分結(jié)晶，表明含有生物堿。

（7）香豆素類。①熒光試驗(yàn)方法。取上述水萃取液點(diǎn)于濾紙片上，干燥后置于紫外燈下觀察，可以清晰地看見藍(lán)——綠色熒光，再噴霧1%氫氧化鉀試劑，熒光加強(qiáng)，表明不含有香豆素化合物。②三氯化鐵反應(yīng)。取上述水萃取液1mL，加三氯化鐵2~3滴，試劑不變色，表明不含有羥基香豆素。

（8）氨基酸、多肽與蛋白質(zhì)。采用茚三酮試驗(yàn)法。取上述水萃取液1mL，加0.2%茚三酮乙醇試劑2~3滴，搖勻，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，冷卻后溶液呈無色，表明不含有氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)。

2.2臭椿提取物對(duì)雜草水芹種子發(fā)芽率的影響

由圖2可以看出，水芹種子的發(fā)芽率隨著臭椿提取物濃度的降低而呈上升趨勢(shì)，其原液、2倍液、5倍液、10倍液發(fā)芽率分別為：0%、0%、0%、13.8%，與空白對(duì)照（CK）發(fā)芽率50.6%比較，表現(xiàn)出明顯的受抑制作用。

3結(jié)論與討論

（1）采用甲醇冷浸法進(jìn)行分離、提取、純化及濃縮能夠得到臭椿提取產(chǎn)物。根據(jù)化學(xué)分析初步推斷，臭椿葉提取液里含有生物堿、蒽醌類化合物、有機(jī)酸或酚類化合物和鞣質(zhì)、糖類、多糖和甙類；但不含有羥基香豆素、香豆素化合物、氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)、黃酮類成分。

（2）臭椿提取物對(duì)雜草水芹的發(fā)芽有明顯的抑制作用，表明提取物內(nèi)有對(duì)水芹具有抑制作用的活性物質(zhì)。因此，臭椿在生長(zhǎng)過程中，會(huì)產(chǎn)生一些物質(zhì)，對(duì)其他植物如水芹的生長(zhǎng)有一定的抑制作用，可以作為一種除草活性物質(zhì)進(jìn)行研究。

（3）臭椿提取物是混合物質(zhì)，該次試驗(yàn)僅進(jìn)行化學(xué)成分的初步測(cè)定，尚需要進(jìn)一步提純，最終篩選具有活性的物質(zhì)。

（4）試驗(yàn)只測(cè)定了臭椿提取物對(duì)水芹發(fā)芽率的影響，其是否影響水芹呼吸、核酸及有關(guān)酶的活性，有待于進(jìn)一步研究。

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