摘要：應(yīng)用組織學(xué)和組織化學(xué)方法對(duì)正常黃牛與乳腺炎黃牛乳腺不同部位的肥大細(xì)胞的數(shù)量、活力和組化性質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，乳腺炎黃牛乳腺組織中大量的炎性細(xì)胞浸染小葉間質(zhì)、腺泡及腺上皮細(xì)胞問、腺泡腔內(nèi)和乳導(dǎo)管及血管內(nèi)壁與周圍，并急劇增多，均極顯著高于正常乳腺(P＜0.01)。其中乳基部最高，均極顯著高于乳頭部和乳體部(P＜0.01)。腺泡結(jié)構(gòu)漸進(jìn)紊亂，小葉內(nèi)血管腔狹窄、變形。同時(shí)，乳腺肥大細(xì)胞及其脫顆粒的變化趨勢均與炎性細(xì)胞浸染變化相吻合。由此可見，肥大細(xì)胞參與了黃牛乳腺炎的病理進(jìn)程。

關(guān)鍵詞：乳腺炎；肥大細(xì)胞；黃牛

中圖分類號(hào)：S865.1⁺3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

乳腺炎是黃牛最重要的感染性疾病之一，不僅直接危害黃牛健康，影響奶的質(zhì)量，降低黃牛的生殖性能，而且應(yīng)用大量抗生素治療乳腺炎而出現(xiàn)的“含抗牛奶”已成為嚴(yán)重危害人們食用安全的污染食品。Sordilo等曾用白介素-2(IL-2)對(duì)奶牛乳腺炎進(jìn)行治療研究，但由于迄今為止尚不清楚IL-2與乳腺炎發(fā)病機(jī)制的關(guān)系，療效也不理想。而肥大細(xì)胞作為神經(jīng)－免疫－內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)過程中的一種關(guān)鍵細(xì)胞，參與機(jī)體多種生理和病理功能的調(diào)節(jié)。在急性炎癥時(shí)，肥大細(xì)胞通過脫顆粒釋放大量脂類炎癥介質(zhì)，如白三烯、腫瘤壞死因子、前列腺素和血小板活化因子等，也分泌NO，細(xì)胞因子、組胺、類胰蛋白酶、類糜蛋白酶、5-HT和趨化因子等免疫分子，參與免疫應(yīng)答格局的維系與調(diào)節(jié)，對(duì)局部及全身的炎性反應(yīng)起作用。近年來，肥大細(xì)胞及其分泌的活化介質(zhì)在消化系統(tǒng)疾病中的作用受到人們的關(guān)注，國內(nèi)外學(xué)者使用肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定劑及肥大細(xì)胞拮抗劑等對(duì)試驗(yàn)大鼠進(jìn)行預(yù)處理，發(fā)現(xiàn)這些方法可以對(duì)消化系統(tǒng)疾病，如重癥急性胰腺炎、特發(fā)性炎癥性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克隆氏病及膠原性結(jié)腸炎能起到一定的治療效果。但肥大細(xì)胞在黃牛乳腺炎發(fā)病機(jī)制中的作用尚未見報(bào)道。本研究應(yīng)用組織化學(xué)方法觀察乳腺炎黃牛乳腺肥大細(xì)胞的數(shù)量、活性、分布及組化性質(zhì)的變化，探討肥大細(xì)胞在黃牛乳腺炎發(fā)病過程中的可能作用，為黃牛乳腺炎的防治提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

正常黃牛乳腺4例與乳腺炎黃牛乳腺2例采自銀川市新城牛羊屠宰場。

阿爾辛藍(lán)(Alcian blue)和蕃紅O(Safranin O)均為Sigma產(chǎn)品，甲苯胺藍(lán)為Serva產(chǎn)品，其他試劑均為AR級(jí)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 乳腺的采集與制片 分別取正常黃牛和乳腺炎黃牛乳腺的乳頭、乳體、乳基部組織，用體積分?jǐn)?shù)為10％的中性甲醛固定24h，經(jīng)流水沖洗，常規(guī)性脫水，透明，石蠟包埋，然后再制備成5μm厚的不連續(xù)切片。

1.2.2 MTB染色 切片經(jīng)常規(guī)脫蠟，復(fù)水，然后投入甲苯胺藍(lán)一高錳酸鉀染液中染色30s，在體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇-PBS(pH7.3)中分色，鏡下控制分色時(shí)間。快速脫水，透明，封片。以顯示黃牛乳腺組織肥大細(xì)胞的形態(tài)與數(shù)量。

1.2.3 H-E染色 切片經(jīng)常規(guī)脫蠟，復(fù)水，再投人體積分?jǐn)?shù)為30％的乙醇一蘇木精染液中染色10min，在體積分?jǐn)?shù)為1％的HCl-酒精中分色10s，快速脫水，再在體積分?jǐn)?shù)為1％的伊紅酒精中復(fù)染10s，透明，封片。以顯示黃牛乳腺病理組織結(jié)構(gòu)。

1.2.4 AB-S染色 切片按常規(guī)脫蠟，復(fù)水，轉(zhuǎn)入PBS(pH7.3)中5min，隨即在質(zhì)量濃度為5％的Alcian blue 8GX和體積分?jǐn)?shù)為3％的醋酸溶液中浸泡40mm，PBS沖洗5min，入含Safranin O的質(zhì)量濃度為0.25％的0.25mol/L鹽酸溶液中染色1 in，PBS沖洗，快速脫水、透明并封片，以顯示乳腺組織肥大細(xì)胞顆粒的異質(zhì)性。

1.3 計(jì)數(shù)與數(shù)據(jù)處理

隨機(jī)取乳腺的乳頭部、乳體部、乳基部的不連續(xù)切片3張，在放大倍數(shù)為10×40的10個(gè)不連續(xù)視野中分別統(tǒng)計(jì)炎性細(xì)胞數(shù)、肥大細(xì)胞數(shù)及脫顆粒數(shù)，結(jié)果用x±s表示。所有數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均應(yīng)用軟件DPS v3.01專業(yè)版完成。

2 結(jié)果

2.1 乳腺組織的形態(tài)學(xué)變化

正常黃牛的乳腺組織可見腺泡間有少量的炎性細(xì)胞(圖1)。乳腺炎黃牛乳腺組織在小葉間質(zhì)、腺泡及腺上皮細(xì)胞間、腺泡腔內(nèi)、乳導(dǎo)管及血管內(nèi)壁及周圍浸染了大量的炎性細(xì)胞(圖2)，均極顯著高于正常乳腺(P＜0.01)(表1)。其中乳基部最高，均極顯著高于乳體部和乳頭部(P＜0.01)(表1)，腺泡結(jié)構(gòu)漸進(jìn)紊亂，小葉內(nèi)血管腔狹窄、變形(圖3)。

2.2 乳腺肥大細(xì)胞的形態(tài)分布

正常黃牛乳腺組織中有少量的肥大細(xì)胞分布(圖4)，乳腺炎黃牛乳腺腺泡中有大量的肥大細(xì)胞浸潤，主要分布在乳腺小葉間質(zhì)、腺泡及腺上皮細(xì)胞間、腺泡腔內(nèi)及血管和乳導(dǎo)管內(nèi)壁及周圍。形態(tài)呈圓形或橢圓形，大小不一，多位于中央，胞質(zhì)內(nèi)充滿異染顆粒，脫顆粒狀態(tài)顯著，并表現(xiàn)有顆粒耗竭現(xiàn)象(圖5)。

2.3 乳腺肥大細(xì)胞數(shù)量及其脫顆粒的變化

MTB染色顯示，乳腺炎黃牛乳腺不同部位肥大細(xì)胞及其脫顆粒數(shù)急劇增多，均極顯著高于正常乳腺(P＜0.01)，其中乳基部為最高值，均極顯著高于乳頭部和乳體部(P＜0.01)(表2)。

2.4 乳腺肥大細(xì)胞組化性質(zhì)的變化

AB-S染色顯示，正常黃牛與乳腺炎黃牛乳腺肥大細(xì)胞只被Alcian blue染成藍(lán)色，而不被結(jié)締組織型肥大細(xì)胞的特異性染料Safranin O所著染。所以。黃牛乳腺肥大細(xì)胞屬于黏膜肥大細(xì)胞。

3 討論

隨著乳腺炎病程的延長，乳腺不同部位肥大細(xì)胞及其脫顆粒數(shù)急劇增多，并呈上升趨勢，均極顯著高于正常乳腺，小葉內(nèi)的血管腔狹窄、變形，造成乳腺內(nèi)的小血管和乳腺組織損傷。說明乳腺組織受到病原菌感染后，乳腺肥大細(xì)胞被局部抗原激活，呈現(xiàn)過度活化，表現(xiàn)為顯著的脫顆粒及顆粒耗竭現(xiàn)象，釋放大量的炎癥介質(zhì)，如組胺、白三烯、r-干擾素、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1等。在這些炎癥介質(zhì)的作用下，血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子(ICAM-1)上的選擇素和糖類結(jié)合可介導(dǎo)炎性細(xì)胞“聚合和滾動(dòng)”，使循環(huán)中快速移動(dòng)的炎性細(xì)胞變慢并與內(nèi)皮細(xì)胞松散結(jié)合，導(dǎo)致炎性細(xì)胞表面的整合素親和力增加，致使炎性細(xì)胞被捕獲和黏附在內(nèi)皮細(xì)胞表面，此時(shí)白細(xì)胞表面的整合素和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白相互作用，而使黏附反應(yīng)擴(kuò)大，并促使炎性細(xì)胞穿越內(nèi)皮到達(dá)乳腺炎癥部位，便出現(xiàn)了大量炎性細(xì)胞浸染小葉間質(zhì)、腺泡及腺上皮細(xì)胞間、腺泡腔內(nèi)、乳導(dǎo)管及血管內(nèi)壁及周圍，導(dǎo)致乳腺組織損傷。同時(shí)，細(xì)胞黏附分子(ICAM-1)還可介導(dǎo)T細(xì)胞與乳腺細(xì)胞問的相互作用，促使T細(xì)胞激活、增殖，加重細(xì)胞毒的作用，造成乳腺結(jié)構(gòu)的紊亂和損傷。此時(shí)肥大細(xì)胞釋放的LTs也可促進(jìn)炎性細(xì)胞向乳腺組織遷徙、聚集，造成大量的炎性細(xì)胞浸染乳腺組織。TNF-α與內(nèi)皮細(xì)胞表面存在的TNF-α受體結(jié)合，直接損傷乳腺小葉內(nèi)的小血管內(nèi)皮細(xì)胞。組胺可與α-干擾素(INF-α)協(xié)同活化NKC(Natural Killer Cell，自然殺傷細(xì)胞)從而放大NKC的殺傷作用，導(dǎo)致乳腺小葉內(nèi)的小血管損傷以及組胺過氧化物其他細(xì)胞因子等均可以通過PKC(Protein Kinase C，蛋白激酶C)的激活，使乳腺小葉內(nèi)的小血管內(nèi)皮細(xì)胞變形和管腔狹窄，導(dǎo)致血管和乳腺組織的損傷。

乳腺炎乳腺組織肥大細(xì)胞迅速增多，直接誘導(dǎo)或間接影響肥大細(xì)胞的明顯脫顆粒反應(yīng)，表現(xiàn)過度活化狀態(tài)，釋放大量炎癥介質(zhì)以及各種神經(jīng)遞質(zhì)和其他信號(hào)分子，并進(jìn)一步活化黏膜肥大細(xì)胞，形成級(jí)聯(lián)效應(yīng)，啟動(dòng)乳腺過度炎癥，不斷促進(jìn)免疫亢進(jìn)，加重乳腺組織的病理損傷，進(jìn)而引起全身多器官病變，這種炎癥失控，即造成全身多器官衰竭，最終導(dǎo)致死亡。

(責(zé)任編輯、校對(duì) 武曉蘭)