摘要：通過(guò)葡萄胚挽救試管苗配套移栽技術(shù)的系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的閉瓶開(kāi)瓶煉苗，氣孔開(kāi)張度逐漸降低，關(guān)閉指數(shù)和葉綠素含量都在增加，從而提高了試管苗對(duì)外界環(huán)境條件的適應(yīng)能力，有利于移栽成活率的進(jìn)一步提高。配合采用基質(zhì)分層配制，移栽成活率顯著高于單獨(dú)使用一種特定基質(zhì)，這對(duì)移栽其他難成活試管植物有一定借鑒意義。

關(guān)鍵詞：胚挽救；葡萄試管苗；移栽技術(shù)；移栽成活率

中圖分類(lèi)號(hào)：S663.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

胚挽救技術(shù)是培育優(yōu)良經(jīng)濟(jì)木本植物的有效、快捷方式，已在桃、杏、葡萄等經(jīng)濟(jì)果樹(shù)中獲得成功。由于胚挽救試管苗經(jīng)歷了類(lèi)似受精卵在子房?jī)?nèi)的發(fā)育過(guò)程，相比芽增殖試管苗生長(zhǎng)緩慢、長(zhǎng)勢(shì)纖弱，在煉苗、移栽過(guò)程中更易出現(xiàn)質(zhì)量不佳、成活率不高等現(xiàn)象，嚴(yán)重阻礙了胚挽救技術(shù)的運(yùn)用，本研究以葡萄優(yōu)良品種——紅光元核×山葡萄胚挽救試管苗為例摸索、優(yōu)化其配套移栽技術(shù)，為葡萄胚挽救技術(shù)的后續(xù)運(yùn)用、優(yōu)良品種從實(shí)驗(yàn)室規(guī)?；灾驳酱筇锏於ɑA(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

紅光無(wú)核×山葡萄胚挽救試管苗取自西北農(nóng)林科技大學(xué)園藝學(xué)院組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 方法

1.2.1 煉苗方法 將試管苗培養(yǎng)瓶直接放在移栽大田中，培養(yǎng)瓶底部與田間土接觸、遮蔭。移栽地表平均溫度為24℃，晝夜溫差為7℃，地表相對(duì)濕度為50％～60％。設(shè)T₁為溫室閉口煉苗7d；T₂為溫室閉口煉苗7d后開(kāi)口煉苗3d；T₃為溫室閉口煉苗7d后開(kāi)口煉苗5d；T₄為溫室閉口煉苗7d后開(kāi)口煉苗7d；CK為對(duì)照，表示不煉苗；Ｉ，Ⅱ，Ⅲ表示氣孔關(guān)閉指數(shù)。觀測(cè)比較不同的煉苗天數(shù)試管苗葉片氣孔的變化狀況。

1.2.2 氣孔測(cè)量 每項(xiàng)煉苗處理取3株苗，每苗取上部第3片葉，用火棉膠印取葉中部下表皮取下印膜，于光學(xué)顯微鏡下觀察，每片葉隨機(jī)觀測(cè)5個(gè)氣孔，使用微測(cè)量尺測(cè)量氣孔口內(nèi)徑的橫徑與縱徑，以橫縱徑的比值表示氣孔相對(duì)開(kāi)度，取其平均數(shù)。同時(shí)每片葉隨機(jī)觀察50個(gè)氣孔，統(tǒng)計(jì)氣孔關(guān)閉百分率和關(guān)閉指數(shù)。關(guān)閉指數(shù)依孔徑大小分為5級(jí)：Ｉ級(jí)＞11mm；Ⅱ級(jí)：8～11mm；Ⅲ級(jí)；5～8mm；Ⅳ級(jí)：1～5mm；V級(jí)：0mm

氣孔開(kāi)張度、關(guān)閉率、關(guān)閉指數(shù)的計(jì)算公式如下：

氣孔開(kāi)張度=氣孔橫徑/氣孔縱徑，

氣孔關(guān)閉(％)=氣孔關(guān)閉數(shù)/觀察氣孔總數(shù)，

氣孔關(guān)閉指數(shù)=∑各級(jí)指數(shù)×各級(jí)氣孔數(shù)/最高級(jí)指數(shù)×觀察氣孔總數(shù)

1.2.3 葉綠素含量測(cè)定 分別選取閉瓶煉苗7d，開(kāi)口煉苗0，3，5，7d的試管苗，取離頂部第3～5葉片展平的功能葉，采用可見(jiàn)光吸收法測(cè)定葉片葉綠素含量，不同煉苗天數(shù)的試管苗重復(fù)測(cè)量5次，最終取平均值。

1.2.4 移栽基質(zhì) 選取閉瓶煉苗7d，開(kāi)瓶煉苗5d的試管苗為移栽材料，移栽基質(zhì)設(shè)為：①蛭石。②珍珠巖。③蛭石2/5(上層)+田間土3/5(下層)。④珍珠巖2/5(上層)+田間土3/5(下層)。⑤田間土，共5個(gè)處理。移栽時(shí)以田間土為對(duì)照，每種基質(zhì)上移栽60株，重復(fù)3次，統(tǒng)計(jì)月平均生長(zhǎng)高度(cm)與一個(gè)月后的移栽成活率(％)。

移栽時(shí)用鑷子小心取出試管苗，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800～1 000倍代森錳鋅溶液浸泡1～2min，移栽于60穴盤(pán)中，移栽后7d內(nèi)保持溫度在(25±2)℃，濕度為85％～90％，10～15d以后逐漸降低溫度和濕度至溫室內(nèi)自然狀態(tài)。移栽后10d在葉面噴施肥0.2％KH₂PO₄，然后每7d交替噴施0.2％KH₂PO₄和0.2％尿素。

1.3 測(cè)量數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法

測(cè)量數(shù)據(jù)采用Excel2007計(jì)算平均值，不同煉苗天數(shù)試管苗同一指標(biāo)間采用SPSS13.0進(jìn)行方差分析，利用多重比較對(duì)方差分析的結(jié)果表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同煉苗方式對(duì)試管苗葉片氣孔開(kāi)閉及光合色素的影響

如圖1所示，不經(jīng)煉苗的試管苗氣孔開(kāi)張度最大，隨著煉苗方式的改變及開(kāi)口天數(shù)的增加，試管苗氣孔開(kāi)張度逐漸減小，至開(kāi)口煉苗第7d時(shí)降至最低。

氣孔關(guān)閉率呈現(xiàn)與氣孔開(kāi)張度相反的變化規(guī)律，即隨著開(kāi)口天數(shù)的增加、氣孔與空氣分子接觸概率增大，氣孔關(guān)閉百分率增大，尤其是開(kāi)口煉苗3d至開(kāi)口煉苗5d，氣孔關(guān)閉百分率陡然升高，增幅達(dá)52％；開(kāi)口煉苗5d與開(kāi)口煉苗7d，氣孔關(guān)閉百分率差別不大。

氣孔關(guān)閉指數(shù)相對(duì)氣孔關(guān)閉百分率所反映的信息更具體，它反映了氣孔關(guān)閉的有效程度。如圖1所示，開(kāi)口煉苗5d與開(kāi)口煉苗7d，氣孔關(guān)閉指數(shù)最高，孔徑相對(duì)其他煉苗時(shí)期最小。

總之結(jié)合氣孔開(kāi)張度、氣孔關(guān)閉百分率、氣孔關(guān)閉指數(shù)3個(gè)指標(biāo)表明胚挽救試管苗氣孔關(guān)閉與張開(kāi)的調(diào)節(jié)功能已逐步恢復(fù)與形成，尤其是開(kāi)口煉苗5d與開(kāi)口煉苗7d的試管苗，這對(duì)葉片快速適應(yīng)下步的移栽異質(zhì)環(huán)境、提高整體植株移栽成活率有利。

光合色素含量的高低反映了植株光合功能、適應(yīng)環(huán)境能力的強(qiáng)弱。如圖1所示，經(jīng)煉苗后試管苗葉綠素含量均升高，尤其是開(kāi)口煉苗第5d，葉綠素含量最高。

2.2 移栽基質(zhì)對(duì)成活率的影響

由表1可知，不同基質(zhì)移栽成活率不同，以田間土作基質(zhì)成活率最低為13.3％，2/5蛭石+3/5田間土分層作基質(zhì)移栽的成活率最高為86.6％，是田間土基質(zhì)移栽的5倍，其次是2/5珍珠巖+3/5田間土移栽的成活率為80％。

3 討論與小結(jié)

煉苗期間如何恢復(fù)試管苗生理功能，如葉片的光合功能、根的吸收功能，并協(xié)調(diào)統(tǒng)一是后續(xù)移栽成功的關(guān)鍵。試驗(yàn)中通過(guò)適宜的煉苗方式將培養(yǎng)瓶直接放置在苗床土上，閉口煉苗7d，開(kāi)口煉苗5d，試管苗葉片的氣孔相對(duì)張開(kāi)度、氣孔關(guān)閉指數(shù)等指標(biāo)均達(dá)到最適，這是氣孔恢復(fù)自我調(diào)節(jié)功能、適應(yīng)異質(zhì)環(huán)境的表現(xiàn)，這對(duì)保證移栽成活極為有利。

合理的配制移栽基質(zhì)也是影響成活的關(guān)鍵因素，試驗(yàn)中采用基質(zhì)分層技術(shù)即上層選用總孔隙度較大、透氣良好的蛭石或珍珠巖，可提高根基部透氣性，防止根莖部霉?fàn)€，下層選用保墑性能較好的田間土進(jìn)行移栽，移栽成活率顯著高于單獨(dú)使用一種特定基質(zhì)，這對(duì)移栽其他難成活試管植物有一定借鑒意義。

(責(zé)任編輯、校對(duì) 鄭國(guó)琴)