凌斌勛， 陳環(huán)球， 吳建中， 梁志超， 徐新宇， 陸建偉

Reg Ⅳ(regenerating islet-derived family, member 4)是鈣依賴型植物血凝集素超家族之一——再生基因(regenerating gene, Reg)家族的最新成員，在正常胃腸道中表達水平非常低，發(fā)生炎癥或腫瘤時可見原位或異位高表達[1]。本研究擬應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析法定量檢測Reg Ⅳ蛋白在胃癌患者血清中的水平，探討其在胃癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本 取自江蘇省腫瘤醫(yī)院普外科2008年10月至11月收治的64例胃癌患者手術(shù)前血清標(biāo)本，-80℃密封保存?；颊吣挲g23～84歲，平均61歲。女性16例，男性48例。淋巴結(jié)陰性32例，淋巴結(jié)陽性32例。腫瘤侵及黏膜層及黏膜下層(T1)為21例，腫瘤侵及肌層(T2)及漿膜層(T3)為43例。手術(shù)后病理分期按國際抗癌聯(lián)盟(UICC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)劃分：Ⅰ期21例，Ⅱ期11例，Ⅲ期32例。

1.1.2 主要試劑 人再生基因蛋白(Reg-Ⅳ)酶聯(lián)免疫分析試劑盒(USCN Life Science & Technology Company，編號E1819h)。

1.2 方法

按ELISA試劑盒使用說明書操作。用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，向包被抗Reg Ⅳ抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗Reg Ⅳ抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化成黃色。顏色的深淺和樣品中的Reg Ⅳ呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析，獨立樣本t檢驗和單向方差分析(One-way ANOVA)的。

2 結(jié)果

64例胃癌患者血清Reg Ⅳ蛋白含量為(4.217±0.314 )ng/mL，腫瘤侵及黏膜層及黏膜下層(T1)為(3.249±0.317)ng/mL，腫瘤侵及肌層(T2)和漿膜層(T3)為(4.690±0.425)ng/mL，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；淋巴結(jié)陰性為(3.592±0.275)ng/mL，淋巴結(jié)陽性為(4.842±0.548)ng/mL，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；病理分期Ⅰ期為(3.249±0.317)ng/mL，病理分期Ⅱ期為(4.247±0.483)ng/mL，病理分期Ⅲ期為(4.842±0.548)ng/mL，其中病理分期Ⅰ期與病理分期Ⅲ期相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)(見表1)。

表1 血清Reg Ⅳ蛋白與胃癌臨床病理特征

a：病理分期I期與病理分期II期相比；b：病理分期I期與病理分期III期相比；c：病理分期II期與病理分期III期相比

3 討論

再生基因(regenerating gene, Reg)家族包括一組分泌蛋白，具有可與N末端短肽結(jié)合的C型血凝集素樣結(jié)構(gòu)域，功能相當(dāng)于急性反應(yīng)蛋白、抗凋亡因子、生長因子及有絲分裂原。人Reg Ⅳ位于1號染色體，屬于單拷貝基因，有5個內(nèi)含子和6個外顯子，編碼158個氨基酸。Li等[2]研究發(fā)現(xiàn)Reg Ⅳ主要在消化系統(tǒng)表達，包括胃、小腸、結(jié)腸及胰腺。Oue等[3]研究進一步證明Reg Ⅳ選擇性表達于腸黏膜的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞及胃黏膜的壁細(xì)胞，炎癥性腸病和胃潰瘍等導(dǎo)致的黏膜損傷、再生及化生時，Reg Ⅳ表達明顯升高。

Miyagawa等[4]采用RT-PCR技術(shù)檢測胃癌細(xì)胞系及臨床胃癌標(biāo)本中的Reg Ⅳ，發(fā)現(xiàn)在腹膜播散的胃癌細(xì)胞系及胃癌組織中Reg Ⅳ mRNA高表達，而且mRNA豐度與癌細(xì)胞浸潤腹膜厚度成正比，提示Reg Ⅳ的高表達可能與胃癌的發(fā)生、腹膜播散及侵襲能力有關(guān)；Reg Ⅳ在伴腹膜播散的胃癌中的表達水平是正常黏膜的20倍，并且明顯高于不伴腹膜播散的胃癌，從而表明Reg Ⅳ與胃癌有關(guān)，并可能是胃癌發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移的一個生物標(biāo)記。馬華等[5]研究認(rèn)為I/II期胃癌組織中不表達Reg Ⅳ蛋白，而Ⅲ/Ⅳ期陽性率為47.83%，提示Reg Ⅳ可能參與胃癌的生長侵襲等過程。Mitani等[6]檢測36例胃癌患者，發(fā)現(xiàn)所有14例Reg Ⅳ蛋白陽性患者均對5-Fu/DDP化療不敏感；同時定量檢測血清Reg Ⅳ蛋白水平，發(fā)現(xiàn)正常人和慢性胃炎患者血清Reg Ⅳ蛋白水平相似，而胃癌患者明顯高于前兩者，手術(shù)后患者血清Reg Ⅳ蛋白水平有明顯的下降；該研究提示Reg Ⅳ 蛋白可預(yù)測以5-Fu為基礎(chǔ)的化療反應(yīng)，并有作為血清腫瘤標(biāo)志物的潛在應(yīng)用價值。

本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤浸潤至肌層和漿膜層的胃癌患者血清Reg Ⅳ蛋白水平要顯著高于腫瘤局限在黏膜層和黏膜下層者(P<0.01)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清Reg Ⅳ蛋白水平要高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)；病理Ⅲ期患者血清Reg Ⅳ蛋白水平高于病理Ⅰ期患者(P<0.05)。結(jié)果提示，血清Reg Ⅳ蛋白水平與胃癌的生長侵襲有明顯相關(guān)性，作為臨床病理診斷浸潤性胃癌的標(biāo)志物具有重要的參考價值。我們認(rèn)為，雖然Reg Ⅳ的生物學(xué)功能和在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用機理尚未

完全明確，但是有一點比較清楚，就是能促進腫瘤細(xì)胞的分裂、增殖，而腫瘤細(xì)胞迅速增殖后產(chǎn)生的機械壓力，可促使腫瘤細(xì)胞沿阻力最小的組織間隙向前推進，從而引起腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。另有文獻[7]報道Reg Ⅳ可以使結(jié)直腸癌細(xì)胞EGFR與Akt迅速磷酸化，兩者共同增強AP-1轉(zhuǎn)錄因子的活性，使該信號通路下游基因Bcl-2、Bcl-XL、生存素(Survivin)及基質(zhì)溶解因子(matrilysin)等表達發(fā)生改變。而在腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞穿透血管周圍的基底膜是實現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移最重要的一步，多種對組織有特異性破壞作用的酶參與其中。因此，Reg Ⅳ有可能通過激活EGFR/Akt/ AP-1信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，上調(diào)基質(zhì)溶解因子的表達，從而促進腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移。

綜上所述，Reg Ⅳ與胃癌浸潤性生長和預(yù)后的關(guān)系，值得進一步深入研究。

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