摘要：目的 觀察心復(fù)康口服液對心肌梗死后心力衰竭大鼠血流動力學、心功能及梗死周圍心肌中鏈酰基輔酶A脫氫酶基因表達的影響。方法 采用結(jié)扎SD大鼠左冠狀動脈前降支致心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，用心復(fù)康口服液于術(shù)后24h灌胃給藥至6周，以卡托普利作為陽性對照藥。給藥4周后觀察大鼠心臟功能、血流動力學及梗死周圍心肌中鏈?；o酶A脫氫酶基因表達的變化。結(jié)果 模型組與假手術(shù)對照組比較，左心室舒張末壓升高，左心室收縮壓、心排血量、左心室內(nèi)壓最大上升速率、左心室內(nèi)壓最大下降速率均顯著降低，梗死周圍心肌中鏈?；o酶A脫氫酶基因表迭下調(diào)(P＜0.01)。與模型組比較，心復(fù)康口服液和卡托普利皆可顯著降低心梗后心衰大鼠左心室舒張末壓(P＜0.05)，升高左心室收縮壓、心排血量、左心室內(nèi)壓最大上升速率、左心室內(nèi)壓最大下降速率(P＜0.05或P＜0.01)；梗死周圍心肌中鏈?；o酶A脫氫酶基因表達上調(diào)(P＜0.01)。結(jié)論 心復(fù)康口服液可改善心肌梗死后心力衰竭模型大鼠心臟功能，并可上調(diào)心肌中鏈?；o酶A脫氫酶基因表達。

關(guān)鍵詞：心復(fù)康口服液；心功能；中鏈?；o酶A脫氫酶；心肌梗死；大鼠

中圖分類號：R541.6 R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1672-1349(2007)12-1205-03

急性心肌梗死(AMI)后發(fā)生左心室重構(gòu)，導致進行性心功能障礙，嚴重影響病人預(yù)后。中藥心復(fù)康口服液是，臨床治療充血性心力衰竭的經(jīng)驗方，臨床和實驗研究提示心復(fù)康口服液可保護心肌缺血性損害，改善心功能。本實驗觀察了心復(fù)康口服液對心肌梗死后心力衰竭大鼠血流動力學及心臟功能的影響。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 儀器 TA1003型精密電子天平(上海天平儀器廠)；MFV--320型電磁流量計(日本NEC)；BL-420生物機能實驗系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)；HX-200動物呼吸機(成都泰盟科技有限公司)；DU640型紫外分光光度計(BECKMAN公司)；5700實時定量PCR儀(ABI AppliedBiosystems，USA)；Im-age Master VDS圖像系統(tǒng)(Pharmacia Biotch公司)。

1．1．2 試劑與藥物 心復(fù)康口服液主要由黃氏、人生、丹麥、靈芝、紅花等組成。卡托普利由中美上海施貴寶制藥有限公司提供，批號：0304033。OmnlscriptTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(QIAGEN，Germany)；SYBR-Gre印PCR核心試劑(ABI AppliCd Biosys-terns，USAR)。

1．1．3 實驗動物 正常雄性SD大鼠60只，體重230G～260g，北京維通利華實驗動物中心提供。

1．2 方法

1．2．1 動物模型復(fù)制 大鼠以2.0％戊巴比妥液(40 g/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，仰臥位四肢固定于大鼠臺上，胸部手術(shù)視野區(qū)常規(guī)備皮、消毒，于心尖搏動最強處稍上(第4、5肋間)與胸骨平行處作長約2cm的切口，鈍性分離胸大肌，左手持鈍頭無齒彎鉗緊靠胸骨左緣插入肋間肌，在擴大胸腔切口的同時，左手配合擠壓胸部，將心臟擠出胸腔外，迅速以左手拇、食指固定心尖，剪開心包膜，在左冠狀動脈(LAD)起始點下(2～3)mm處結(jié)扎左冠狀動脈前降支，以標準肢體導聯(lián)2(紙速50mm/s)心電圖ST段弓背抬高為AMI形成。然后將心臟恢復(fù)到胸腔，擠壓胸部，擠出胸腔內(nèi)空氣，縫合皮膚，局部消毒。

1．2．2 實驗分組 動物購回喂養(yǎng)標準合成飼料，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，禁食12h后，體重均衡，隨機分為兩組，假手術(shù)組12只，造模組48只。造模組大鼠按動物模型復(fù)制方法所述方法造模，造模成功大鼠復(fù)蘇后24h，再隨機分為模型組、卡托普利組、心復(fù)康口服液組共3組，每組不少于12只大鼠。假手術(shù)組按動物模型復(fù)制方法所述方法手術(shù)，但僅在相同部位穿線并不結(jié)扎，余步驟與手術(shù)組相同。各組大鼠術(shù)后24h開始灌胃給藥。

1．2．3 實驗動物給藥方法 ①假手術(shù)組、模型組：生理鹽水4.0mL/kg灌胃，每天1次；②卡托普利組：卡托普利100mg/kg灌胃，每天1次；③心復(fù)康口服液組：心復(fù)康口服液5.4g./kg灌胃，每天1次。各組大鼠于給藥后6周末取材。

1．3 血流動力學檢測 術(shù)前稱重并麻醉(方法同上)。分離右頸外動脈，穿刺插入PES0小鞘管，并與BL-420生物機能實驗系統(tǒng)相連，記錄大鼠頸動脈收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)。最后，鞘管逆行送人左心室，連續(xù)記錄左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升和下降速率(±dp/max)，并同步記錄心率。

1．4 心排血量(CO)檢測 術(shù)前稱重并麻醉(方法同上)，行氣管插管，連接HX-200動物呼吸機，開胸分離升主動脈，主動脈根部安置2號電磁流量計探頭，經(jīng)MFV-320型電磁流量計測量主動脈血流量，即心排血量。

1．5 心肌中鏈酰基輔酶A脫氫酶基因(MCAD mRNA)表達的檢測

1．5．1 心肌組織總RNA的提取 灌胃6周末，每只大鼠取心肌組織100mg，采用1mL TRIzol Reagent經(jīng)氯仿、異丙醇提取總RNA。紫外分光光度計及電泳分析RNA的量和純度。所用RNA的A₂₆₀/A₂₈₀值在1.7～2.0之間，電泳均可見18S和28S條帶。

1．5．2 引物設(shè)計、合成 引物設(shè)計由Primer Express專用軟件設(shè)計，北京三賽百盛生物技術(shù)公司合成，引物序列如下，MCAD(150 bp)，正向引物：5’－CAGAGGCTACAAGGTCCTGAGAA-3’；反向引物：5’-GGCAAA~AGCAATI'G-3’。GAPDH(320 bp)(為內(nèi)參照基因)，正向引物：5’-TAT GACAACTCCCTCAAGAT-3’；反向引物：5’-AGATCCACAACA3 OAT ACA TT-3’。超純水稀釋引物，配成引物儲備液的濃度為20pmol/μL，-86℃低溫保存。

1．5．3 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，取10×RT緩沖液2.0μL，dNTP(每種dN了P5UM)2.0μL，10μMOligo-dT引物2.0μL，Onmiseript逆轉(zhuǎn)錄酶1.0μL，使每個反應(yīng)管含4單位、RNA酶抑制劑1.0μL，使每個反應(yīng)管含10個單位、RNA模板2μg。總體積20μL。37℃孵浴1h，93℃5 min。

1．5．4 PCR反應(yīng)條件 PCR反應(yīng)采用SYBR Green PCR核心試劑，在5700實時定量PCR儀上進行，PCR擴增條件95℃，10min；94℃20s，55℃20s，72℃35s，40個循環(huán)，擴增結(jié)束后，各取PCR產(chǎn)物4μL，進行1.2％瓊脂糖電泳，膠圖由ImageMas，terWDS圖像系統(tǒng)捕獲，PCR產(chǎn)物量以光密度值x面積表示，分別計算MCAD/GAPDH的光密度比作為目的片段mRNA的相對含量。用ImageMasterToallab，V2.01專用分析軟件分析。

1．6 統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(x±s)表示，采用SPSS10.0分析軟件進行t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2．1 心復(fù)康口服液對心力衰竭大鼠心率、血壓的影響 與假手術(shù)組比較，模型組心率增快、舒張壓降低(P＜0.05)；卡托普利組舒張壓、收縮壓均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)。與模型組比較，卡托普利組、心復(fù)康口服液組血壓及心率無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；卡托普利組與心復(fù)康組口服液組比較，血壓及心率無統(tǒng)計學意義(P＞0.5)。詳見表1。

2．2 心復(fù)康口服液對心力衰竭大鼠左心室非梗死心肌MCADmRNA表達的影響 與假手術(shù)組比較，模型組左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表達水平降低(P＜0.01)。與模型組比較，卡托普利組、心復(fù)康口服液組左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表達水平上調(diào)(P＜0.01)。與卡托普利組比較，心復(fù)康口服液組左心室非梗死心肌MCAD的mRNA表達水平雖呈上調(diào)趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。詳見表2。

2．3 心復(fù)痛口服液對心力衰竭大鼠心功能的影響 與假手術(shù)組比較，模型組LVSP，±dp/dtmax降低(P＜0.01)；與模型組比較，卡托普利組、心復(fù)康口服液組LVSP，LVEDP，±dp/dtmax提高(P＜0.05或P＜0.01)?？ㄍ衅绽M與心復(fù)康口服液組比較，心功能各指標無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。詳見表3。

3 討 論

中藥復(fù)方心復(fù)康口服液，治療氣虛血瘀型心力衰竭，臨床研究提示本方具有改善患者，臨床癥狀和心功能，提高病人生活質(zhì)量的作用。

本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠LVEDP顯著升高，LVSP，DBP降低，與文獻報道的結(jié)果相符。而心復(fù)康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠LVEDP顯著升高，LVSP降低，與模型組比較，均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。卡托普利可使心力衰竭大鼠SBP、DBP降低，與模型組比較，均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，可能與用量過大有關(guān)。說明心復(fù)康口服液能顯著改善心力衰竭大鼠的血流動力學狀態(tài)。

本研究證實由于AMI使部分心肌組織壞死，導致心臟收縮和舒張功能明顯受損，表現(xiàn)為左室壓力最大上升速率和左室壓力最大下降速率顯著降低，心臟搏出量減少，收縮末期剩余血量增加，使LVEDP增高，心臟前負荷顯著增加。本實驗結(jié)果提示：模型組±dp/dtmax、CO均低于假手術(shù)組(P＜0.01)，說明AMI可損傷心臟收縮和舒張功能。中藥心復(fù)康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠00增加，±dp/dtmax上升，與模型組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，這與文獻[7，8，11]的報道結(jié)果相似。說明心復(fù)康口服液和卡托普利能顯著改善大鼠的心臟收縮和舒張功能。

MCAD是中鏈脂肪酸臼氧化第一步的關(guān)鍵酶，中鏈脂肪酸不僅來源于飲食，還是特長鏈、長鏈脂肪酸β氧化的產(chǎn)物，雖然許多調(diào)控蛋白參與脂肪酸的β氧化，但MCAD在脂肪酸β氧化中具有重要地位。本實驗選用MCAD可以直接反映脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達變化。本實驗發(fā)現(xiàn)模型組大鼠左心室非梗死區(qū)心肌MCAD mRNA表達下調(diào)，與模型組比較，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，這與文獻報道的結(jié)果一致，表明在心肌梗死后左心室重塑的整個過程中，梗死周圍局部心肌組織存在脂肪酸代謝相關(guān)基因表達的下調(diào)。中藥心復(fù)康口服液和卡托普利可使心力衰竭大鼠左心室非梗死區(qū)心肌MCAD mRNA表達上調(diào)，與Ｓ模型組比較有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。說明心復(fù)康口服液和卡托普利能顯著改善心力衰竭大鼠左心室非梗死區(qū)心肌MCADmRNA表達。推測改善心力衰竭大鼠心臟功能可能與其改善心肌代謝有關(guān)。

作者簡介：吳華芹(1981—)，女，現(xiàn)為中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院2005級碩士研究生(郵編：100053)；胡元會(通訊作者)、陳雙厚、劉瑞華，張百舜、程慧平、朱曉云，工作于中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院(郵編：100053)；馬鐵民，工作于北京大學醫(yī)學部基礎(chǔ)醫(yī)學院；褚瑜光，現(xiàn)為中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院2005級碩士研究生。

(本文編輯 郭懷印)