摘要：目的 通過動(dòng)態(tài)觀察高脂飼料喂養(yǎng)家兔模型血脂和血液流變學(xué)各指標(biāo)在造模過程中發(fā)生的變化及其相互關(guān)系，探討中醫(yī)“痰”“瘀”證相關(guān)的生物學(xué)基礎(chǔ)。方法 新西蘭家兔給予高脂飼料喂養(yǎng)2周、4周、8周后分別用酶法測(cè)定血脂，旋轉(zhuǎn)法測(cè)定血漿黏度，微孔濾過法測(cè)定紅細(xì)胞變形性，磁珠法測(cè)定凝血酶時(shí)間(TT)、部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)等血液流變學(xué)指標(biāo)，用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 與普通飲食組比較，高脂飲食家兔血清總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)在2周內(nèi)迅速增高，4周、8周時(shí)維持在與2周相近的水平(P＜0.01)；高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)在2周開始增高，在8周增高更加明顯(P＜0.01)；三酰甘油(TG)增高比較緩慢，在8周時(shí)明顯增多(P＜0.01)。血漿黏度在高脂飲食2周、4周、8周時(shí)顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)；高切、中切、低切變率下紅細(xì)胞變形指數(shù)在2周、4周、8周時(shí)均顯著降低(P＜0.01)；TT在2周時(shí)降低(P＜0.05)，4周、8周時(shí)降低更加明顯(P＜0.01)；APTT在4周時(shí)顯著降低。相關(guān)性分析顯示：TC和LDL－C與血漿黏度呈正相關(guān)，與紅細(xì)胞變形性及TT呈負(fù)相關(guān)。TG與血漿黏度呈正相關(guān)，與紅細(xì)胞變形性呈負(fù)相關(guān)。HDL－C 與高切變率下的全血黏度、血漿黏度呈正相關(guān)．與紅細(xì)胞變形性及TT呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論 在高脂家兔造模過程中，血脂和血液流變學(xué)有相關(guān)性變化，這些可能反映了中醫(yī)“痰濁證”與“血瘀證”相關(guān)的生物學(xué)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：高脂飲食；痰濁證；血瘀證；血脂；血液流變學(xué)；家兔

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672－1349(2007)10－0946－03

高脂血癥家兔動(dòng)物模型以往多用于動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)領(lǐng)域的研究，近年來(lái)，由于該模型同時(shí)存在高血脂和血循環(huán)障礙這兩種病理機(jī)制，也被用于中醫(yī)痰濁和血瘀證候的研究。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，證候是對(duì)人體運(yùn)動(dòng)狀態(tài)和方式的概括和描述，隨時(shí)間而動(dòng)態(tài)變化，即其“動(dòng)態(tài)時(shí)空”的特征。在以往的報(bào)道中，只有關(guān)于該模型造模末期家兔血脂、血液流變學(xué)變化，尚缺少在造模過程中對(duì)家兔血脂和血液流變學(xué)變化的動(dòng)態(tài)的觀察。研究表明。血液流變學(xué)異常是血瘀證的重要生物學(xué)表現(xiàn)，血脂異常與中醫(yī)痰濁也有密切的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察高脂血癥家兔血脂、血液流變學(xué)隨高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而發(fā)生的動(dòng)態(tài)變化及其各指標(biāo)之間的相關(guān)關(guān)系，研究痰濁、血瘀證候的動(dòng)態(tài)演化規(guī)律的生物學(xué)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 動(dòng)物 健康新西蘭家兔21只，雌雄不拘，體重(2.0～3.5)k8，由北京開源兔業(yè)養(yǎng)殖場(chǎng)提供，許可證編號(hào)：Scxk(京)2006～0005，動(dòng)物于安靜環(huán)境下單獨(dú)分籠飼養(yǎng)，室溫控制在(23±1)℃的范圍內(nèi)，相對(duì)濕度60％，光線自動(dòng)控制12 h明暗交替變換，給予充足清潔飲水。

1．1．2 試劑 總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C)試劑盒，由首都醫(yī)科大學(xué)臨床科技中心提供；凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定試劑盒，部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測(cè)定試劑盒，凝血酶時(shí)間(TT)測(cè)定試劑盒，由美德太平洋科學(xué)集團(tuán)提供。聚乙烯吡咯烷酮(polyvinglpyrrolidone，PVP)，配制紅細(xì)胞變形液，Sigma公司產(chǎn)品。

1．1．3 儀器 BeckmanCoulterCX4 Pro全自動(dòng)生化分析儀，美國(guó)Beckman公司生產(chǎn)。LBY－N₆B全自動(dòng)清洗血流變儀及微量血漿測(cè)試裝置，LBY－BX₃紅細(xì)胞變形儀，C2000－2高性能血凝儀，由北京普利生儀器有限公司生產(chǎn)。DL－4000B冷凍離心機(jī)，由上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)。

1．2 方法

1．2．1 動(dòng)物分組及處理 將21只家兔隨機(jī)分為普通飲食組6只，高脂飼料喂養(yǎng)2周、4周、8周組5只。高脂飲食組每只每天早、晚分別給予高脂飼料30 g，待高脂飼料喂完后加普通飼料及少量青菜喂養(yǎng)。高脂飲食飼料配方為1％膽固醇、15％蛋黃粉、5％豬油、79％普通兔飼料。分組及喂養(yǎng)方法見表1。高脂飲食2周組有1只家兔在第2周時(shí)意外死亡。8周后自家兔耳中央動(dòng)脈取血進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

1．2．2 血脂檢測(cè) 家兔空腹取血，待血液自凝后，取血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清中TC，TG，HDL-C，LDL-C。

1．2．3 血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 取血后分別加入肝素抗凝試管，3.8％枸櫞酸鈉抗凝試管。取肝素抗凝血0.8 mL用LBY－N₆B全自動(dòng)清洗血流變儀測(cè)定全血黏度；肝素抗凝血離心3000r/min，10 min，取0.2 mL上層液用微量血漿測(cè)試裝置測(cè)血漿黏度；取肝素抗凝血0.8 mL用LBY－BX3紅細(xì)胞變形儀測(cè)定紅細(xì)胞變形能力；取枸櫞酸鈉抗凝血離心3 000 r/min，15 min，取上層液，按試劑盒說(shuō)明書用C2000－2高性能血凝儀測(cè)定纖維蛋白原含量(FIB)、PT、APTT、TT等各項(xiàng)指標(biāo)。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，單因素方差分析比較組間差異，Pearson法分析相關(guān)關(guān)系。

2 結(jié) 果

2．1 高脂飲食對(duì)各組家兔血脂水平的影響 與普通飲食組比較，高脂飲食2周組、4周、8周家兔的TC水平顯著增高，達(dá)(15～17)倍；高脂飲食2周組家兔的血清LDL－C升高達(dá)40倍，8周組升高54倍，說(shuō)明高脂飲食使家兔血清TC水平、LDL－C在短期內(nèi)迅速增加到很高水平。高脂飲食2周和4周組家兔血清HDL－C水平顯著升高，8周組HDL－C水平進(jìn)一步增高。高脂飲食2周、4周組家兔血清TG升高40％左右，與普通飲食組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，8周組家兔TG水平升高4倍，表明高脂飲食對(duì)家兔血清TG影響比較緩慢。詳見表2。

2．2 高脂飲食對(duì)家兔血液流變學(xué)的影響 與普通飲食組比較，高脂飲食2周、4周、8周組家兔血漿黏度顯著升高，表明高脂飲食在短期內(nèi)可影響家兔血漿黏度，并隨喂養(yǎng)時(shí)間增長(zhǎng)持續(xù)升高。全血黏度的變化有波動(dòng)，在低切、高切變率狀態(tài)下，高脂飲食2周組全血黏度呈升高趨勢(shì)，隨后又有降低趨勢(shì)，但各組與普通飲食組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與普通飲食組比較，高脂飲食2周、4周、8周組家兔高、中、低切變率下紅細(xì)胞變形指數(shù)均顯著降低，表明高脂飲食對(duì)紅細(xì)胞變形性的影響較大。與普通飲食組比較，高脂飲食2周、4周、8周組家兔TT顯著降低，APTT在高脂飲食4周組明顯降低，PT隨高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)有降低趨勢(shì)。

2．3 高脂飲食家兔血脂與血液流變學(xué)變化的相關(guān)性分析 用Pearson法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，TC和LDL－C與血漿黏度呈正相關(guān)，與紅細(xì)胞變形性及TT呈顯著負(fù)相關(guān)。TG與血漿黏度呈正相關(guān)，與紅細(xì)胞變形性呈負(fù)相關(guān)。HDL－C與高切變率下的全血黏度，血漿黏度呈正相關(guān)，與紅細(xì)胞變形性APTT呈負(fù)相關(guān)。提示TC，LDL－C，7G和FIDL－C的升高均可導(dǎo)致血漿黏度增高，紅細(xì)胞變形性降低；TC，LDL－C，HDL－C可能導(dǎo)致血液纖溶活性降低。

3 討 論

以往的高脂血癥家兔動(dòng)物模型研究中，大多只關(guān)注造模末期家兔血脂、血液流變學(xué)變化，尚缺少在造模過程中對(duì)家兔血脂和血液流變學(xué)變化的動(dòng)態(tài)觀察。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)2周、4周、8周高脂血癥家兔造模過程中的血脂、血液流變學(xué)的動(dòng)態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)其各指標(biāo)都有不同的變化特點(diǎn)，并且有一定的相關(guān)關(guān)系。這些發(fā)現(xiàn)對(duì)探討中醫(yī)的痰濁與血瘀證的相關(guān)關(guān)系的生物學(xué)基礎(chǔ)提供了有意義的資料。

本實(shí)驗(yàn)中，家兔血清TC，LDL－C在高脂飲食2周即呈顯著性升高，TG增高較為緩慢，在高脂飲食8周時(shí)增高才出現(xiàn)顯著性差異。表明家兔對(duì)高脂飼料敏感性高，血漿中TC濃度升高迅速，但TG增高較緩，推測(cè)這可能是由于家兔對(duì)膽固醇易吸收而代謝較慢，而對(duì)TG正相反。現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合研究發(fā)現(xiàn)，痰濁證病人的血清TC，TG，LDL-C含量明顯高于非痰濁組病人和正常人，認(rèn)為血脂水平與痰濁密切相關(guān)，血清TC，TG，LDL－C含量升高可以作為痰濁證微觀辨證及判別治療痰濁證藥物療效和病程進(jìn)展的微觀指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)中，家兔血漿黏度在高脂飲食2周即呈顯著性升高，紅細(xì)胞變形性和TT在高脂飲食2周呈顯著性降低。TT反映機(jī)體纖溶活性，TT降低，表明機(jī)體纖溶活性降低。在本實(shí)驗(yàn)中，APTT在高脂飲食4周一過性降低，PT也隨高脂飼料喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)有降低趨勢(shì)。APTT，PT反映機(jī)體凝血機(jī)能，APTT，PT降低，則血液易凝。這種血液流變性改變，就反映在機(jī)體出現(xiàn)血瘀證候時(shí)，呈“濃”“黏”“凝”“聚”狀態(tài)。血液流變學(xué)改變是血瘀證發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)，可作為血瘀證微觀辨證的依據(jù)。在高脂血癥家兔模型血脂，血液流變學(xué)都發(fā)生了異常改變，該模型體現(xiàn)了痰濁和血瘀兩種證候的生物學(xué)變化。

在本試驗(yàn)的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，高脂喂養(yǎng)家兔血清TC，TG，LDL－C，HDL－C與血漿黏度和紅細(xì)胞變形性均有顯著相關(guān)陸，TC，LDL－C，HDL－C與TT密切相關(guān)。血液中TC，HDL－C，LDL－C的增加會(huì)增加紅細(xì)胞和血漿的流動(dòng)時(shí)間，降低紅細(xì)胞膜的滲透性，特別是血LDL的增加可以顯著增加血液黏度，對(duì)紅細(xì)胞的滲透性，流變學(xué)和流動(dòng)性有重要影響。紅細(xì)胞變形性的降低可導(dǎo)致紅細(xì)胞膜的改變并最終改變血液黏度。血脂異常引起的病理產(chǎn)物濕濁、痰凝、瘀血分別為高脂血癥的早期、中期、后期病理產(chǎn)物，“濕濁”進(jìn)入營(yíng)血，循行經(jīng)脈，流走全身，日久則可形成“痰凝”，阻于血脈，影響氣血運(yùn)行，導(dǎo)致血瘀，最終痰瘀同病，血液表現(xiàn)出“黏”“濃”“凝”“聚”的流變學(xué)改變。痰濁與血脂水平相關(guān)，而血瘀證表現(xiàn)的血液“黏”又反映為血液黏度、紅細(xì)胞變形性改變，“凝”反映為纖溶活性降低，凝血酶時(shí)間縮短。本研究顯示TC，TG，LDL－C，HDL－C與血漿黏度和紅細(xì)胞變形性均有顯著相關(guān)性，TC，LDL－C，HDL－C與TT密切相關(guān)，這在一定程度上反映了中醫(yī)“痰濁證”與“血瘀證”相關(guān)的生物學(xué)基礎(chǔ)。

本文編輯 郭懷印