摘要：目的 評價臍血源神經(jīng)干細(xì)胞治療肌萎縮側(cè)索硬化癥的療效及安全性。方法 對肌萎縮側(cè)索硬化病人治療前后進(jìn)行血液肝腎功能、電解質(zhì)、血清酶學(xué)、血糖、血脂、細(xì)胞及體液免疫測定，進(jìn)行Norris評分，觀察癥狀體征改變。結(jié)果 病人自身前后比較的結(jié)果顯示，經(jīng)治療后血白細(xì)胞、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶、T細(xì)胞、Th細(xì)胞、IgG以及Norris評分與治療前比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。病人近期的病情有顯著改善。結(jié)論 臍血源神經(jīng)干細(xì)胞移植后在近期內(nèi)各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)結(jié)果顯示，干細(xì)胞具有高安全性，有較明顯的臨床效果，但有待繼續(xù)觀察和隨訪。

關(guān)鍵詞：神經(jīng)干細(xì)胞；肌萎縮側(cè)索硬化癥；細(xì)胞免疫；體液免疫

中圖分類號：R746 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672－1349(2007)10－0911－03

肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)是神經(jīng)系統(tǒng)疑難病。它至今病因不明，發(fā)病似乎逐年上升，而且致死、致殘率高，從發(fā)病到死亡，帶病生存的長則(6～8)年，短則數(shù)月。由于該病病初確診困難，及至確診時已經(jīng)形成多灶性損害。盡管關(guān)于病因的學(xué)說較多，但是迄今為止，還未發(fā)現(xiàn)特效的治療方法，亦沒有產(chǎn)生顯著療效的藥物。神經(jīng)干細(xì)胞的問世，為該病的治療帶來一線光明，多家均有報道。我院對于22例已經(jīng)確診的ALS病人使用臍血源神經(jīng)干細(xì)胞治療，取得了一定的近期臨床效果，同時對于接受該療法的大部分病人進(jìn)行了將近1年的隨訪，現(xiàn)將，臨床研究的近期評分及安全性評價結(jié)果報道如下，為進(jìn)一步研究該病提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 一般資料 2005年11月～2007年4月在我院治療的22例病人，男15例，女7例；病程6個月至8年(2.08年±1.65年)；年齡38歲～70歲(53.58歲±10.94歲)；其中外國籍19例，中國籍3例。職業(yè)有商人、海員、工程師、工人、公司職員、干部等。全部病人均在所在國確診為ALS。到達(dá)我院后，再依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)科專業(yè)委員會2000年制定的ALS標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核無誤。

1．2 方法 22例ALS病人均常規(guī)進(jìn)行血液HIV－DNA抗體、梅毒抗體、肝炎標(biāo)志物(甲乙丙丁戊IgM抗體)、Torch 5項(xiàng)以及頭頸磁共振成像(MRI)檢查。

采用病人自身前后對照的方式觀察干細(xì)胞治療期間各項(xiàng)指標(biāo)的變化。干細(xì)胞治療前及結(jié)束后測定血液免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM)、補(bǔ)體C3、C4、T細(xì)胞亞群、肝腎功能、血脂、血糖、電解質(zhì)、血清酶學(xué)(方法均按試劑盒要求進(jìn)行)、血尿常規(guī)，對病人肢體功能及生活能力采用Norris量表進(jìn)行評定。

干細(xì)胞來自健康分娩孕婦的臍帶血(檢測HIV、梅毒抗體、肝炎標(biāo)志物5項(xiàng)、Todch5項(xiàng)等)，經(jīng)由深圳市北科細(xì)胞工程研究所進(jìn)行分離、提取、培養(yǎng)、擴(kuò)增及向神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)傳代(4—6)代。每份細(xì)胞數(shù)量約1.5×10⁷/mL～3.0×10⁷/mL，其中約80％間質(zhì)干細(xì)胞，20％神經(jīng)前體細(xì)胞。每次移植前由病人簽署干細(xì)胞治療知情同意書。通過腰椎穿刺脊髓蛛網(wǎng)膜下腔或靜脈途徑植入干細(xì)胞。每人接受(4～6)次治療，每次間隔1周。

干細(xì)胞移植治療后的次日起靜脈給予神經(jīng)生長因子9000AU誘導(dǎo)干細(xì)胞向神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)化，連用3d。

每位病人治療期間均根據(jù)責(zé)任肌肉及關(guān)節(jié)、腦神經(jīng)損傷的程度，接受平衡、關(guān)節(jié)活動度訓(xùn)練及針刺(根據(jù)取穴原則遠(yuǎn)近結(jié)合，6穴～8穴，平補(bǔ)平瀉)治療。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，在SPSS 11.5軟件包進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

22例ALS病人治療前的HIV－DNA抗體、梅毒抗體、肝炎標(biāo)志物、Torch 5項(xiàng)檢查均正常。按類型分別統(tǒng)計相關(guān)指標(biāo)。

2．1 治療前后部分血常規(guī)指標(biāo)變化情況 白細(xì)胞總數(shù)及血小板治療后均較治療前高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但均在正常范圍。其余指標(biāo)治療前后比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表1。

2．2 治療前后肝功能及部分酶學(xué)指標(biāo)改變情況 治療后血清酶學(xué)普遍下降。其中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。其余指標(biāo)治療前后比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表2。

2．3 治療前后腎功能與電解質(zhì)改變情況(見表3)

2．4 治療前后T細(xì)胞亞群和體液免疫指標(biāo)改變情況 治療后與治療前比較，總T細(xì)胞、Th細(xì)胞、IgG測值均較前下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；Ts細(xì)胞上升，其他變化不大，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表4。

2．5 治療前后血脂、血糖改變情況(見表5)

3 討 論

ALS是神經(jīng)系統(tǒng)疑難病，目前無特效治療方法，被認(rèn)為是神經(jīng)系統(tǒng)的“癌癥”。關(guān)于其病因研究及治療方法已有另文報道。既往關(guān)于神經(jīng)干細(xì)胞治療的研究已見諸于專業(yè)期刊。但采取的是胚胎嗅鞘細(xì)胞及自體骨髓干細(xì)胞，未見神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用后全面的肝腎功能、電解質(zhì)、血常規(guī)、免疫指標(biāo)的安全性評價，療效反映的是干細(xì)胞治療后的近期效果或者個案報道。本研究中涉及了多方面的指標(biāo)，對于ALS常規(guī)檢查不能反映其疾病的病因，MRI僅僅表現(xiàn)大部分病人伴有頸椎間盤突出，不表現(xiàn)其有椎間盤突出癥。EMG也只反映其損害為神經(jīng)源性，具體的病因不清楚，目前沒有針對病因的治療，現(xiàn)有的治療方法，遠(yuǎn)期效果均不好，對該病的診斷治療，神經(jīng)科醫(yī)生遭遇很大挑戰(zhàn)。

接受神經(jīng)干細(xì)胞治療的病人，停用目前常用的藥物如力魯唑及其他藥物。上述檢驗(yàn)結(jié)果中血常規(guī)的白細(xì)胞及血小板治療后均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，但是仍在正常值范圍。其升高的原因，可能是干細(xì)胞治療同時，成人均給予靜脈推注10 mg地塞米松防止變態(tài)反應(yīng)，療程結(jié)束后，一般次日早晨抽血，反映白細(xì)胞升高，病人沒有感染，無發(fā)熱，最清楚的原因?？赡苁羌に卮碳ひ穑话阍? d后下降。

谷草轉(zhuǎn)氨酶、肌酸磷酸激酶、乳酸脫氫酶治療后比治療前下降，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。這反映了在ALS的進(jìn)展期，受已損傷脊髓前角運(yùn)動神經(jīng)元的影響，骨骼肌失神經(jīng)，呈現(xiàn)節(jié)段性或部分萎縮，肌細(xì)胞發(fā)生炎性改變，出現(xiàn)部分病人的上述指標(biāo)升高，有的人肌酸磷酸激酶測值高出正常(3～4)倍，統(tǒng)計學(xué)離散度很大，但治療后均降至正常。表明神經(jīng)干細(xì)胞不僅可以促進(jìn)運(yùn)動神經(jīng)元的修復(fù)，而且對受累肌肉病變后釋放的酶有降解作用。而肝腎功能、電解質(zhì)這些主要指標(biāo)均穩(wěn)定，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。血糖治療前后均值都在異常范圍，治療后升高，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。但血糖升高可能的原因仍然是與單次使用皮質(zhì)激素有關(guān)。

細(xì)胞和體液免疫的水平反映體內(nèi)的免疫系統(tǒng)功能。干細(xì)胞治療后，有總T細(xì)胞、Th細(xì)胞、IgC測值下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，盡管總體在正常范圍內(nèi)，這種治療后測值的下降是否因應(yīng)用糖皮質(zhì)激素引起，需要今后設(shè)立部分組別，在最后一次干細(xì)胞治療后不用皮質(zhì)激素，采血后化驗(yàn)比較再行分析。

臨床上使用干細(xì)胞治療后，部分病人在個別治療時間后出現(xiàn)低或中等發(fā)熱，或腰痛，或頭痛，分析原因可能是治療后輕度的排斥反應(yīng)，或穿刺后的脊膜刺激癥，或低顱壓綜合征，經(jīng)對癥處理在(2～3)d內(nèi)可完全恢復(fù)正常。

關(guān)于附加平衡及關(guān)節(jié)活動度，針刺治療是否喧賓奪主，或者本身反映了康復(fù)理療對評價病人療效的影響。因此，認(rèn)為加入上述療法，僅僅是希望病人減少因制動或少動導(dǎo)致關(guān)節(jié)僵硬、肌肉廢用性萎縮。事實(shí)上很多病人接受干細(xì)胞治療前，已經(jīng)在服藥或者接受康復(fù)理療，但近期的效果并無質(zhì)的改變。干細(xì)胞治療加康復(fù)理療的模式，實(shí)際上為神經(jīng)科疑難疾病的治療開辟了新途徑。今后有可能設(shè)立對照分組進(jìn)一步評價其效果。

Norris量表反映ALS和運(yùn)動神經(jīng)元病的語言、認(rèn)知、職業(yè)能力、運(yùn)動能力，共有33個問題，每項(xiàng)滿分3分，最小0分。滿分為97分。治療后Norris評分上升，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在無實(shí)驗(yàn)室評價標(biāo)準(zhǔn)體系的前提下，量表反映的結(jié)果比較客觀，國外病人的病情變化也可依據(jù)該項(xiàng)國際公認(rèn)的量表進(jìn)行評價，對神經(jīng)干細(xì)胞的遠(yuǎn)期療效動態(tài)監(jiān)測。

總之，該項(xiàng)研究客觀反映了臍血源神經(jīng)干細(xì)胞治療ALS后各項(xiàng)重要指標(biāo)的變化。初步表明，臍血源神經(jīng)干細(xì)胞臨床應(yīng)用是安全的，對ALS的近期運(yùn)動能力、肌顫有改善作用。但是，畢竟ALS是神經(jīng)系統(tǒng)疑難病，病因不清，致病因子繼續(xù)攻擊神經(jīng)元，致使干細(xì)胞治療的遠(yuǎn)期效果不如脊髓損傷等病。表明干細(xì)胞僅可針對損傷本身進(jìn)行修復(fù)，并不能遏制病情惡化。干細(xì)胞近期的療效可能與其早期分泌的細(xì)胞因子或其他物質(zhì)有關(guān)，遠(yuǎn)期的療效才可能是干細(xì)胞建立的神經(jīng)聯(lián)系。經(jīng)隨訪，干細(xì)胞治療ALS后效果的維持約在(2～3)個月，此期過后，有病人重復(fù)使用仍然有效。因此，要想使用干細(xì)胞治療ALS，必須采用短程沖擊，隔段重復(fù)使用方能維持其效果，否則不能遏止其惡化。但最終還需闡明ALS的病因。研制新的藥物，基因治療或完善現(xiàn)時包括細(xì)胞療法在內(nèi)的各種治療方法，才有望征服該病。

本文編輯 郭懷印