摘要：目的：建立白帶丸中芍藥苷HPLC含量測(cè)定方法。方法：固定相：Kromasil 5u 100AC₁₈柱；流動(dòng)相：乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)；流速：lml·min^-1；檢測(cè)波長：230nm~柱溫：室溫。結(jié)果：該方法線性范圍為0.3878～1.55lμg(r=0.9996，n＝9)，平均加樣回收率為99.78％，RSD為0.36％(n＝9)。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確，簡便靈敏，可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；白帶丸；芍藥苷

中圖分類號(hào)：R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007－2349(2007)07－0035－02

白帶丸由黃柏(酒炒)、椿皮、白芍、當(dāng)歸、香附(醋制)5味中藥材組成，具有清熱，除濕，止帶的功效，用于濕熱下注所致的帶下病。中國藥典2005版一部只對(duì)其鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定，為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，完善和提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)對(duì)芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定。芍藥苷的含量測(cè)定方法已報(bào)道的主要有薄層層析法，薄層掃描法，紫外分光光度法，正交函數(shù)分光光度法，高效毛細(xì)管電泳法，反相高效液相色譜法及高效液相色譜法。本文以高效液相色譜法測(cè)定白帶丸中芍藥苷的含量作為評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的一個(gè)指標(biāo)。

1 儀器與試藥

1．1儀器Agilent 1100系列高效液相色譜儀，包括：四元泵，真空脫氣機(jī)，自動(dòng)進(jìn)樣品，VWD檢測(cè)器(可變波長檢測(cè)器)，Agilent 1100LC化學(xué)工作站；賽多利斯BP211D電子天平。

1．2試藥芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110736～200422，含量測(cè)定用)，白帶丸(廠家：福州海王金象中藥制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：040954，041056，050816)，乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。

2 色譜條件

色譜柱：Kromasil 5u 100AC，8柱(250×4.6ram)；流動(dòng)相：乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)；流速：lml·min^-1；檢測(cè)波長：230nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣體積：l0ul(自動(dòng)進(jìn)樣)；理論塔板數(shù)：按芍藥苷峰計(jì)算不得低于2000。

3 方法與結(jié)果

3．1對(duì)照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品10.34mg，加稀乙醇制成每lml含5.17×10^-2mg的溶液，搖勻，即得。

3．2供試品溶液的制備取本品約0.5g精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3．3線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液7．5，10，12.5，15，17.5，20，22.5，25，30tA注入高效濾相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以峰面積(mAU)Y對(duì)應(yīng)芍藥苷進(jìn)樣量(μg)X進(jìn)行回歸分析，得回歸方程：Y=1446.34X+44.41，r=0.9996(n=9)表明芍藥苷在0.3878～1.551g范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

3．4精密度試驗(yàn)分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液10μl，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積的RSD為0.18％(n=9)，表明芍藥苷進(jìn)樣精密度良好。

3．5重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一生產(chǎn)批號(hào)(041056)的樣品，按上述樣品溶液制備方法和色譜條件進(jìn)行6次平行測(cè)定，計(jì)算芍藥苷的平均含量為2.902mg·g^-1，RSD=0.54％(n＝6)，表明本法測(cè)定的重現(xiàn)性良好。

3．6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一生產(chǎn)批號(hào)(041056)的供試品溶液，分別在0、2、4、8、12及24h進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，結(jié)果芍藥苷平均含量為2.90mg·g^-1RSD=0.43％(n=6)，表明樣品溶液放置24h內(nèi)穩(wěn)定。

3．7回收率試驗(yàn)取已知含量的同一生產(chǎn)批號(hào)(041056)的樣品，采用加樣回收試驗(yàn)，分別以樣品量的80％，100％，120％的比例精密加入芍藥苷對(duì)照品，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量，得平均回收率為99.78％，RSD＝0.36％(n＝9)，結(jié)果見表1。

3．8樣品測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果3個(gè)批號(hào)(040954，041056，050816)的芍藥苷含量(nag·g^-1)分別為3.88，3.22，7.70。

3．9干擾試驗(yàn)?zāi)M處方制備不含白芍的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制1份陰性對(duì)照溶液。分別吸取芍藥苷對(duì)照品溶液，白帶丸供試品溶液和陰性對(duì)照溶液，按上述測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明其他各味藥材不干擾芍藥苷的測(cè)定見圖2～圖4。

4 討論

4．1流動(dòng)相的選擇文獻(xiàn)報(bào)道的高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷的方法較多，多用流動(dòng)相分別為乙腈：水(12:88)，水：甲醇(60:40)等系統(tǒng)，分離效果都不好，本實(shí)驗(yàn)中考察了甲醇：水(30:70)，乙腈：水(17:83)等流動(dòng)相，但分離也不佳，峰形差，而乙腈－0.1％磷酸溶液(15：85)可使樣品中芍藥苷峰與雜質(zhì)峰完全分離。參照《中國藥典》2005年一部白芍，逍遙散等含量測(cè)定項(xiàng)下芍藥苷的參數(shù)及本試驗(yàn)結(jié)果，規(guī)定芍藥苷峰的理論塔板數(shù)不低于2000。

4．2結(jié)果評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所采用測(cè)定方法測(cè)定芍藥苷，重現(xiàn)性良好，回收率高，且在該色譜條件下，芍藥苷進(jìn)樣精密度良好，故該法結(jié)論可靠，可作為白帶丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。