摘要：目的觀察丹紅注射液對(duì)大鼠局灶腦缺血模型的治療作用。方法采用自體血栓大腦中動(dòng)脈閉塞模型，觀察假手術(shù)組、局灶腦缺血組(對(duì)照組)、局灶腦缺血丹紅注射液治療組(治療組)神經(jīng)功能評(píng)分、腦梗死范圍、腦含水量、病理學(xué)改變等指標(biāo)的變化。結(jié)果造模3d后治療組腦含水量和神經(jīng)系統(tǒng)評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)；大鼠腦梗死體積于造模第5天治療組明顯小于對(duì)照組(P<0.05)；病理組織學(xué)觀察也可見(jiàn)治療組組織損傷減輕。結(jié)論 丹紅注射液對(duì)局灶腦缺血有明顯的治療作用一。

關(guān)鍵詞：腦梗死；丹紅注射液；局灶?lèi)廊毖捍笫?/p>

中圖分類(lèi)號(hào)：R743.3 R2855

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672—1349(2007)05—0421－02

丹紅注射液由中藥丹參、紅花科學(xué)提取精制而成，主要作用為活血化瘀，通脈舒絡(luò)。本研究采用大鼠自體血栓模型，觀察丹紅注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性腦梗死的治療作用。

1 材料與方法

1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康SD大鼠，體重(230～300)g，鼠齡(3～4)個(gè)月，由重慶醫(yī)科入學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1．2約物和試劑 丹紅注射液為濟(jì)南步長(zhǎng)制藥有限公司生產(chǎn)的原液，經(jīng)幣=慶中藥研究院制備濃縮10倍的濃縮液。紅四氮唑(TTC)由上海生物工程公司提供。

1．3儀器 FD2000圖像系統(tǒng)(北京天地公司)，24G靜脈留置針(REF，規(guī)格0.7mm×0.19mm)，4號(hào)硬脊膜外麻醉導(dǎo)管(型號(hào)F₃×70mm，0.7～1.0×700)，分析天平(日本島津)。

1．4實(shí)驗(yàn)方法

1 4．1分組及給藥24只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組，即假手術(shù)組、局灶脯缺血組(對(duì)照組)、局灶腦缺血丹紅注射液組(治療組)，每組8只。治療組按照2mL/kg給予丹紅濃縮注射液，對(duì)照組于等滲鹽水，術(shù)后6h從尾靜脈注入，每日1次，連續(xù)5d。

1．4 ．2局灶腦缺血模型制備，采用自體血栓大腦中動(dòng)脈閉塞模型(MCAO)：以3.5％水合氯醛腹腔麻醉，頸部正中直切口依次分離出左頸總動(dòng)脈(CCA)、頸外動(dòng)脈(ECA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)、電凝ECA分支，甲狀腺上動(dòng)脈、忱動(dòng)脈、結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈為重要分支翼腭動(dòng)脈，離斷ECA(似手術(shù)組到此為止)，從ECA插入24G靜脈留置針，拔出針芯，取血1mL，5000r/rain離心1min，按5：1吸取血漿及紅細(xì)胞，加入2u凝血酶，制成直徑約0.35mm的血栓，切成(1.5～2.0)mm，用麻醉導(dǎo)管吸取(6～8)個(gè)栓子，從靜脈留置針快速注入到ICA內(nèi)，蘇醒后按Bederson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺失評(píng)分，有體征者人選。

1．5檢測(cè)指標(biāo)

1．5．1神經(jīng)功能缺損評(píng) 分3組分別于術(shù)后1d，3d，5d進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，按Bedersm標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分，0級(jí)(0分)：無(wú)神經(jīng)功能障礙；1級(jí)(1分)：提大鼠尾，見(jiàn)癱瘓側(cè)前肢回收屈曲不能正常伸向地而；2級(jí)(2分)：除1級(jí)體征外，向癱瘓側(cè)推時(shí)感阻力較對(duì)側(cè)明顯降低；3級(jí)(3分)：除以上體征外，大鼠爬行時(shí)向癱瘓側(cè)施轉(zhuǎn)。

1．5．2腑梗死體積測(cè)定 造模后第5天伸經(jīng)功能缺損評(píng)分后斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦T，將剩余部分冠狀切片，置于2％TTC溶液中37℃孵育(15～20)min再放人4％多聚甲醛溶液中固定，梗死區(qū)為蒼白色，正常為均勻橘紅色，用TI2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定腦梗死體積。

1．5．3腦含水量測(cè)定(干濕重法)造模后1d，3d，5d 3組進(jìn)行沖經(jīng)功能評(píng)分后將動(dòng)物處死迅速取腦，將缺血側(cè)腑組織置于電子天平稱(chēng)濕重，然后放入電熱恒溫箱內(nèi)100℃烘烤24h取出，至電子天平稱(chēng)干重，計(jì)算公式：腦含水量(％)=(濕重－干重)／濕重×100％。

1．5．4組織病理學(xué)觀察 各組動(dòng)物以水合氯醛麻醉，4％多聚甲醛灌流固定，斷頭取腦，相同固定液中固定，乙醇梯度脫水，二甲笨透明，浸蠟包埋、切片，厚約5μm，HE染色，封固，光鏡下觀察病變區(qū)及附近腦組織變化。

1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果采用t檢驗(yàn)，用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。

2 結(jié)果

2．1 丹紅注射液對(duì)人鼠神經(jīng)功能的影響第1大，治療組神經(jīng)功能缺損評(píng)分低于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，第3天和第5天治療組評(píng)分明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。提示丹紅注射液可善大鼠神經(jīng)功能，但起效相對(duì)較慢。詳見(jiàn)表1。

2．2 丹紅注射液對(duì)腦梗死體積的影響 造模后第5天，治療組大鼠腦梗死體積(74.20±9.00)mL，明顯小于對(duì)照組(90.20±16.16)mL，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2．3丹紅注射液對(duì)惱含水量影響 造模后第1天治療組大鼠的腦含水量低于對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而第3天、第5天大鼠的腦含水量均低于對(duì)照組(P<0.05)。提示給予丹紅灃射液后可減少大鼠腦水腫狀況，但在造模3 d后較明顯。

2．4對(duì)照組與治療組組織病理學(xué)變化對(duì)照組可見(jiàn)腦組織部分壞死，細(xì)胞質(zhì)部分空泡化，胞核固縮，治療組細(xì)胞輕度腫脹，細(xì)胞質(zhì)輕度液化，胞核輕度固縮，較對(duì)照組減輕。

3 討論

急性腦血管病是現(xiàn)今病化率最高的三大疾病之一，其中尤以缺血性腦血管病為最多見(jiàn)(約占70％)。除發(fā)病率、致死率、復(fù)發(fā)率高外，由此引起的癱瘓、失語(yǔ)及癡呆不僅使病人的生存質(zhì)量低下，更是社會(huì)和家庭的沉重負(fù)擔(dān)。降低該病的病死率和致殘率的關(guān)鍵是積極進(jìn)行超早期搶救治療，主要途徑是：①溶解血栓，抗血小板凝聚，恢復(fù)腦血流灌注；②神經(jīng)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)治療，阻止由缺血及缺血后再灌注引起的腦組織一系列病理和生化反應(yīng)，降低致殘率。

丹紅注射液為中藥丹參、紅花按科學(xué)配方提取的復(fù)方制劑，其主要有效成分包括丹參酮、丹參酚酸、紅花黃色素等。從20世紀(jì)90年代以來(lái)，對(duì)于中藥丹參和紅花在治療缺血性腦血管病方面的作用和機(jī)制已有較多的研究，對(duì)這兩種藥物的主要有效成分及作用機(jī)制有以下幾點(diǎn)認(rèn)識(shí)：①丹參酚酸有較強(qiáng)的抗血小板凝聚的作用，可以顯著降低血漿的血栓素B2(TXB2)水平；②丹參酚酸和丹參酮有抗血栓形成、改善微循環(huán)、抗氧化損傷等作用；③紅花能有效也抑制血小板黏附、聚集，激活和釋放血栓素A₂(TXA2)，激活血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放前列環(huán)素(PGI₂)，糾正外周循環(huán)中TXA₂／PGI₂平衡失調(diào)，對(duì)腦缺血再灌注損傷具有積極的防治作用；④紅花黃色素可抑制血小板激活因子(PAF)介導(dǎo)的血小板活化作用。但對(duì)其復(fù)方制劑目前研究較少。

本組研究采用自體血栓閉塞大腦中動(dòng)脈構(gòu)建出大鼠急性腦缺血模型，然后對(duì)治療組大鼠給予丹紅注射液治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：造模3 d后治療組在腦含水量和神經(jīng)系統(tǒng)評(píng)分明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)；腦梗死體積從造模第5天治療組明顯小于對(duì)照組(P<0.05)。病理組織學(xué)觀察也可見(jiàn)治療組組織損傷減輕，提示丹紅注射液對(duì)局灶腦缺血有治療作用。但在造模第1天，治療組在腦含水量和神經(jīng)系統(tǒng)功能評(píng)分與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，至第3天才顯示其有效作用，提示該藥起效可能較緩。該藥具有改善缺血區(qū)血循環(huán)，改善神經(jīng)功能缺失評(píng)分，但是其作用詳細(xì)機(jī)制尚待闡明。

作者簡(jiǎn)介：鄧芬(1972—)，女，主治醫(yī)師，現(xiàn)為重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科碩士研究生(郵編：400010)；胡長(zhǎng)林、謝運(yùn)蘭，工作于重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院。

(本文編輯 郭懷印)