關(guān)鍵詞大巖桐疫病;煙草疫霉；病原鑒定；生物學(xué)特性;藥劑防治

中圖分類號(hào)S482.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào) 0517-6611（2025）14-0138-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.14.028

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

ResearchontheathogenIdenticationologicalCharacteristicsadIdoorChemicalCotrolScreeningofhytophthoralightof Gloxinia

LI Wan-ying'，IUHai-tao，F(xiàn)ENGShu-jie2（1NanduPropertyServices GroupCo.，Ld.Hangzou，Zhejiang3140o;2.ColegeofHor ticulture，South China Agricultural University，Guangzhou，Guangdong 510642）

AbstractUsigteetdoftueolationepatogecacteroftheaseofeoatifasatednddntfdel naryresearchlicalhaacteristofpatgadteectsofintiumperaureghtdgh temperatureonyeliagrohndsporlaowereeasuedessitytoinsofdiferentfungdeseretestedThsultsdicatethatthpathogesoflghtoiasseparatdnddetifdastooranicotaSifugicids，cudgacbi thomarph，thiram·ziram，carbendazim·thiram，carbendazim·pyraclostrobin，and nitrosporin ?? thiram，could 100% inhibit the mycelial growth and sporulation of tobacco phytophthora，with the worst being carbendazim，metoclopramide，and fipronil.

KeywordsPtophorightofloina;hythoranicotae;athogenidentifatio;loicalcharacterists;Cicatol

大巖桐（SinningiaspeciosaBenth）為大巖桐亞科大巖桐屬多年生草本，目前栽培的各類品種皆為雜交產(chǎn)物，園藝上統(tǒng)稱為雜種大巖桐（Sinningiahybrida）[1]。因花期長(zhǎng)、花朵絢麗、品種眾多，是節(jié)日點(diǎn)綴和裝飾室內(nèi)的理想盆花，近年在花卉市場(chǎng)日趨興旺。大巖桐品種多達(dá)200個(gè)，隨著大巖桐應(yīng)用及生產(chǎn)的不斷推廣，病害防治作為大巖桐盆花生產(chǎn)中的一個(gè)重要管理措施，目前已報(bào)道的病害以灰霉病和疫病為主，但僅局限于簡(jiǎn)單診斷及藥劑防治，從致病菌鑒定、發(fā)生機(jī)理到具體防治措施的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。疫病常見(jiàn)發(fā)生在煙草上誘發(fā)煙草黑脛病[2-3]，其他花卉疫病的研究不多，主要為蘭花[4-5]。筆者針對(duì)廣州地區(qū)大巖桐栽培生產(chǎn)中常見(jiàn)的疫病，進(jìn)行了病原鑒定及其生物學(xué)特性以及室內(nèi)防治藥劑的篩選研究，為其科學(xué)防治提供了重要參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料大巖桐患病病株從華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院花圃摘取，采集特征明顯、發(fā)病普遍且較重的葉片及莖部為標(biāo)本。培養(yǎng)基配制方法參考方中達(dá)[和鄭小波[7]。殺菌劑材料見(jiàn)表1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1病原菌的分離和培養(yǎng)。采用組織分離法得到菌株，再用土壤浸出液采用菌絲叢水培法誘導(dǎo)產(chǎn)生大量孢子囊，進(jìn)一步通過(guò)單孢子囊分離得到純化的菌株[8]。純化菌株接入試管斜面培養(yǎng)，轉(zhuǎn)入 14^°C 培養(yǎng)箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2致病性測(cè)定。根據(jù)柯赫氏法則[，將純化的菌株人工接種在健康的植株上，以空白培養(yǎng)基為對(duì)照，待植株發(fā)病后，觀察所表現(xiàn)的癥狀：然后再次分離培養(yǎng)，比較前后分離病原菌菌落、分生孢子、孢子囊及厚垣孢子等形態(tài)特征，確定其致病性。接種無(wú)病原菌的培養(yǎng)基塊作為對(duì)照。每處理重復(fù)3次。接種后定期觀察發(fā)病情況，同時(shí)再次進(jìn)行組織分離病原物，重復(fù)3次。

1.2.3病原菌鑒定。疫霉菌的鑒定參考余永年的《中國(guó)真菌志·第六卷·霜霉目》、鄭小波的《疫霉菌及其研究技術(shù)》、戴芳瀾[的《中國(guó)真菌總匯》和魏景超[1的《真菌鑒定手冊(cè)》。對(duì)病原菌的孢子和菌落形態(tài)以及分離所得的病原菌回接癥狀進(jìn)行觀察，鑒定病原菌種類。結(jié)合生長(zhǎng)速率的測(cè)定：將純化的菌株用無(wú)菌打孔器打出直徑 5mm 的菌餅，將菌餅移植于培養(yǎng)基平板上，在 20～28°C 下培養(yǎng)4d后，觀察病原菌菌落形態(tài)和顏色，并測(cè)定菌株的菌落直徑；利用菌絲通過(guò)水培法誘導(dǎo)產(chǎn)生孢子囊并刺激游動(dòng)孢子釋放，測(cè)量其形態(tài)大小，記錄結(jié)果并顯微照相，以此觀察孢子形態(tài)與子實(shí)體；對(duì)純化的菌種進(jìn)行鑒定，孢子囊及厚垣孢子等大小測(cè)30個(gè)，統(tǒng)計(jì)其幅度，最后根據(jù)記載的總性狀和形態(tài)特征鑒定到種。分子生物學(xué)鑒定采用PCR提取DNA，選用真菌通用引物[上海生工生物工程有限公司合成的ITS1（ 5^′? -TCCGTAGGTGAAC-CTGCGG-3ITS4（ 5^°- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3進(jìn)行PCR擴(kuò)增，最終將測(cè)序所得序列提交到NationalCenterforBiotechnologyInformation（NCBI）核酸數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，并下載相應(yīng)菌株的序列，再導(dǎo)人MEGA6.0軟件進(jìn)行多序列比對(duì)分析，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定菌株類別。

1.2.4病原菌生物學(xué)特性研究。用無(wú)菌打孔器在PDA平板邊緣打取預(yù)培養(yǎng)7d、直徑 5mm 的菌塊，分別植人不同培養(yǎng)基內(nèi)，除溫度測(cè)定外其他研究置于 25～30^°C 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。5d后用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，14d后在顯微鏡下用血球記數(shù)板測(cè)定產(chǎn)孢量[12]。每處理3皿，重復(fù)3次。

篩選疫霉菌的最適培養(yǎng)基OMA后，研究不同培養(yǎng)基、溫度 ??pH 、光照和高溫對(duì)該病原菌菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量的影響。

1.2.5殺菌劑藥效測(cè)定。采用菌絲生長(zhǎng)速率測(cè)定法[13-14]，將殺菌劑加入定量OMA培養(yǎng)基中，配成濃度為300和 800mg/L 含不同殺菌劑的培養(yǎng)基平板，以不加殺菌劑的處理作為對(duì)照。疫霉菌于OMA中 26^°C 下培養(yǎng)，5d后測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑， 14d 后測(cè)定產(chǎn)孢量。每處理重復(fù)3次。抑制率計(jì)算公式：

抑制率 Σ=Σ （對(duì)照直徑或產(chǎn)孢量-處理直徑或產(chǎn)孢量）/對(duì)照直徑或產(chǎn)孢量 ?×100%

1.3數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)結(jié)果采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。因產(chǎn)孢子囊及厚垣孢子的量無(wú)法精確計(jì)算，故采用對(duì)總體數(shù)量大體分類進(jìn)行衡量。標(biāo)準(zhǔn)：-表示未產(chǎn)孢子囊及厚垣孢子， + 表示極少量（1～9個(gè)）， ⁺⁺ 表示少量（10～49個(gè)）， ⁺⁺⁺ 表示中等數(shù)量（50～99個(gè)）， ⁺⁺⁺⁺⁺ 表示很多（ 100～199 個(gè)） ⁺⁺⁺⁺⁺⁺ 表示極多（ gt;200 個(gè)）。

2 結(jié)果與分析

2.1致病性將分離得到的病原菌接種至刺傷后的健康葉片和莖上，發(fā)病癥狀與植株自然發(fā)病癥狀相似（圖1）。接種2d后接種部位形態(tài)正常但出現(xiàn)淺色不明顯黑色水漬狀，至第5天整個(gè)葉片及莖部變黑萎縮并完全腐爛，最終整株死亡。對(duì)照無(wú)發(fā)病癥狀。采集發(fā)病與對(duì)照的接種處進(jìn)行分離，并與最初分離所得病菌進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明，分離出的病原菌為大巖桐疫病的致病菌。

2.2病原菌分類大巖桐疫病病菌在OMA 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好，菌落均勻一致平鋪向外生長(zhǎng)，邊緣平整較明顯。菌絲白色，寬 3.8～12.5μm ，孢子囊形態(tài)不一，多為檸檬形或?qū)捖研?，少?shù)球形及無(wú)規(guī)則，大小變化較大，通常為（ 22.3～ 60.0）μm×（15.0～45.0）μ μm ，具明顯乳突 2.5～6.0μm ，多為1個(gè)，極少具2個(gè)乳突，脫落孢子囊具短柄。游動(dòng)孢子大多經(jīng)孢囊口釋放，少數(shù)經(jīng)泡囊放出，排孢孔 2.5～6.3μm 。休止孢球形，直徑 7.4～11.6μm 。厚垣孢子球形，頂生或間生，具明顯壁，直徑 17.4～50.0μm 。無(wú)卵孢子。以上培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征符合煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）的標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)[7，9]（圖2、3）。

以疫霉菌株DNA為模板，通用引物ITS1/ITS4擴(kuò)增得到1條 946bp 的清晰條帶，將此PCR產(chǎn)物測(cè)序后提交到Gen-Bank中，經(jīng)Blast比對(duì)后發(fā)現(xiàn)，病原真菌的rDNA-ITS序列與Phytophthoranicotianae的序列相似度高達(dá) 99% 。依據(jù)比對(duì)結(jié)果構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，表明該菌應(yīng)歸為Phytophthoranicotianae。結(jié)合形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)鑒定，確定大巖桐疫病的致病菌為煙草疫霉P.nicotianae。

ig.1Thediseasesyptomsonthestemsandleavesofgoxiaaftrnoculationwiththepathogenofpytophhorabligtof gloxiiafor3da

2Front and back views of pathogen of phytophthora blight of gloxinia in the PDA and OMA culture media 注;A、B.不同孢子囊形態(tài)，C.脫落孢子囊，D、E.厚垣孢子，F(xiàn).休止孢，標(biāo)尺 =10μm 。 Note：A，B.diferentorecapsulemorphologies;Cshddingsporecapsules;DE.thick-walledspores;drantpor;ale ：=10μm

Fig.3The microscopic morphology of the pathogen of phytophthora blight of gloxinia

2.3病原菌的生物學(xué)特性

2.3.1不同培養(yǎng)基對(duì)菌絲和產(chǎn)孢的影響。從菌落菌絲致密程度來(lái)看， LBA，V₈ 和TA培養(yǎng)基，菌絲致密豐富；CA、OMA和CMA培養(yǎng)基，菌絲平展均勻，邊緣清晰；PSA、PDA和SBA培養(yǎng)基，菌落邊緣不清晰較不平整。而在Czapek培養(yǎng)基上，菌絲極稀疏。從菌絲生長(zhǎng)速率看，最適宜煙草疫霉菌落生長(zhǎng)的培養(yǎng)基是OMA，第4天菌絲直徑達(dá) 80.0mm 。其次是LBA、SBA和CMA培養(yǎng)基。對(duì)于產(chǎn)孢子囊而言，CMA培養(yǎng)基最多， TA，0MA，V₈ 與PDA培養(yǎng)基相對(duì)較多，Czapek培養(yǎng)基則未見(jiàn)孢子囊的產(chǎn)生（表2）。

2.3.2不同溫度對(duì)菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響。煙草疫霉菌絲生長(zhǎng)的溫度為 10～36^circC ，最適生長(zhǎng)溫度為 26^°C 。由表3可知，煙草疫霉菌絲在 14～32°C 可以產(chǎn)孢子囊或厚垣孢子，在22和 24^°C 時(shí)產(chǎn)孢子囊及厚垣孢子量最多，隨后隨溫度降低或升高產(chǎn)孢能力均下降。

注：同列不同大寫字母表示差異極顯著（ 。Note：Different capital letters in the same column indicate extremely significant difference（ Plt;0.01 ）

2.3.3不同光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響。從表4可以看出，全暗處理對(duì)煙草疫霉菌培養(yǎng)最有利，菌落生長(zhǎng)最快且中心及邊緣菌絲產(chǎn)孢子囊及厚垣孢子的數(shù)量也較另2種處理多。連續(xù)光照與光暗交替則對(duì)于菌絲直徑無(wú)顯著差異，但對(duì)于產(chǎn)孢則是光暗交替更適合。

注：同列不同大寫字母表示差異極顯著（ 。Note：Different capital letters in the same column indicate extremely significant difference（ Plt;0.01 ）

2.3.4不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響。煙草疫霉菌在pH4～11 的固體培養(yǎng)基上都能生長(zhǎng)，相對(duì)最適生長(zhǎng)pH為6～^10，pH 在7、8和9時(shí)無(wú)顯著差異。孢子囊及產(chǎn)孢總量總體呈先增后減趨勢(shì)，中心處在pH為9時(shí)總量最大；邊緣區(qū)在 pH8 時(shí)產(chǎn)孢總量及孢子囊最大，產(chǎn)孢總量為200個(gè)左右，孢子囊為60個(gè)左右（表5）。

2.3.5高溫對(duì)菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響。煙草疫霉菌在水溫40和 45^°C 處理 5～30min ，菌絲在OMA培養(yǎng)基上可以再生長(zhǎng)。在水溫 50^qC 進(jìn)行處理時(shí)，煙草疫霉菌的最大承受時(shí)間為 15min，20min 則對(duì)菌絲生長(zhǎng)具有完全抑制作用。中心處經(jīng)熱水處理后產(chǎn)孢總量整體減少，但不同處理間無(wú)顯著差異，所有處理產(chǎn)孢子囊個(gè)數(shù)都在10以下。邊緣處適當(dāng)溫度的熱水處理對(duì)于煙草疫霉產(chǎn)生孢子囊及厚垣孢子的總量有一定的促進(jìn)作用， 40% 熱水處理，產(chǎn)孢總量較對(duì)照有所增加，但總體隨溫度升高及時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)于厚垣孢子和孢子囊的產(chǎn)生具有一定抑制作用， 45^°C 熱水處理 10min 產(chǎn)孢總量及孢子囊比對(duì)照明顯減少（表6、7）。

2.3.6殺菌劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的影響。代森錳鋅、烯酰嗎啉、福美雙·福美鋅、多菌靈·福美雙、多菌靈·嘧霉胺和腈菌·福美雙對(duì)煙草疫霉的抑制作用較強(qiáng)，在 300mg/L 下菌絲完全不生長(zhǎng)且不產(chǎn)孢；百菌清、甲基硫菌靈·硫磺2種藥劑不同濃度下均不產(chǎn)孢。抑制效果最差的為多菌靈、甲基托布津和霜霉威，在 800mg/L 濃度下菌落生長(zhǎng)抑制率分別為1.1% 、 15.9% 和 16.8% （表8、9）。

注：不同大寫字母表示差異極顯著（ 。Note：Different capital letters indicate extremely significant difference（ Plt; 0.01）.

注：同列不同大寫字母表示差異極顯著（ 。Note：Different capital letters in the same column indicate extremely significant difference （ （Plt;0.01） ）

3結(jié)論與討論

同種病原菌的生物學(xué)特性常因不同的寄主、地理環(huán)境、栽培管理措施等表現(xiàn)出較大差異。該研究通過(guò)大巖桐病株中分離出大巖桐煙草疫霉菌，結(jié)果表明，燕麥培養(yǎng)基既利于菌絲生長(zhǎng)又利于產(chǎn)孢，可作為大巖桐煙草疫霉菌研究的常規(guī)培養(yǎng)基。該菌絲及孢子囊等均較耐高溫，但耐低溫能力差，與疫病在雨水充沛、高溫高濕的春夏季容易流行相吻合；故大巖桐栽培基質(zhì)的消毒至少保證 50^qC.20min 以上的消毒過(guò)程，以減少病菌的傳播及殘存條件。菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的pH 略偏堿性，與大巖桐栽培喜微酸性土壤、疫病少發(fā)生在根部及基部相吻合，在選用基質(zhì)及施肥時(shí)可優(yōu)先考慮偏酸性材料，調(diào)整栽培環(huán)境酸堿度，減少病害滋生。全暗條件利于菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢，增加光照對(duì)菌絲生長(zhǎng)抑制效果顯著，對(duì)產(chǎn)孢影響不大。生產(chǎn)過(guò)程中注意栽植密度，保證良好通風(fēng)透光，抑制菌絲及產(chǎn)孢的形成。

該研究對(duì)21種藥劑的室內(nèi)藥效檢測(cè)表明，代森錳鋅、烯酰嗎啉、福美雙·福美鋅、多菌靈·福美雙、多菌靈·嘧霉胺和晴菌·福美雙6種殺菌劑能 100% 抑制煙草疫霉菌菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)孢，最差的是多菌靈、甲基托布津和霜霉威。

疫病是一類土傳病害，在防治過(guò)程中，除在栽培前期做好各方面的品種選定、消毒殺菌等工作外，在栽培過(guò)程中的水肥管理、通風(fēng)透光、衛(wèi)生管理等也相當(dāng)重要，根據(jù)以上研究結(jié)果對(duì)應(yīng)調(diào)整栽培生產(chǎn)環(huán)境，進(jìn)行綜合科學(xué)防治。同時(shí)生產(chǎn)中做到早發(fā)現(xiàn)早處理，選用有效的保護(hù)性和內(nèi)吸性殺菌劑交替使用，避免產(chǎn)生抗藥性。

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作者簡(jiǎn)介李萬(wàn)英（1990—），女，江西吉安人，工程師，碩士，從事園林綠化養(yǎng)護(hù)全方位管理及技術(shù)研究。*通信作者：劉海濤，副教授，從事花卉栽培與育種研究；馮淑杰，副教授，從事園藝植物病害的綜合防治研究。

收稿日期 2024-07-09