關(guān)鍵詞冬蓀；絨毛木霉；咪鮮胺錳鹽；抗藥性；敏感基線

中圖分類號(hào)S482.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào) 0517-6611（2025）14-0134-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2025.14.027

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Establishing SensivityBaselineandFungicide-resistance Monitoring ofPathogen ofPhalus dongsun tProchloraz Manganese Chlo ride Complex

LIU Zhong-xuan，WANGJing，WANGFang（Guizhou AcademyofSciences/GuizhouInstituteof Biology，Guiyang，Guizhou5009） AbstractIdertofurterexploresensitivityandesistanceofTrichodeatomentosum，thpathogenofPalusdongsungenold，to Prochloraz Manganese Chloride Complex，the sensitivity of 133 isolates of T. tomentosum to the fungicide was determined by the method of mycelialgrowthrateandtesesitibaselinwastablisdesistantsolatesandfrequencyeredeteedusingthemetdofinimuminhibitoryconcentrationandteresistancelevelsofdiferentisolateswerealsoevaluated.Theresultsindicatedthattheangeof EC₅₀ valuesofProchlorazManganeseChlorideComplexwasfrom0335to7.6941mg/LThesenstivityfrequencydisributionshowedacotiuous unimodalcurve，hichasininewithtenoraldistributionyK-Smethod.Tetestedstrainsdidnotshowsignificantdugresistane.The average value （ 3.8572mg/L ）of EC₅₀ can be used as sensitivity baseline to Prochloraz Manganese Chloride Complex.There are significant diferencesinesesiivityofstaisofpatogstPrcloazMangaseCodeComplexirentegosostfestedtais aresensitive or low resistant. Their average frequency is 85.23% . This indicates that the fungicide still has good antibacterial effect. Only a few strains are high resistant and the average frequency is 8.93% . The results of this study will provide a theoretical basis for the control of T. tomentosum by Prochloraz Manganese Chloride.

KeywordsPhalusdongsun;richoderatomentosu;rochloazManganseChlodeComplex;ungide-rsistaneSenstivityselin

冬蓀（Phallusdongsun）隸屬鬼筆科（Phallaceae）鬼筆屬（Phalus）[1]，野生型常生于竹林根部，其肉感松脆、味道鮮美，是一種可人工種植的藥食兩用菌類。國(guó)內(nèi)主要分布于四川、云南、廣東、貴州等地，冬蓀子實(shí)體未成熟前為球形或橢圓形、實(shí)心的蛋狀，俗稱菌蕾或菌蛋，直徑 5～30cm ，半埋土生，灰白色，基部有白色菌索與土壤相連以吸取營(yíng)養(yǎng)，后期菌蛋頂端開裂破殼長(zhǎng)出黑色菌蓋、白色菌柄、無(wú)裙的子實(shí)體[2-4]。冬蓀富含多糖、糖醛酸聚糖、紫蘇烯、異山梨醇、氨基酸、麥甾醇等成分，子實(shí)體具有一定的活血祛瘀、治療風(fēng)濕、抗氧化、抗癌作用，適度食用可保健、防病、增強(qiáng)免疫力[5-8]在貴州省，冬蓀成為助推“十三五”“十四五”農(nóng)村農(nóng)業(yè)和林下經(jīng)濟(jì)高質(zhì)量發(fā)展的主要食用菌品種之一。2019年以來(lái)，在貴州省多地發(fā)現(xiàn)冬蓀綠霉病，嚴(yán)重制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展，經(jīng)筆者團(tuán)隊(duì)研究已明確該病害病原為絨毛木霉（T.tomentosum），其對(duì)合法登記的食用菌類殺菌劑咪鮮胺錳鹽（中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)http：//www.chinapesticide.org.cn/）有較高的敏感性[9]。近3年的調(diào)查顯示，該病害發(fā)病率為 10%～38% ，在高溫高濕（ 30^c 以上）天氣發(fā)病嚴(yán)重、傳染性強(qiáng)，重度發(fā)病的菌蛋常腐爛干癟無(wú)法出菇，無(wú)子實(shí)體產(chǎn)生而絕收，中重度感病的菌蛋大部分能出菇，但子實(shí)體成活率和產(chǎn)品質(zhì)量大幅降低，輕度發(fā)病菌蛋一般能出菇，但產(chǎn)品數(shù)量和質(zhì)量顯著下降

目前，關(guān)于真菌病害的防治仍以化學(xué)防治為主，但長(zhǎng)期使用化學(xué)藥劑極易導(dǎo)致病原產(chǎn)生抗藥性，病原對(duì)藥劑的敏感性降低，防效隨之下降，因此，監(jiān)測(cè)病原真菌抗藥性是作物病害防治的重要組成[10-1]，目前關(guān)于筆者所鑒定的病原絨毛木霉的利弊研究極少，研究表明，絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽和苯醚甲環(huán)唑敏感性較高，且二者適當(dāng)混配還具有增效作用[9]咪鮮胺類殺菌劑于1977年由艾格福公司開發(fā)，其結(jié)構(gòu)中的咪唑基團(tuán)能抑制細(xì)胞質(zhì)膜中麥角固醇生物合成以達(dá)到抑菌效果[12]，至今已在超過(guò)50個(gè)國(guó)家30余種作物上登記使用，對(duì)子囊菌和半知菌類引起的多種作物病害病原有較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)水果、蔬菜儲(chǔ)存期病害具有較高防治活性，咪鮮胺或咪鮮胺錳鹽的可濕性粉劑、乳油、懸浮劑在我國(guó)登記的作物包括柑橘、水稻、煙、油菜等，主要用于防治綠霉病、青霉病、菌核病、稻瘟病等[13-15]

前期研究表明，咪鮮胺錳鹽可作為冬蓀綠霉病防治的殺菌劑，為了更科學(xué)用藥、高效防治病害、延緩病原抗藥性，筆者測(cè)定2020—2021年采自貴州省不同區(qū)縣的133株絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性，建立絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感基線；比較2021—2022年采自不同區(qū)縣103株病菌對(duì)殺菌劑抗藥性差異，監(jiān)測(cè)不同菌株對(duì)藥劑的抗藥性情況，以期明確絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽的抗藥性，為冬蓀綠霉病安全防控和絨毛木霉抗藥性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供理論依據(jù)，為生產(chǎn)實(shí)踐提供一定的理論指導(dǎo)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料供試殺菌劑： 50% 咪鮮胺錳鹽購(gòu)自安道麥輝豐江蘇有限公司。供試菌株：2020—2021年從不同冬蓀生產(chǎn)基地采集發(fā)生綠霉病的子實(shí)體，分離133株絨毛木霉（T.tomentosum），用于病原菌對(duì)咪鮮胺錳鹽敏感基線的建立；2021—2022年繼續(xù)采樣分離獲得103株絨毛木霉菌株用于抗藥性監(jiān)測(cè)，采用濾紙片法保存于貴州省生物研究所植物病理實(shí)驗(yàn)室（表1）。

1.2不同病原對(duì)咪鮮胺錳鹽敏感性測(cè)定參照筆者前期藥劑篩選試驗(yàn)結(jié)果[9]及馬新智等[1]測(cè)定方法，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定病原對(duì)藥劑的敏感性[16]

（1）帶藥培養(yǎng)基平板制備。將 50% 咪鮮胺錳鹽配制成 1000mg/L 母液，用無(wú)菌蒸餾水稀釋母液并與定量的PDA培 養(yǎng)基充分混勻，制成質(zhì)量濃度 1000，100，10，1，0.1，0.01mg/L 的帶藥培養(yǎng)基平板。

（2）殺菌劑抑菌活性測(cè)定[17]。將病原菌接種于PDA培養(yǎng)基平板； 25^°C 暗培養(yǎng) 48h ，用無(wú)菌打孔器在活化的菌落邊緣打取 8mm 的菌餅，菌絲向下接種至帶藥PDA平板中心。每濃度重復(fù)3次，以加入等量無(wú)菌水代替藥劑的平板為對(duì)照。 25^°C 暗培養(yǎng) 48h ，采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，取3個(gè)重復(fù)的平均值，計(jì)算不同濃度藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑菌率。

抑菌率 Σ=Σ [（對(duì)照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/對(duì)照組菌落直徑] ×100%

1.3絨毛木霉菌株抗藥性監(jiān)測(cè)將 2021—2022 年分離獲得的103株病原菌活化，按照敏感性測(cè)定方法，以敏感基線值的濃度為基準(zhǔn)，配制5、10、100倍濃度的帶藥平板，分別接種103株菌，以含等量無(wú)菌水的PDA平板為空白對(duì)照，3個(gè)重復(fù)， 25^°C 暗培養(yǎng) 48h ，十字交叉法測(cè)定菌絲生長(zhǎng)量，參照抗藥性相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[18-19]計(jì)算各菌株的抗性類型和抗藥頻率。

抗性水平劃分標(biāo)準(zhǔn)：所有菌株在對(duì)照組中均正常生長(zhǎng)，① 當(dāng)菌株在3個(gè)濃度的帶藥平板上均不能生長(zhǎng)，該菌株為敏感株（sensitive，簡(jiǎn)寫為S）; ② 在5倍敏感基線值濃度平板可生長(zhǎng)，且在10倍濃度時(shí)不能生長(zhǎng)，該菌為低抗菌株（lowre-sistance，簡(jiǎn)寫為L(zhǎng)）； ③ 在5、10倍濃度平板可以生長(zhǎng)，100倍濃度不能生長(zhǎng)，該菌為中抗菌株（middleresistance，簡(jiǎn)寫為M） ; ④ 在所有濃度都能生長(zhǎng)，該菌為高抗菌株（highresist-ance，簡(jiǎn)寫為H）。

抗性頻率 （抗性菌株數(shù)/供試菌株數(shù)） ×100%

敏感基線建立：根據(jù)供試菌株敏感型病原群體對(duì)殺菌劑敏感性正態(tài)分布原理，計(jì)算病原群體的 EC₅₀ 敏感性頻率分布是否為正態(tài)分布或者連續(xù)單峰曲線，若是，則可將該群體的EC50均值作為病原菌對(duì)該藥劑的敏感基線[0，20] 。

1.4數(shù)據(jù)處理采用SPSS22.0和DPS16.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。根據(jù)SPSS22.0中Duncan氏新復(fù)極差法分析不同地區(qū)菌株EC₅₀ 差異。

2 結(jié)果與分析

2.1絨毛木霉菌株對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感基線根據(jù)各濃度抑菌率測(cè)定結(jié)果，構(gòu)建各菌株對(duì)咪鮮胺錳鹽的毒力回歸方程，計(jì)算出 EC₅₀ 值。結(jié)果顯示，133株絨毛木霉的 EC₅₀ 值為0.0335～7.6941mg/L ，平均值為 3.8572mg/L ，供試菌株對(duì)殺菌劑具有較高的敏感性，試驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)明顯抗藥性群體，但供試菌株 EC₅₀ 最大值是最小值的230倍，跨越幅度較大。經(jīng)檢驗(yàn) EC₅₀ 值分布頻率呈線性單峰曲線，且在DPS軟件的K-S正態(tài)檢驗(yàn) P=0.19gt;0.05 ，說(shuō)明絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性頻率完全符合正態(tài)分布，遵照野生型病原菌對(duì)殺菌劑敏感性呈正態(tài)分布的原理，敏感性研究的133株絨毛木霉的平均值 EC₅₀=3.8572mg/L 可作為冬蓀綠霉病菌絨毛木霉對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感基線（表2）。

2.2不同地區(qū)絨毛木霉菌株對(duì)咪鮮胺錳鹽抗性頻率及分布情況 參照平均 EC₅₀ 值對(duì)后續(xù)分離的病原菌株進(jìn)行抗藥性監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明，當(dāng)擴(kuò)大采樣范圍，不同地區(qū)來(lái)源的絨毛木霉菌株對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性或抗藥性具有一定的差異。各地區(qū)的病原分離物均包含敏感性群體，銅仁市碧江區(qū)、貴陽(yáng)市白云區(qū)、貴陽(yáng)市花溪區(qū)、安順市普定縣的病原分離物均為敏感性菌株，敏感頻率 100% ，抗性頻率為0；畢節(jié)市大方縣、畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)、黔西南州安龍縣、安順市紫云縣病原分離物檢測(cè)出高抗菌株群體，高抗頻率分別為 20.00% 、40.00%.25.00% 和 40.00% ；畢節(jié)市織金縣、畢節(jié)市納雍縣、黔南州平塘縣、銅仁市印江縣的病原分離物檢測(cè)出中抗菌株群體，中抗頻率分別為 18.18%.10.00%.28.57% 和 25.00% ；畢節(jié)市大方縣、畢節(jié)市納雍縣、畢節(jié)市黔西市、六盤水市水城縣、黔西南州安龍縣的病原分離物檢測(cè)出低抗菌株群體，低抗頻率分別為 13.33%.20.00%.22.22%.33.33% 和 50.00% 。對(duì)于供試的103株病原菌，敏感性頻率平均值為 75.31% ，低抗性頻率為 9.92% ，中抗性頻率為 5.84% ，高抗頻率為 8.93% ?？傮w而言，各地區(qū)采集的病原分離物對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性較高，高抗藥性未完全形成，該殺菌劑仍可作為綠霉病防治的有效藥劑之一（表3、圖1）。

注：S代表敏感性菌株，L代表低抗菌株，M表示中抗菌株，H表示高抗菌株。

Note： S= Sensitive， L= Lowresistance， M= Middleresistance， H= Highresistance.

3討論

建立病原菌對(duì)某種殺菌劑的敏感基線和抗藥性評(píng)價(jià)體系，將有助于優(yōu)化殺菌劑防治目標(biāo)病害的施藥策略，以緩解病原菌對(duì)殺菌劑的抗藥性，延長(zhǎng)殺菌劑的使用壽命[21]。咪鮮胺類藥劑已經(jīng)在其他作物上防治真菌病害多年，效果顯著，其作為食用菌產(chǎn)業(yè)合法登記殺菌劑，已在大多食用菌生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用，冬蓀綠霉病是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新病害，關(guān)于該病害的藥劑防治研究甚少，前期病原學(xué)研究初步完成了防治藥劑篩選，咪鮮胺錳鹽抑菌效果較好，田間小試具有一定防效，但該病原菌對(duì)其敏感性和抗性水平尚未明確。該研究測(cè)定了貴州省內(nèi)多個(gè)縣區(qū)主要冬蓀種植基地的冬蓀綠霉病病原菌絨毛木霉（共236株）對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性和抗藥性，并建立了病原對(duì)藥物的敏感基線， EC₅₀=3.8572mg/L 畢節(jié)市大方縣、畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)、黔西南州安龍縣、安順市紫云縣采集的樣品檢測(cè)出高抗菌株群體，在供試菌株中，平均敏感頻率為 75.31% ，平均低抗頻率為 9.92% ，平均中抗頻率為5.84% ，平均高抗頻率為 8.93% ，即各地區(qū)采集的病原分離物對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性較高，未形成高抗藥性突變?nèi)后w，該殺菌劑仍可作為綠霉病防治殺菌劑。

目前，關(guān)于食用菌病害防治研究中，藥劑的敏感基線和病原抗藥性的研究鮮見報(bào)道，該試驗(yàn)結(jié)果優(yōu)越性和可行性暫時(shí)無(wú)法進(jìn)行同類比較評(píng)價(jià)，但在煙草赤星病防治研究中，黑龍江、吉林、云南、山東、貴州等[22-24]省分離的病原菌對(duì)菌核凈或苯醚甲環(huán)唑的敏感性和抗性均進(jìn)行了大量研究，該病原對(duì)苯醚甲環(huán)唑或菌核凈的敏感基線為 1～4mg/L ，部分地區(qū)分離病原發(fā)現(xiàn)抗性群體，抗性瀕率均小于 30% ，該研究與煙草赤星病試驗(yàn)設(shè)計(jì)相似，所得結(jié)果變化規(guī)律基本一致，符合預(yù)期設(shè)想，說(shuō)明該結(jié)果對(duì)咪鮮胺錳鹽防治冬蓀綠霉病的生產(chǎn)實(shí)踐有一定的理論參考價(jià)值。

一直以來(lái)，食用菌產(chǎn)業(yè)不斷助推貴州脫貧攻堅(jiān)和鄉(xiāng)村振興發(fā)展，大面積集中化的種植同類型菌種，導(dǎo)致食用菌病蟲害瀕發(fā)，冬蓀綠霉病也是近年來(lái)危害突出的病害之一，但由于貴州省內(nèi)環(huán)境差異大、氣候多變，導(dǎo)致不同地區(qū)的病原菌存在差異，甚至出現(xiàn)生理小種或變種，相關(guān)的防治手段并不完善、不明確。因此，為了更好、可持續(xù)地防治冬蓀綠霉病，降低病原菌抗藥風(fēng)險(xiǎn)，明確各地區(qū)病原抗藥性差異的形成原因尤為重要。此外，農(nóng)耕和氣候條件、用藥方式、藥物種類及用藥量等均會(huì)導(dǎo)致病原抗藥性的形成或增強(qiáng)。因此，關(guān)于該病害的防治應(yīng)采取綜合防治手段，從抗病育種和農(nóng)業(yè)栽培管理入手，配合交替用藥、混合用藥等方式，注重田間病原抗藥性監(jiān)測(cè)。

4結(jié)論

該研究明確了冬蓀綠霉病病原對(duì)咪鮮胺錳鹽的敏感性，建立敏感基線 EC₅₀=3.8572mg/L 敏感性監(jiān)測(cè)研究顯示，14個(gè)區(qū)縣103株病原分離物平均敏感頻率為 75.31% ，抗性菌株較少，表明該藥劑對(duì)綠霉病仍具有較好的防效。該研究結(jié)果可為冬蓀綠霉病菌防治提供一定的施藥建議和管理要求，延緩抗藥性產(chǎn)生，實(shí)現(xiàn)病害的有效防治。

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