Simultaneous Determination of Eight Non-Steroidal AntiInflammatory Drugs in Food by High Performance Liquid Chromatography

LUO Haiyan， HE Xi^* ，YANG Fang， HAO Rui， YANG Fan， GU Jinhong （Bayinguoleng Mongolian Autonomous Prefecture Institute for Food and Drug Control， Korla 8410oo，China）

Abstract： A high-performance liquid chromatography method was established to determine the content of 8 kinds of non-steroidal anti-inflammatory drugs illegally added to food. 1g of the sample was weighed， 10mL of 1% glacial acetic acid methanol solution was added for ultrasonic extraction， separated by C₁₈ column （250mm× 4.6mm ， 5μm ），and thephosphoric acid aqueous solution with pH=2.5 wasused as mobile phaseAand methanol as mobile phase B for gradient elution，and the detection wavelength was 220nm ，and the external standard method was used for quantitative quantification.The results showed that the 8 NSAIDs had a good linear relationship with their corresponding chromatographic peak areas in the range of 0.5μg?mL^-1 to 20.0μg?mL^-1 ，and the correlation coefcients were all above 0.999.The method has good acuracy and precision，and is suitable forthe detection of non-steroidal anti-inflammatorydrugsinfood.

Keywords： high-performance liquid chromatography; non-steroidal anti-inflammatory drugs; food

非甾體抗炎藥（Non-Steroidal Anti-InflammatoryDrugs，NSAIDs）是一類非類固醇激素類藥物，臨床上被廣泛用于多種免疫功能紊亂炎性疾病及各種疼痛癥狀的緩解，副作用較為明顯，主要會(huì)累及胃腸及皮膚附件系統(tǒng)[1-4]。

目前在我國(guó)，患風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨刺骨痛、骨質(zhì)增生等疼痛性疾病的人群較多。隨著人們健康意識(shí)的提高，為了避免用藥的不良反應(yīng)，更多人群選擇功能食品和保健食品來(lái)緩解癥狀或者達(dá)到治愈目的。但部分不法商家為增強(qiáng)功效、獲取利益，在食品中非法添加化學(xué)藥品，嚴(yán)重危害消費(fèi)者健康。購(gòu)買人群在不知情的情況下長(zhǎng)期服用該類功能食品或者與治療藥物同用，可能會(huì)產(chǎn)生藥物相互作用或作用疊加，大大增加產(chǎn)生毒副作用的風(fēng)險(xiǎn)，影響人體健康，甚至危及生命?！吨腥A人民共和國(guó)食品安全法》規(guī)定，食品中不得添加藥物[5]，一經(jīng)檢出則屬于非法添加。

常用的非法添加NSAIDs的檢測(cè)方法有液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法等，但檢出成分較單一。筆者建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中8種非甾體抗炎藥含量的方法，旨在為食品中非法添加非甾體抗炎藥的篩查和行政監(jiān)管提供技術(shù)支持，同時(shí)為后續(xù)相關(guān)研究提供參考。

1材料與方法

1.1材料、試劑與試劑

市售32批次樣品。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：安基比林（純度為 99.7% ）、對(duì)乙酰氨基酚（純度為 99.9% ）、阿司匹林（純度為99.8% ）、吡羅昔康（純度為 99.5% ）、酮洛芬（純度為 99.9% ）、塞來(lái)昔布（純度為 99.8% ）、雙氯芬酸鈉（純度為 100% ）、布洛芬（純度為 99.9% ），中國(guó)食品藥品檢定研究院。

LC-20AT型液相色譜儀（日本島津）；B5200S-DT超聲儀（上海必能信）XSE205DU型電子天平（梅特勒-托利多）；FE20型酸度計(jì)（梅特勒-托利多）。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)貯備液I（ 1000μg?mL^-1 ）：精密稱取8種對(duì)照品各 10mg ，分別置于 10mL 容量瓶中，用 1% 冰乙酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻， 2～8°C 儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液Ⅱ（ 100μg?mL^-1 ）：精密量取上述對(duì)照品溶液各 2.5mL ，置于 25mL 量瓶中，用1% 冰乙酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻， 2～8°C 儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

混合標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取貯備液 ）0.50、1.00、2.50、 5.00mL 和 10.00mL 分別置于50mL 量瓶中，用 1% 冰乙酸甲醇溶液稀釋至刻度，配制成濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、 10.0μg?mL^-1 和 20.0μg?mL^-1 的混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

1.3 樣品處理

（1）固體樣品的處理。精密稱取 1.0g 樣品于20mL 具塞比色管中，精密加入 1% 冰乙酸甲醇溶液10mL ，渦旋 60s ，超聲處理 5min ，搖勻， 4000rmin^-1 離心 2min ，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)溶液。

（2）液體樣品的處理。精密量取樣品 10mL 置于蒸發(fā)Ⅲ中，水浴加熱蒸干，用 8mL1% 冰乙酸甲醇溶液分3次溶解轉(zhuǎn)移至 10mL 量瓶中，定容至刻度。

搖勻，經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為待測(cè)溶液。

1.4儀器工作條件

島津Inertsil ODS-SP C₁₈ 色譜柱（ 250mm×4.6mm 5μm ）；柱溫： 30^cC ；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器；流速： 1.0mL?min^-1 ；進(jìn)樣量： 10μL 。以 pH=2.5 磷酸水溶液為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，梯度洗脫（表1）；檢測(cè)波長(zhǎng)： 220nm 。

2 結(jié)果與分析

2.1流動(dòng)相選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)[6-9]，分別考察 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇、 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇 + 乙腈（ 1：1 ，體積比）、 pH=3.0 的磷酸水溶液－甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，對(duì)目標(biāo)物質(zhì)分離效果的影響。結(jié)果顯示， 0.12% 的磷酸水溶液-甲醇 + 乙腈（ 1：1 ，體積比）作為流動(dòng)相時(shí)，8種色譜峰均能出峰，但安基比林與對(duì)乙酰氨基酚兩個(gè)色譜峰，雙氯芬酸鈉與布洛芬兩個(gè)色譜峰的分離度達(dá)不到要求（ （?1.5 ）。此外，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 0.12% 的磷酸水溶液的 pH 值約為2.1，而島津InertsilODS-SP色譜柱使用時(shí)的 pH 值在 2.0～7.5 ，為了實(shí)現(xiàn)色譜柱的高效利用，選用 pH=2.5 的磷酸水溶液－甲醇作為流動(dòng)相，其可實(shí)現(xiàn)8種非甾體抗炎藥組分的有效分離。

2.2 色譜柱的選擇

分別考察了島津Inertsil系列的 C₁₈ 、 C₈ 兩種色譜柱，結(jié)果顯示 C₈ 柱的色譜圖中對(duì)乙酰氨基酚、阿司匹林、吡羅昔康、安基比林拖尾，峰形較差，在色譜峰面積積分時(shí)不利于定量分析； C₁₈ 柱分離效果理想、峰形好、靈敏度高，對(duì)應(yīng)的色譜圖見圖1。

2.3 溶劑的選擇

本文考察了甲醇、 50% 甲醇、 80% 甲醇以及 1% 冰乙酸甲醇溶液[10]，發(fā)現(xiàn)阿司匹林對(duì)照品在甲醇、80% 甲醇溶液中會(huì)降解，主要原因是阿司匹林與甲醇發(fā)生水解反應(yīng)生成水楊酸和乙酸；吡羅昔康在50% 甲醇溶液、 80% 甲醇溶液中也會(huì)發(fā)生降解，故選擇 1% 冰乙酸甲醇溶液作為溶劑。

2.4線性關(guān)系、檢出限、定量限考察

按1.2項(xiàng)方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按1.4項(xiàng)條件進(jìn)行色譜分析。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。分別以3倍信噪比和10倍信噪比計(jì)算檢出限和定量限，結(jié)果見表2。8種對(duì)照品在 0.5～20.0μg?mL^-1 線性關(guān)系良好， rgt;0.999 。檢出限在 2.0～5.4mg?kg^-1 ，定量限在 5.3～20.8mg^-kg^-1 。

2.5 加標(biāo)回收率和精密度

選取32批樣品中1批陰性樣品加標(biāo)，制備6份同一質(zhì)量濃度水平的加標(biāo)樣品溶液，測(cè)定后計(jì)算回收率，結(jié)果見表3。8種對(duì)照品平均回收率在95.08%～ 110.25% ，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度。

選取2批陽(yáng)性樣品（1批檢出對(duì)乙酰氨基酚，1批檢出塞來(lái)昔布）分別加入相應(yīng)對(duì)照品，制備成相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線 5.0μgmL^-1 濃度水平的加標(biāo)樣品溶液，平行測(cè)定6次，計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RelativeStandardDeviation，RSD），結(jié)果見表4。對(duì)乙酰氨基酚、塞來(lái)昔布回收率分別為 99.13% 、 108.44% RSD分別為 1.77% 、 1.04% ，表明陽(yáng)性樣品回收率及重復(fù)性良好。

2.6 樣品檢測(cè)

采用本方法進(jìn)行32批食品樣品檢測(cè)，結(jié)果顯示，27批樣品未發(fā)現(xiàn)8種非甾體抗炎藥；5批樣品中分別檢出了對(duì)乙酰氨基酚（ 78.5mg^.kg^-1 ）、塞來(lái)昔布（ 76.2mg^.kg^-1 ）、酮洛芬（ 52.1mg^.kg^-1 ）、安基比林（ 5.7mg^?kg^-1 ），且其中1批次樣品同時(shí)含有安基比林和對(duì)乙酰氨基酚。

3結(jié)論

本文建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中8種非甾體抗炎藥的檢測(cè)方法。方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高、線性好，且樣品制備操作簡(jiǎn)便，滿足食品中非法添加的氨基比林、對(duì)乙酰氨基酚、阿司匹林、吡羅昔康、酮洛芬、塞來(lái)昔布、雙氯芬酸鈉和布洛芬8種非甾體抗炎藥的一次性同時(shí)檢測(cè)。本研究可大大降低檢測(cè)成本，提高檢測(cè)效率。

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