[摘要] 目的 研究外周血circRNA9226與腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺腺癌的診斷價(jià)值。方法 選取2022年12月至2023年1月就診于寧波大學(xué)附屬李惠利醫(yī)院的30例肺腺癌患者為病例組，另選取同期20名健康體檢者為對(duì)照組，比較兩組受試者的circRNA9226、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、糖類抗原199（carbohydrate antigen 199，CA199）、白蛋白（albumin，Alb）的表達(dá)水平。采用受試者操作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）評(píng)估circRNA9226及CEA對(duì)肺腺癌的診斷效能，并分析circRNA9226與其他指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果 病例組患者的外周血circRNA9226表達(dá)量高于對(duì)照組（Plt;0.05）。circRNA9226、CEA診斷肺腺癌的敏感度分別為83.3%、46.7%，特異性分別為90.0%、100.0%，ROC曲線下面積（area under the curve，AUC）分別為0.897、0.776。兩者聯(lián)合檢測(cè)的敏感度為93.3%，準(zhǔn)確度為92.0%，AUC為0.918，其敏感度、準(zhǔn)確度較單項(xiàng)檢測(cè)均有明顯提高。相關(guān)分析結(jié)果顯示，circRNA9226與CEA濃度呈正相關(guān)（r=0.371，Plt;0.05），與Alb濃度呈負(fù)相關(guān)（r=–0.548，Plt;0.05）。結(jié)論 外周血circRNA9226在鑒別診斷肺腺癌具有優(yōu)勢(shì)，與CEA聯(lián)合檢測(cè)可進(jìn)一步提升診斷效能。

[關(guān)鍵詞] 肺腺癌；環(huán)狀RNA9226；癌胚抗原；白蛋白

[中圖分類號(hào)] R734.2" """"[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A """""[DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.17.005

Study of diagnostic value of circRNA9226 combined with tumor markers in lung adenocarcinoma

ZHOU Wei¹， QI Yangcong¹， ZHAO Zhangsheng¹， QIAN Lihui¹， MA Youli¹， MU Yinyu²

1.Department of Blood Transfusion， the Affiliated Lihuili Hospital of Ningbo University， Ningbo 315040， Zhejiang， China; 2.Clinical Laboratory， the Affiliated Lihuili Hospital of Ningbo University， Ningbo 315040， Zhejiang， China

[Abstract] Objective To investigate the value of peripheral blood circRNA9226 combined with tumor markers for the diagnosis of lung adenocarcinoma. Methods A total of 30 patients with lung adenocarcinoma who were admitted to the Affiliated Lihuili Hospital of Ningbo University from December 2022 to January 2023 were selected as case group. Additionally， twenty healthy individuals who underwent physical examinations during the same period were selected as control group. The expression levels of circRNA9226， carcinoembryonic antigen （CEA）， carbohydrate antigen （CA）199 ， and albumin （Alb） were compared between two groups.The diagnostic efficacy of circRNA9226 and CEA for lung adenocarcinoma was evaluated by receiver operating characteristic （ROC） curve， and the correlation between circRNA9226 and other indicators was analyzed. Results The peripheral blood circRNA9226 expression levels in case group was higher than that in control group （Plt;0.05）. The sensitivity of circRNA9226 and CEA for diagnosing lung adenocarcinoma was 83.3% and 46.7%， respectively， with specificity of 90.0% and 100.0%. Area under the curve（AUC） was 0.897 and 0.776， respectively. When both tests were combined， the sensitivity was 93.3%， accuracy was 92.0%， and AUC was 0.918， showing a significant improvement in both sensitivity and accuracy compared to single tests. The correlation analysis results showed that circRNA9226 was positively correlated with CEA concentration （r=0.371， Plt;0.05） and negatively correlated with Alb concentration （r=–0.548， Plt;0.05）. Conclusion Peripheral blood circRNA9226 has advantages in distinguishing lung adenocarcinoma from healthy controls， and combined with CEA can further improve the diagnostic efficacy.

[Key words] Lung adenocarcinoma; Circular RNA9226; Carcinoembryonic antigen; Albumin

非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌病例的絕大多數(shù)，肺腺癌作為其中一種亞型，已成為全球最常見的肺癌病理類型^[1-3]。盡管肺腺癌治療已取得一定進(jìn)展，但治愈率和生存率仍很低^[4]。肺癌的早期篩查對(duì)提高患者整體生存率至關(guān)重要。經(jīng)典血清標(biāo)志物如細(xì)胞角蛋白19片段（cytokeratin 19 fragment 21-1，CYFRA21-1）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）等普遍存在敏感度和特異性不高等問題^[5]。環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）是一種新型的非編碼單鏈RNA分子，通過反向剪接形成共價(jià)閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有序列保守、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，在許多癌癥中被認(rèn)為是關(guān)鍵的調(diào)控RNA^[6]。研究表明circRNA可通過調(diào)控信號(hào)通路促進(jìn)肺腺癌的進(jìn)展，有望成為肺腺癌診斷的重要工具和腫瘤治療的靶標(biāo)^[7-8]。本研究通過比較circRNA9226與常規(guī)腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)差異，評(píng)估其在肺腺癌中的診斷價(jià)值。

1 "對(duì)象與方法

1.1 "研究對(duì)象

選取2022年12月至2023年1月就診于寧波大學(xué)附屬李惠利醫(yī)院的30例肺腺癌患者作為病例組，其中男11例，女19例，Ⅲ期6例，Ⅳ期24例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合肺腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)^[9]；②年齡49～77歲；③腫瘤分期符合肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)^[10]。排除標(biāo)準(zhǔn)：其他部位原發(fā)腫瘤及自身免疫性疾病病史者。另選取同期20名健康體檢者作為對(duì)照組，其中男12例，女8例，年齡29～59歲。本研究經(jīng)寧波大學(xué)附屬李惠利醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：KY2024SL3409-01）。

1.2 "研究方法

所有受試者于入組當(dāng)日抽取靜脈全血5ml，靜置于促凝管中。常溫3500轉(zhuǎn)/min離心10min，分離上層血清檢測(cè)CEA、糖類抗原（carbohydrate antigen，CA）199和白蛋白（albumin，Alb）濃度，所有血液樣本在采集后8h內(nèi)完成檢測(cè)。另抽取靜脈全血2ml于EDTA抗凝管中，充分混勻，使用無酶槍尖將全血轉(zhuǎn)移至無RNA酶的EP管中，按每管400～500μl規(guī)格進(jìn)行分裝，全過程在30min內(nèi)完成，分裝后在液氮下快速冷凍，并長(zhǎng)期保存于–80 ℃超低溫冰箱中，以備后續(xù)RNA提取。腫瘤標(biāo)志物CEA、CA199采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)（美國Beckman公司），CA199的閾值為25.0U/ml，CEA的閾值為5.0μg/L。白蛋白采用溴甲酚綠法檢測(cè)（美國Beckman公司），參考范圍40.0～55.0g/L。

使用RNA提取試劑盒（美國Invitrog公司）提取外周全血中總RNA，超微量核酸蛋白測(cè)定儀（德國Scandrop100公司）檢測(cè)RNA含量和純度。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（艾德萊有限公司）進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用2×SYBR Green預(yù)混液（艾德萊有限公司）和熒光定量PCR儀（美國BIO-RAD公司）進(jìn)行qRT-PCR，檢測(cè)circRNA9226的相對(duì)表達(dá)量。反應(yīng)設(shè)39個(gè)循環(huán)，95℃ 3min，95 ℃ 10s；60℃ 30s；在60℃下采集信號(hào)。為進(jìn)行相對(duì)定量分析，以GAPDH為內(nèi)參基因，設(shè)計(jì)circRNA9226引物：上游引物：5’- ATGGAGGACTAACTTTGATGAAT-3’，下游引物：5’-ACATTGCTTATTTGTGGTATCC-3’。采用2^-△△CT法計(jì)算各樣品circRNA9226的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 "統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（"）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（Q₁，Q₃）]表示，組間比較采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ²檢驗(yàn)。采用受試者操作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC曲線）評(píng)價(jià)診斷價(jià)值。采用Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析相關(guān)性。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 "結(jié)果

2.1 "研究對(duì)象的一般資料比較

兩組研究對(duì)象的年齡比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt;0.05），見表1。病例組患者 circRNA9226、CEA表達(dá)水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。病例組白蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見表2。

2.2 "ROC曲線分析

circRNA9226、CEA單獨(dú)檢測(cè)肺腺癌的敏感度分別為83.3%、46.7%，特異性分別為90.0%、100.0%，曲線下面積（area under the curve，AUC）分別為0.897、0.776。二者聯(lián)合檢測(cè)的敏感度為93.3%，準(zhǔn)確度為92.0%，AUC為0.918，其敏感度、準(zhǔn)確度較單項(xiàng)檢測(cè)均有明顯提高，見表3。

2.3 "相關(guān)性分析

Spearman秩相關(guān)分析結(jié)果顯示，circRNA9226與CEA濃度呈正相關(guān)（r=0.371，P=0.008），與Alb濃度呈負(fù)相關(guān)（r=–0.548，Plt;0.001）。

3 "討論

肺腺癌發(fā)病隱匿，傳統(tǒng)的臨床診斷方法如計(jì)算機(jī)斷層掃描、活檢和支氣管鏡檢查，常因輻射風(fēng)險(xiǎn)和侵入性操作等問題而應(yīng)用受限，因此需開發(fā)更高效的檢測(cè)手段滿足臨床需求。研究表明circRNAs的失調(diào)與肺腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)^[7，11]。近年來，circRNAs作為新型診斷標(biāo)志物的研究取得顯著進(jìn)展，其在多種生物樣本（如外泌體、痰液、組織及血清）中的表達(dá)都被證實(shí)對(duì)肺癌的篩查診斷有重要意義^[12–13]。這得益于采血無創(chuàng)、便捷、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)，外周血檢測(cè)更適合承擔(dān)臨床大規(guī)模初篩的任務(wù)，因而有更加廣闊的適用范圍和應(yīng)用前景。

本研究circRNA9226在肺腺癌患者全血中的表達(dá)高于健康人群，初步提示其作為肺腺癌診斷標(biāo)志物的潛力。研究顯示circRNA在組織和血清中的異常表達(dá)對(duì)肺腺癌的診斷和預(yù)后具有重要參考價(jià)值^[14-15]。本研究中肺腺癌患者的Alb水平低于對(duì)照組，肺癌細(xì)胞增殖競(jìng)爭(zhēng)性消耗大量Alb，因癌癥和化療引起的炎癥、肝腎功能損傷更進(jìn)一步加重Alb的流失。相關(guān)研究表明Alb水平與癌癥風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)^[16]。低Alb水平的肺癌患者預(yù)后往往更差^[17]。目前，盡管傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物（如CYFRA21-1、CEA和鱗狀細(xì)胞癌抗原等）已廣泛應(yīng)用于NSCLC的診斷，但易受其他生理病理因素干擾，仍存在敏感度較低的問題^[18-19]。相比之下，circRNA的診斷優(yōu)勢(shì)更為突出，AUC值通常可達(dá)到0.8以上^{[12， 20]}。本研究中，circRNA9226診斷肺腺癌的AUC值高達(dá)0.897，優(yōu)于CEA；且circRNA9226的敏感度和準(zhǔn)確性均遠(yuǎn)高于CEA，盡管其特異性略低于CEA，但仍展現(xiàn)出優(yōu)異的診斷性能。

由于各種生物標(biāo)志物的敏感度和特異性不同，單一指標(biāo)的診斷能力往往不夠全面，為彌補(bǔ)這種局限性，臨床常采用聯(lián)合診斷的方法提升診斷性能。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示，circRNA9226與CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺腺癌的診斷價(jià)值較單項(xiàng)檢測(cè)有明顯提高，AUC為0.918，敏感度和準(zhǔn)確度分別提升至93.3%和92.0%，診斷價(jià)值與Zhang等^[21]和Zou等^[22]的結(jié)果相近，提示聯(lián)合檢測(cè)可提高肺腺癌的檢出率。此外，相關(guān)性分析顯示circRNA9226相對(duì)表達(dá)量與CEA濃度呈正相關(guān)。作為一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，CEA血清水平的升高是由肺癌細(xì)胞主動(dòng)將其釋放到外周循環(huán)所致^[23]。circRNA9226水平升高也可能通過這一機(jī)制實(shí)現(xiàn)，與Zhang等^[21]的結(jié)論一致。同時(shí)，circRNA9226與Alb濃度存在負(fù)相關(guān)。肺癌患病風(fēng)險(xiǎn)與Alb水平呈負(fù)相關(guān)^[16]。circRNA9226的表達(dá)量也在一定程度上反映肺腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)，提示circRNA9226或可作為肺腺癌診斷和預(yù)后評(píng)估的潛在生物標(biāo)志物。

本研究存在一定的局限性：①納入病例存在數(shù)量和區(qū)域限制，后續(xù)計(jì)劃擴(kuò)大樣本量開展多中心研究；②病例分布以Ⅲ、Ⅳ期居多，后期將納入更多早期病例，并嘗試與肺部良性疾病進(jìn)行比對(duì)區(qū)分；③實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組年齡分布存在差異。綜上，外周血circRNA9226有望成為一種新型的肺腺癌診斷標(biāo)志物，circRNA9226和CEA聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺腺癌診斷可能有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1]"" SIEGEL R， GIAQUINTO A， JEMAL A. Cancer statistics， 2024[J]. Cancer J Clin， 2024， 74（1）： 12–49.

[2]"" 張希， 楊雷， 劉碩， 等. 2022年全球惡性腫瘤統(tǒng)計(jì)報(bào)告解讀[J].中華腫瘤雜志， 2024， 46（7）： 710–721.

[3]"" ZHANG Y， VACCARELLA S， MORGAN E， et al. Global variations in lung cancer incidence by histological subtype in 2020： A population-based study[J]. Lancet Oncol， 2023， 24（11）： 1206–1218.

[4]"" SCHEGOLEVA A， KHOZYAINOVA A， FEDOROV A， et al. Prognosis of different types of non-small cell lung cancer progression： Current state and perspectives[J]. Cell Physiol Biochem， 2021， 55（S2）： 29–48.

[5]"" FAN X， ZHANG Q， QIN S， et al. CircBRIP1： A plasma diagnostic marker for non-small-cell lung cancer[J]. J Cancer Res Clini Oncol， 2024， 150（2）： 83.

[6]"" HUSSEN B， ABDULLAH S， JAAFAR R， et al. Circular RNAs as key regulators in cancer hallmarks： New progress and therapeutic opportunities[J]. Crit Rev Oncol Hematol， 2025， 207： 104612.

[7]"" BABAYEV M， SILVEYRA P. Role of circular RNAs in lung cancer[J]. Fronti Genet， 2024， 15： 1346119.

[8]"" LIU W， NIU J， HUO Y， et al. Role of circular RNAs in cancer therapy resistance[J]. Mol Cancer， 2025， 24（1）： 55.

[9]"" 中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì). 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肺癌臨床診療指南（2024版） [J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志， 2024， 104（34）： 3175–3213.

[10] 王鑫， 支修益. 國際肺癌研究協(xié)會(huì)（IASLC）第八版肺癌TNM分期解讀[J]. 中華胸部外科電子雜志， 2016， 3（2）： 70–76.

[11] SU L， ZHAO J， SU H， et al. CircRNAs in lung adenocarcinoma： Diagnosis and therapy[J]. Curr Gene Ther， 2022， 22（1）： 15–22.

[12] CHEN Z， MA X， CHEN Z， et al. Exosome-transported circ_0061407 and circ_0008103 play a tumour-repressive role and show diagnostic value in non-small-cell lung cancer[J]. J Translati Med， 2024， 22（1）： 427.

[13] BAI C， WANG C， HUA J， et al. Circ_0006949 as a potential non-invasive diagnosis biomarker promotes the proliferation of NSCLC cells via miR-4673/GLUL axis[J]. Biochim Biophys Acta - Mol Basis Dis， 2024， 1870（6）： 167234.

[14] WAN Z， JIA S， LU J， et al. circ-ATAD1 as competing endogenous RNA for miR-191-5p forces non-small cell lung cancer progression[J]. Appl Biochem Biotechnol， 2024， 196（8）： 5099–5113.

[15] CHEN Y， HAN X， HUANG X， et al. Circular RNA‐mediated ceRNA network was identified in human lung adenocarcinoma by high‐throughput sequencing[J]. Thoracic Cancer， 2023， 14（16）： 1430–1439.

[16] TANG Q， LI X， SUN C. Predictive value of serum albumin levels on cancer survival： A prospective cohort study[J]. Front Oncol， 2024， 14： 1323192.

[17] KUANG Z， MIAO J， ZHANG X. Serum albumin and derived neutrophil-to-lymphocyte ratio are potential predictive biomarkers for immune checkpoint inhibitors in small cell lung cancer[J]. Front Immunol， 2024， 15： 1327449.

[18] YANG W， LIU L， LI J， et al. Abnormal expression of miR-668-3p in non-small cell lung cancer patients and its correlation with serum-related tumor markers[J]. J Cardiothorac Surg， 2025， 20（1）： 58.

[19] ZHANG Q， FAN X， ZHANG X， et al. circIARS： A potential plasma biomarker for diagnosing non-small cell lung cancer[J]. Acta Biochim Biophys Sin， 2024， 56（6）： 927–936.

[20] JIANG M， BAI H， FANG S， et al. CircLIFRSA/ miR-1305/PTEN axis attenuates malignant cellular processes in non-small cell lung cancer by regulating AKT phosphorylation[J]. Mol Cancer， 2024， 23（1）： 208.

[21] ZHANG Q， QIN S， PENG C， et al. Circulating circular RNA hsa_circ_0023179 acts as a diagnostic biomarker for non-small-cell lung cancer detection[J]. J Cancer Res Clin Oncol， 2022， 149（7）： 3649–3660.

[22] ZOU G， LU W， DAI X， et al. Diagnostic and prognostic value of serum circERBB2 level in NSCLC and its correlation with clinicopathological features in NSCLC patients[J]. Am J Transl Res， 2023， 15（2）： 1215–1222.

[23] LEI J， WU L， ZHANG N， et al. Carcinoembryonic antigen potentiates non-small cell lung cancer progression via PKA-PGC-1ɑ axis[J]. Mol Biomed， 2024， 5（1）： 19.

（收稿日期：2025–03–07）

（修回日期：2025–05–08）

基金項(xiàng)目：浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目（2023KY246）

通信作者：穆銀玉，電子信箱：muyu606@sina.com