基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（82360132）；甘肅省衛(wèi)生健康行業(yè)科技創(chuàng)新重大項(xiàng)目（GSWSZD2024-11）；甘肅省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（22YF7FA085）；甘肅省聯(lián)合科研基金項(xiàng)目（23JRRA1489，24JRRA911）；甘肅省中醫(yī)藥課題重點(diǎn)項(xiàng)目（GZKZ-2022-7）；甘肅省重點(diǎn)人才項(xiàng)目（甘組通字[2024]4號）

Abstract：Theimmunomodulatory，repair，andregeneration-promotingfunctionsofmesenchmalstemcelsmakethemoneofthe potentialtreatmentmethodsforliverdiseases.Atpresent，viralandnon-viraldeliverymethodshavebeendevelopedtogeneticaly modify mesenchyalstemcels，ndgenemodificationcanpromote thesurvival，oming，andcyokinesecretionofmesenchal stemcell，therebyenhancingtheabilityof mesenchymal stemcellstotreatliverdiseases.Thisarticlemainlysummarizes the researchadvancesingene-modifiedmesenchyalstemcelsinthetreatmentofliverdiseases，nordertoprovidenewinsightsand strategies for theclinical treatment of liver diseases.

Key Words：Mesenchymal Stem Cels;Organisms，Genetically Modified;Liver Disease;Therapeutics

Researchfunding：National NaturalScienceFoundationofChina（8236ol32）；MajorProjectofScienceandTechnologIovation in Health Sectorof Gansu Province（GSWSZD2024-11）；KeyRamp;DProgram ofGansu Province（22YF7FA085））;Joint Research FundProjectof GansuProvince（23JRRA1489，24JRRA911）；KeyProjectof Traditional Chinese Medicine in GansuProvince （GZKZ-2022-7）; Gansu Provincial Key Talent Project （Gan Group No.[2024]4）

肝損傷是由肝炎病毒、藥物或毒物等引發(fā)的肝臟病理改變，其病程進(jìn)展可導(dǎo)致肝硬化、肝衰竭及肝細(xì)胞癌（HCC）等終末期肝病。研究顯示，肝臟疾病每年導(dǎo)致約

200萬人死亡，占全球總死亡人數(shù)的 4%^[1] 。肝硬化患者的預(yù)后與并發(fā)癥密切相關(guān)，當(dāng)合并腹水、食管胃底靜脈曲張破裂出血、肝性腦病、腎功能不全或繼發(fā)感染時(shí)，特別是出現(xiàn)慢加急性肝衰竭時(shí)，患者病死率將增加5＼～10倍[1]。盡管肝移植為肝硬化并發(fā)癥和HCC患者提供了挽救生命的療法，但也面臨肝臟供體分配政策、等待名單上的優(yōu)先次序和終末期肝病模型評分缺陷等多種挑戰(zhàn)[2]。近年來，基于肝臟自然再生能力的組織工程技術(shù)，使肝臟疾病的治療出現(xiàn)了新的選擇。間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells，MSC）具有歸巢、促進(jìn)組織再生、細(xì)胞外基質(zhì)重塑、旁分泌等特性，在肝臟疾病中具有治療潛力[]。為提高M(jìn)SC的植入效率與治療效果，研究者采取低氧環(huán)境誘導(dǎo)、藥物干預(yù)及基因修飾等手段改善MSC的生存率與定向遷移能力[4]，本文主要討論基因修飾MSC的策略及治療肝臟疾病的潛力。

1常見的基因編輯方法

基因組編輯技術(shù)是利用序列特異性DNA結(jié)合模塊在活細(xì)胞的基因組中引入基因座特異性DNA插入、缺失或改變。從巨核酸酶、鋅指核酸酶和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)核酸酶開始，基因組編輯工具已經(jīng)發(fā)展成為基因工程的重要工具之一[5]。2012年成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列及其關(guān)聯(lián)核酸酶9（clusteredregularly interspacedshort palindromic repeats- associated protein 9，CRISPR-Cas9）基因編輯系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步擴(kuò)展了基因組編輯的可能性[6]。目前，基因編輯療法在腫瘤學(xué)、遺傳病和感染性疾病領(lǐng)域中的應(yīng)用正在快速開發(fā)[7]，研究人員正在探索其在乙型肝炎、丙型肝炎的臨床前模型中的試驗(yàn)療法。CRISPR-Cas系統(tǒng)在肝病領(lǐng)域已被應(yīng)用于遺傳性肝病、肝炎和肝癌的疾病模型中，通過基因篩選、基因的插入和敲除確定對肝臟病理至關(guān)重要的基因，從而改變肝病相關(guān)基因的功能[8]。治療性基因編輯包括體內(nèi)基因編輯和離體基因編輯。體內(nèi)基因編輯，即細(xì)胞直接在體內(nèi)進(jìn)行編輯。治療性體內(nèi)基因編輯的遞送技術(shù)包括病毒載體、脂質(zhì)納米顆粒和病毒樣顆粒，已在多項(xiàng)臨床試驗(yàn)中進(jìn)行了評估。目前，CRISPR-Cas9體內(nèi)基因編輯在視網(wǎng)膜變性和遺傳性血管水腫的臨床實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)取得關(guān)鍵進(jìn)展[9-10]，但安全有效的遞送基因組編輯成分的方法仍然是體內(nèi)基因組編輯療法的一個關(guān)鍵挑戰(zhàn)。離體基因編輯，即將細(xì)胞從體內(nèi)取出，在體外進(jìn)行基因編輯后引入患者體內(nèi)。依賴于病毒載體作為便攜式“特洛伊木馬\"的開發(fā)，造血干細(xì)胞基因療法的臨床試驗(yàn)日益增長[1]。截至2023年第一季度末，全球有100多種不同的基因、細(xì)胞和RNA療法獲得批準(zhǔn)，還有3700多種處于臨床和臨床前開發(fā)階段，其中有11項(xiàng)涉及基因修飾，包括基因修飾的造血干細(xì)胞與嵌合抗原受體T細(xì)胞[12]但尚無基因修飾MSC療法獲得批準(zhǔn)。其原因在于：首先，MSC的來源如胎兒組織的獲取仍然具有倫理爭議，每個捐贈胎兒可分離的干細(xì)胞數(shù)量有限，體外培養(yǎng)過程中“干細(xì)胞”喪失的問題是開發(fā)基于該來源療法的主要挑戰(zhàn)[13]。其次，盡管基因治療和基因編輯技術(shù)創(chuàng)建的干細(xì)胞及其衍生物，與天然干細(xì)胞衍生物相比，其功能、特異性和反應(yīng)性均得到改善，但在臨床應(yīng)用層面，患者需具備辨識經(jīng)權(quán)威機(jī)構(gòu)認(rèn)證的正規(guī)干細(xì)胞治療中心的能力?；隗w外擴(kuò)增細(xì)胞的療法需要大量的證據(jù)來證明其安全性，例如干細(xì)胞的免疫抑制和血管生成特性可能在某些情況下促進(jìn)腫瘤生長[14]。

2提高M(jìn)SC治療潛力的基因修飾策略

2.1病毒轉(zhuǎn)染使用病毒載體的基因修飾是利用病毒轉(zhuǎn)染MSC并將病毒基因插入宿主基因組的天然能力，包括與病毒基因組連接或替換病毒基因的目標(biāo)基因[15]病毒載體包括慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒。用于臨床應(yīng)用的大多數(shù)載體基于腺病毒，其次是逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒。病毒載體因高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和穩(wěn)定的基因表達(dá)被普遍使用。

2.2非病毒轉(zhuǎn)染非病毒轉(zhuǎn)染包括物理和化學(xué)轉(zhuǎn)染法[16]。常用的化學(xué)轉(zhuǎn)染法包括脂質(zhì)體、聚合物、細(xì)胞滲透肽和無機(jī)納米顆粒，用于MSC轉(zhuǎn)染的常見有機(jī)材料是脂質(zhì)、聚合物、多糖和肽，二氧化硅和氧化鐵主要用于無機(jī)材料。常用的物理轉(zhuǎn)染法包括電穿孔、核轉(zhuǎn)染和微穿孔，轉(zhuǎn)染效率分別約 40% ） 50% 和 80%^[17] ，其中，微穿孔的轉(zhuǎn)染效率最高，但該方法仍需要擴(kuò)大臨床適用性。

3基因修飾增加MSC在肝臟疾病治療中的優(yōu)勢

3.1基因修飾提高M(jìn)SC的遷移與歸巢MSC的活力和遷移能力對肝病療效起著至關(guān)重要的作用。促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）作為一種糖蛋白激素，具有保護(hù)神經(jīng)、抗炎、抗氧化和抗細(xì)胞凋亡等多重功能[18]。使用過表達(dá)EPO的骨髓MSC治療肝纖維化小鼠模型，結(jié)果表明EPO過表達(dá)促進(jìn)骨髓MSC的細(xì)胞活力和遷移，減輕肝纖維化[19]。成纖維細(xì)胞生長因子21（fibroblast growthfactors21，F(xiàn)GF21）是一種內(nèi)分泌應(yīng)激反應(yīng)激素，可以調(diào)節(jié)能量平衡、葡萄糖和脂質(zhì)代謝[20]。持續(xù)過表達(dá)FGF21的工程化MSC，增強(qiáng)其向受損部位的歸巢，并且減少M(fèi)SC凋亡，在治療小鼠酒精性肝病方面表現(xiàn)出較好的效果[21]。因此，基因修飾的MSC不僅能夠維持高且穩(wěn)定的基因表達(dá)水平，還能促進(jìn)其向損傷部位的有效遷移，從而提升MSC治療肝病的潛能。

3.2基因修飾促進(jìn)MSC分泌細(xì)胞因子，提高M(jìn)SC免疫調(diào)節(jié)能力研究表明培養(yǎng)高密度人脂肪MSC會誘導(dǎo)干擾素β（interferon- β ，IFN-β）分泌[22]，IFN- β 可通過MSC中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)器和轉(zhuǎn)錄激活劑1途徑誘導(dǎo)小鼠肝細(xì)胞生長因子的表達(dá)[23]。將攜帶人IFN- β 基因的非病毒載體導(dǎo)入脂肪MSC后發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)IFN- β.{β} 的MSC通過促進(jìn)肝細(xì)胞生長因子的分泌，減輕小鼠的腸道組織炎癥和腸道滲漏[24]，并在酒精性肝病小鼠模型中展現(xiàn)良好的治療效果。自身免疫性肝病是一種由T細(xì)胞介導(dǎo)的疾病，其中CD4⁺ 和 CD8⁺T 細(xì)胞是肝臟中浸潤的主要類型。 CD4⁺ T細(xì)胞表達(dá)獨(dú)特的抑制性受體CD32b，該受體是免疫抑制因子可溶性纖維蛋白原樣蛋白2（solublefibronectin-likeprotein 2，sFg|2 的唯一受體， sFgl2 是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分泌的關(guān)鍵免疫抑制因子及效應(yīng)分子[25]。將 sFgl2 修飾的MSC與自身免疫性肝病小鼠 CD4⁺T 細(xì)胞共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，sFgl2修飾的MSC可通過增強(qiáng)Src同源2結(jié)構(gòu)域的蛋白酪氨酸磷酸酶（Src homology 2 domain-containing protein tyrosinephosphatase2，SHP2）和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子2/3（cellularsignaltransductionmolecules2/3，Smad2/3）的磷酸化，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化，抑制輔助性T細(xì)胞的分化，具有顯著的免疫調(diào)節(jié)作用[26]

4基因修飾MSC在肝臟疾病中的應(yīng)用

4.1基因修飾MSC在肝纖維化、肝硬化中的應(yīng)用肝硬化是由于損傷后新生的細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積所致，其中涉及肝星狀細(xì)胞（HSC）的活化，活化后的HSC引發(fā)絲裂原介導(dǎo)的增殖，結(jié)締組織生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor β1，TGF- _?β1 ）驅(qū)動的纖維化增加，炎癥和免疫調(diào)節(jié)放大，以及細(xì)胞外基質(zhì)降解下降[27]。細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1（extracellularmatrixprotein1，ECM1）是一種分泌性糖蛋白，參與胚胎軟骨形成、皮膚分化、血管生成和細(xì)胞增殖，肝纖維化時(shí)ECM1減少，補(bǔ)充外源性ECM1可以通過阻斷HSC活化，逆轉(zhuǎn)肝纖維化[28]。將ECM1過表達(dá)的毛囊來源的MSC移植人肝硬化小鼠體內(nèi)，其通過TGF-β/Smad途徑抑制HSC活化，顯著改善肝硬化小鼠的肝功能和肝臟病理損傷[29]。過表達(dá)Smad7可抑制HSC的膠原蛋白表達(dá)和細(xì)胞增殖[30]，使用慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)Smad7基因產(chǎn)生過表達(dá)的MSC治療肝硬化大鼠，結(jié)果顯示過表達(dá)Smad7的MSC通過抑制TGF-β1/Smad信號通路減輕肝硬化[31]。再生肝磷酸酶-1（phosphatase ofregeneratingliver-1，PRL-1）具有促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲的能力，被確定為肝再生的早期基因[32-33]，肝硬化大鼠模型移植過表達(dá)PRL-1的胎盤來源的MSC后，治療組肝臟線粒體特異性標(biāo)志物蛋白表達(dá)水平增加，線粒體DNA（mtDNA）拷貝數(shù)和三磷酸腺苷（ATP）產(chǎn)量增加，基因修飾的MSC通過調(diào)節(jié)肝臟中的線粒體代謝，促進(jìn)肝硬化大鼠肝功能的恢復(fù)[34]。

4.2基因修飾MSC在肝衰竭中的應(yīng)用血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelial growthfactor，VEGF）可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分化、增殖、遷移和浸潤，維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能[35]。VEGF165是其主要亞型，具有很強(qiáng)的促血管生成功能。使用臍帶MSC作為VEGF165基因的基因傳遞載體，治療大鼠急性肝衰竭（acuteliverfailure，ALF）模型，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)VEGF165增強(qiáng)臍帶MSC的多能性，促進(jìn)臍帶MSC在ALF大鼠肝組織中的歸巢和定植，并改善肝損傷，促進(jìn)肝再生[36]。 Xu 等[37]評估ALF患者和ALF小鼠肝臟中趨化因子的表達(dá)譜發(fā)現(xiàn)，受損肝臟中CC趨化因子受體2（CC chemokine receptor 2，CCR2）表達(dá)高度上調(diào)，使用過表達(dá)CCR2的MSC治療ALF小鼠模型后發(fā)現(xiàn)，MSC的療效顯著增強(qiáng)，具體表現(xiàn)為ALF小鼠存活率顯著提高、肝損傷癥狀減輕（包括減少炎癥浸潤和肝細(xì)胞凋亡）以及肝再生能力提升。肝細(xì)胞核因子 4α （hepatocyte nuclear factor-4 alpha， HNF4α ）是核激素受體家族的重要轉(zhuǎn)錄因子，對于維持正常的肝臟結(jié)構(gòu)至關(guān)重要。過表達(dá) HNF4α 的人臍帶MSC可促進(jìn)替代型活化巨噬細(xì)胞極化并減輕MSC的旁分泌因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，從而抑制ALF肝臟炎癥和損傷[38]。因此，外源性基因修飾通過促進(jìn)MSC的歸巢等特性，在治療ALF小鼠模型中展現(xiàn)出有效的治療潛力，然而基因修飾的MSC與肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞之間的串?dāng)_及潛在的分子機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。

4.3基因修飾MSC在肝癌中的應(yīng)用HCC是一種常見的肝臟惡性腫瘤，具有高度血管化特征[39]，據(jù)估計(jì)，2020年全球有905700人被診斷為肝癌，830200人死于肝癌，其中中國的肝癌病例占全球的 45.3% ，肝癌死亡人數(shù)占全球 47.1%^[40] 。研究表明，VEGF在HCC中過度表達(dá)，并且與腫瘤血管生成密切相關(guān)[4I]。可溶性fms樣酪氨酸激酶-1（soluble fms-like tyrosine kinase-1，sFlt-1）可通過與游離的VEGF結(jié)合或與血管內(nèi)皮生長因子受體-2形成無活性的異源二聚體來抑制血管生成[42]。將慢病毒轉(zhuǎn)染sFlt-1的MSC植入HCC小鼠模型體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，MSC可有效分泌sFlt-1，抑制體外血管形成，從而抑制腫瘤生長并延長小鼠生存期[43]。 Wu 等[44研究發(fā)現(xiàn)，過表達(dá) HNF4α 的MSC通過下調(diào) Wnt/β -catenin信號通路，減少HCC細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移，從而抑制HCC進(jìn)展。表明基因修飾賦予MSC抗腫瘤特性，使MSC成為基因治療的理想遞送載體。4.4miRNA修飾的MSC在肝臟疾病中的應(yīng)用miRNA是小型非編碼RNA，可調(diào)節(jié)大多數(shù)細(xì)胞類型中的信使RNA表達(dá)和翻譯效率。miRNA通過與特定的mRNA靶點(diǎn)結(jié)合，促進(jìn)其降解和/或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)，miRNA表達(dá)的改變與肝臟代謝失調(diào)、肝損傷、肝纖維化和腫瘤發(fā)展相關(guān)[45]。慢性肝損傷通過激活HSC使其分泌細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，產(chǎn)生纖維瘢痕，導(dǎo)致肝臟炎癥和纖維化[46]。HSC分泌的賴氨酰氧化酶樣蛋白2在肝纖維化中上調(diào)，通過共價(jià)交聯(lián)穩(wěn)定膠原蛋白和彈性蛋白使纖維化瘢痕不可逆，從而增加ECM剛度，促進(jìn)中央纖維化效應(yīng)細(xì)胞、造血干細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞的激活，是治療肝纖維化的重要靶點(diǎn)[47]。MSC來源的細(xì)胞外囊泡（smallextracellularvesicle，sEV）作為miRNA遞送載體在多種疾病的治療中取得了重大進(jìn)展。使用miR-4465修飾的MSC-sEV可將miR-4465傳遞到HSC中，通過下調(diào)賴氨酰氧化酶樣蛋白2表達(dá)，減少HSC中的膠原沉積，緩解肝纖維化[48]。

研究發(fā)現(xiàn)，高爾基體膜蛋白1（Golgimembraneprotein1，GOLM1）可以顯著促進(jìn)HCC的發(fā)展和擴(kuò)散[49]，miRNA-559、miRNA-141-3p和miRNA-27b3p是已知的控制GOLM1表達(dá)的miRNA[50]。在肝臟生理學(xué)方面， miR-27a 家族與GOLM1相互作用將肝祖細(xì)胞維持在未分化狀態(tài)[51]Bongolo等[52]發(fā)現(xiàn)來自 miR-27a-3p 轉(zhuǎn)染的MSC的外泌體（mesenchymal stemcells-exosomes，MSC-exo）在體外和體內(nèi)均可阻止HCC細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移; miR-27a-3p 通過靶向結(jié)合并下調(diào)癌基因GOLM1發(fā)揮抗HCC作用。因此， miR-27a-3p 是通過GOLM1發(fā)揮作用的潛在HCC治療靶點(diǎn)。此外，miRNA通過調(diào)控細(xì)胞通路中的關(guān)鍵基因，對HCC的進(jìn)展和多藥耐藥性產(chǎn)生至關(guān)重要的影響[53]。miR-199a-3p是正常肝臟中第三高表達(dá)的miRNA，其下調(diào)與不良預(yù)后相關(guān)[54]，通過慢病毒感染和嘌呤霉素篩選構(gòu)建 miR-199a 修飾的脂肪來源MSC治療原位HCC小鼠模型，結(jié)果顯示，exo能夠有效介導(dǎo) miR-199a 向HCC細(xì)胞的遞送。此外，脂肪MSC-exo-199a可分布到腫瘤組織中，通過靶向哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target ofrapamycin，mTOR），抑制mTOR通路，提高HCC 細(xì)胞對阿霉素的敏感性[55]。因此，有效的載體介導(dǎo)的miRNA遞送，可能成為改善HCC化療的新策略（圖1，表1）。

5總結(jié)

基因修飾技術(shù)可以提高M(jìn)SC治療肝病的效果，然而基因修飾MSC臨床轉(zhuǎn)化還需進(jìn)一步風(fēng)險(xiǎn)評估。首先，轉(zhuǎn)染方法可能會導(dǎo)致細(xì)胞應(yīng)激，并可能對細(xì)胞代謝和活力產(chǎn)生影響。病毒轉(zhuǎn)染因轉(zhuǎn)染效率高而常用于基因治療的臨床試驗(yàn)，但商業(yè)規(guī)模的病毒載體相對昂貴且耗時(shí)，并仍然存在觸發(fā)免疫原性反應(yīng)或誘變的風(fēng)險(xiǎn)，需要在臨床使用中長期監(jiān)測。使用非病毒方法可以避免這些問題，但其轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞特異性往往不足。此外，基因工程的MSC還需證明轉(zhuǎn)基因的過度表達(dá)不會導(dǎo)致不必要的副作用。因此，基因修飾MSC治療肝臟疾病還需進(jìn)一步研究準(zhǔn)確性、安全性，以提高治療策略的可靠性。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻(xiàn)聲明：趙婷婷負(fù)責(zé)查閱文獻(xiàn)，撰寫文章；周丹、高曉琴、岳偉、王汝琴負(fù)責(zé)審校；李俊峰、張立婷負(fù)責(zé)指導(dǎo)立題，文章修改。

參考文獻(xiàn)：

[1]DEVARBHAVI H，ASRANI SK，ARABJP，etal.Global burdenof liver disease：2023update[J].JHepatol，2023，79（2）：516-537.DOl：10. 1016/j.jhep.2023.03.017.

[2]TERRAULTNA，F(xiàn)RANCOZC，BERENGUERM，etal.Liver transplantation2O23：Status report，currentand future challenges[J].ClinGastroenterol Hepatol，2023，21（8）：2150-2166.DOl：10.1016/j.cgh.2023. 04.005.

[3]YADAVP，SINGH SK，RAJPUTS，etal.Therapeutic potential of stemcells in regeneration of liver in chronic liver diseases：Current perspectivesand future challenges[J].Pharmacol Ther，2024，253： 108563.DOl：10.1016/j.pharmthera.2023.108563. [4]SANIF，SANIM，MOAYEDFARDZ，etal.Potentialadvantagesof geneticallymodifiedmesenchymal stemcells inthe treatmentofacute andchronic liverdiseases[J].Stem Cell ResTher，2023，14（1）：138. DOI：10.1186/s13287-023-03364-x. [5]TAHA EA，LEEJ，HOTTA A.Delivery of CRISPR-Cas tools for in vivo genome editing therapy：Trendsand challenges[J].J Control Release，2022，342：345-361.DOl：10.1016/j.jc0nrel.2022.01.013. [6]JINEK M， CHYLINSKI K，F(xiàn)ONFARAI，etal.A programmable dualRNA-guided DNAendonuclease inadaptivebacterial immunity[J]. Science，2012，337（6096）：816-821.DOl：10.1126/science.1225829. [7]CUSHMAN-VOKOUNA，SCHMIDTRJ，HIEMENZMC，etal.A primer on gene editing[J].Arch Pathol Lab Med，2023.DOl：10.5858/arpa. 2022-0410-CP.[Epub ahead of print] [8] ADLAT S， VAZQUEZ SALGADO AM，LEE M， et al. Emerging and potential use of CRiSPR in human liver disease[J].Hepatology，2023 DOI：10.1097/HEP.0000000000000578.[Online ahead of print] [9]LONGHURSTHJ，LINDSAYK，PETERSENRS，etal.CRISPR-Cas9 in vivo gene editing of KLKB1 for hereditaryangioedema[J].N Engl JMed，2024，390（5）：432-441.DOI：10.1056/NEJMoa2309149.

[10]PIERCEEA，ALEMANTS，JAYASUNDERAKT，etal.Geneeditingfor CEP29O-associatedretinal degeneration[J].NEnglJMed，2024， 390（21）：1972-1984.DOI：10.1056/NEJMoa2309915.

[11]FERRARI S，VALERI E，CONTI A，et al： Genetic engineering meets hematopoieticstemcell biologyfor next-generation gene therapy [J].CellStem Cell，2023，30（5）：549-570.DOl： 10.1016/j.stem.2023. 04.014.

[12]CHANCELLOR D，BARRETT D，NGUYEN-JATKOEL， et al.The state ofcell and gene therapy in 2023[J].Mol Ther，2023，31（12）：3376- 3388.DOl：10.1016/j.ymthe.2023.11.001.

[13]ISHll T，ETOK.Fetal stem cell transplantation：Past，present，and future[J].WorldJStem Cells，2014，6（4）：404-420.DOl：10.4252/wjsc. v6.i4.404.

[14]KLOPP AH， GUPTA A， SPAETH E，et al. Concise review： Dissecting adiscrepancyin the literature：Domesenchymal stem cells support orsuppresstumor growth？[J].Stem Cells，2011，29（1）：11-19.DOI：

10.1002/stem.559

[15]KIMBREL EA，LANZA R. Next-generation stem cells：Ushering in a new era of cell-based therapies[J].Nat Rev Drug Discov，2020，19 （7）： 463-479.DOl： 10.1038/s41573-020-0064-x.

[16]HAMANN A，PANNIER AK. Innovative nonviral gene delivery strategies for engineering human mesenchymal stem cell phenotypes toward clinical applications[J].Curr Opin Biotechnol，2022，78：102819. DOI：10.1016/j.copbio.2022.102819.

[17]MENG X， ZHENG MJ，YU M，et al.Transplantation of CRISPRa systemengineered IL10-overexpressingbonemarrow-derivedmesenchymal stem cells for the treatment of myocardial infarctionin diabeticmice[J].J Biol Eng，2019，13：49.DOl：10.1186/s13036-019- 0163-6.

[18]LIJ，TAOT，XUJ，etal. HIF-1α attenuates neuronal apoptosis byupregulating EPO expression following cerebral ischemia-reperfusion injury inarat MCAO model[J].IntJMol Med，2020，45（4）：1027- 1036.DOl：10.3892/ijmm.2020.4480.

[19]WANG XY，WANG HZ， LU JH，et al. Erythropoietin-modified mesenchymal stem cels enhance anti-fibrosis efficacy in mouse liver fibrosis model[J].Tissue Eng Regen Med，2020，17（5）：683-693.DOI： 10.1007/s13770-020-00276-2.

[20]SHAHROR RA，LINARES GR，WANG Y，et al. Transplantation of mesenchymal stem cellsoverexpressing fibroblast growth factor 21 facilitatescognitiverecoveryandenhancesneurogenesisinamouse model of traumatic brain injury[J].JNeurotrauma，2020，37（1）：14- 26. DOl： 10.1089/neu.2019.6422.

[21]HUAl Q，ZHU C，ZHANG X， et al.Mesenchymal stem/stromal cells armoredby FGF21 ameliorate alcohol-induced liver injury through modulating polarization of macrophages[J].Hepatol Commun，2024， 8（4）：e0410.DOI： 10.1097/HC9.0000000000000410.

[22]BYUN CS，HWANG S，WOO SH，et al. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells suppress growth of Huh7 hepatocellular carcinoma cells via interferon （IFN）-β-mediated JAK/STAT1 pathway in vitro[J].Int J Med Sci，2020，17（5）： 609-619.DOl： 10.7150/ijms. 41354.

[23]VIGO T，LA ROCCA C，F(xiàn)AICCHIA D，et al. IFNβ enhances mesenchymal stromal （Stem）cells immunomodulatory function through STAT1-3 activation and mTOR-associated promotion of glucose metabolism[J].Cell Death Dis，2019，10（2）： 85.DOl：10.1038/s41419- 019-1336-4.

[24]HWANG S，EOM YW，KANG SH，et al.IFN- β overexpressing adipose-derived mesenchymal stem cells mitigate alcohol-induced liverdamage and gut permeability[J].IntJMol Sci，2024，25（15）： 8509.DOl： 10.3390/ijms25158509.

[25]MORRIS AB，F(xiàn)ARLEY CR，PINELLI DF，et al. Signaling through the inhibitory Fc receptor FcγRlIB induces CD8⁺ T cell apoptosis to limit T cell immunity[J]. Immunity，2020，52（1）：136-150.e6. DOl：10.1016/ j.immuni.2019.12.006.

[26]JI WB，WANG WW，LI PY，et al.sFgl2 gene-modified MSCs regulate thedifferentiation of CD4⁺ T cells in the treatment of autoimmune hepatitis[J].Stem Cell ResTher，2023，14（1）：316.DOl：10.1186/ s13287-023-03550-x.

[27]PUCHE JE， SAIMAN Y，F(xiàn)RIEDMAN SL. Hepatic stellate cells and liver fibrosis[J].Compr Physiol，2013，3（4）：1473-1492.DOl：10.1002/ cphy.c120035.

[28]FAN WG，LIU TH，CHEN W，etal.ECM1 prevents activation of transforming growth factor β，hepatic stellate cells，and fibrogenesis in mice[J].Gastroenterology，2019，157（5）：1352-1367.e13.DOl： 10. 1053/jgastro.2019.07.036.

[29]LIU Q，LV CQ，HUANG QQ，et al.ECM1 modified HF-MSCs targeting HSC attenuate liver cirrhosis by inhibiting the TGF-β/Smad signaling pathway[J].Cel Death Discov，2022，8（1）： 51.DOl： 10.1038/ s41420-022-00846-4.

[30] DOOLEY S， HAMZAVI J，BREITKOPFK，et al. Smad7 prevents actienterology，2003，125（1）：178-191. DOl：10.1016/s0016-5085（03） 00666-8.

[31]SU DN，WU SP，XU SZ.Mesenchymal stem cell-based Smad7 gene therapy forexperimental livercirrhosis[J].Stem Cell ResTher，2020， 11（1）：395. DOl： 10.1186/s13287-020-01911-4.

[32]RIOS P，LI X，KOHN M.Molecular mechanisms of the PRL phosphatases[J]. FEBS J，2013，280（2）：505-524.DOI： 10.1111/j.1742-4658. 2012.08565.x.

[33]BAI YP，LUO Y，LIU SJ， et al.PRL-1 protein promotes ERK1/2 and RhoAprotein activation through anon-canonical interactionwith the Src homology 3 domain of p115 Rho GTPase-activating protein[J]. J Biol Chem，2011，286（49）：42316-42324.DOl：10.1074/jbc.M111. 286302.

[34]KIM JY，CHOI JH，JUN JH，et al. Enhanced PRL-1 expression in placenta-derived mesenchymal stemcellsaccelerates hepatic functionviamitochondrial dynamicsinacirhoticratmodel[J].Stem Cell Res Ther，2020，11（1）：512.DOl：10.1186/s13287-020-02029-3.

[35] ZAGOURA D， TROHATOU O， MAKRIDAKIS M， et al. Functional secretomeanalysisrevealsAnnexin-A1asimportantparacrinefactor derived from fetal mesenchymal stem cels in hepatic regeneration [J].EBioMedicine，2019，45：542-552. DOl： 10.1016/j.ebiom.2019.07. 009.

[36］ CHEN HO，TANG SG，LIAO JM， et al. VEGF₁₆₅ gene-modified human umbilical cord blood mesenchymal stem cells protect against acute liver failure in rats[J]. J Gene Med，2021，23（10）： e3369. DOl： 10.1002/jgm.3369.

[37]XU RX，NI BB，WANG L，et al. CCR2-overexpressing mesenchymal stemcells targetingdamaged liverenhance recovery of acute liverfailure[J]. Stem Cell Res Ther，2022，13（1）：55.DOl：10.1186/s13287- 022-02729-y.

[38]KONG DF，XU HM，CHEN M，et al. Co-encapsulation of HNF4α overexpressing UMSCsand human primary hepatocytes ameliorates mouseacute liver failure[J].StemCellRes Ther，2020，11（1）：449. DOI：10.1186/s13287-020-01962-7.

[39]FERNANDEZM，SEMELA D，BRUIX J，etal.Angiogenesis in liver disease[J].JHepatol，2009，50（3）：604-620.DOl： 10.1016/jhep. 2008.12.011.

[40]RUMGAY H， ARNOLD M， FERLAY J，et al. Global burden of primary livercancer in2020 and predictions to 2040[J].J Hepatol，2022，77 （6）：1598-1606.DOl： 10.1016/j.jhep.2022.08.021.

[41]YAMAGUCHI R，YANO H， IEMURA A，et al. Expression of vascular endothelial growth factorin human hepatocellular carcinoma[J]. Hepatology，1998，28（1）： 68-77. DOl： 10.1002/hep.510280111.

[42]KRISHNAN B，TORTI FM，GALLAGHER PE，et al. Angiotensin-（1-7） reduces proliferation and angiogenesis of human prostate cancer xenografts with a decrease in angiogenic factors and an increase in sFIt-1[J].Prostate，2013，73（1）： 60-70.DOl：10.1002/pros.22540.

[43]LIGL，MIAO F，ZHU JH，et al.Anti-angiogenesis gene therapy for hepatocellularcarcinoma viasystemic injectionof mesenchymal stem cells engineered to secrete soluble Flt-1[J].Mol Med Rep，2017，16 （5）：5799-5806.DOl： 10.3892/mmr.2017.7310.

[44]WU N，ZHANG YL，WANG HT， et al. Overexpression of hepatocyte nuclear factor 4α in human mesenchymal stem cells suppresses hepatocellular carcinoma developmentthrough Wnt/β-catenin signaling pathway downregulation[J].Cancer Biol Ther，2016，17（5）：558- 565. DOl： 10.1080/15384047.2016.1177675.

[45]WANGXL，HEY，MACKOWIAKB，etal.microRNAsas regulators， biomarkers and therapeutic targets in liver diseases[J]. Gut， 2021， 70（4）： 784-795. DOl： 10.1136/gutjnl-2020-322526.

[46]KISSELEVA T， BRENNER D.Molecular and cellular mechanisms of liver fibrosis and its regression[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol， 2021，18（3）：151-166.DOl：10.1038/s41575-020-00372-7.

[47] CHEN W， YANG AT，JIA JD，et al. Lysyl oxidase（LOX） family members：Rationaleandtheirpotentialastherapeutictargetsforliverfibrosis[J].Hepatology，2020，72（2）：729-741.DOl：10.1002/hep.31236.

[48]WANG YJ，CHENYF，YANG FJ，etal.miR-4465-modified mesenchymalstemcell-derivedsmall extracellularvesiclesinhibit liverfibrosis development via targeting LOXL2expression[J].J Zhejiang Univ SciB，2024，25（7）：594-604.DOl：10.1631/jzus.B2300305.

[49]LIUYJ，WANG JY，YANG RX，et al.GP73-mediated secretion of AFP andGP73promotesproliferationandmetastasisofhepatocellular carcinoma cels[J].Oncogenesis，2021，10（10）：69.DOl：10.1038/ s41389-021-00358-3.

[50]HOU X，YANG L，JIANG XH，et al.Role of microRNA-141-3p in the progressionandmetastasisof hepatocellularcarcinomacell[J].Int JBiol Macromol，2019，128：331-339.DOl： 10.1016/j.ijbiomac.2019. 01.144.

[51]GAl XC，TANG BF，LIU FM，et al. miR-27a is negatively regulated by mTOR and inhibits liver cancer cell invasion via targeting GP73[J]. BasicClinMed，2017，37（7）：1015-1020.DOl：10.3969/j.issn.1001- 6325.2017.07.022. 蓋曉晨，湯步富，劉芳銘，等.mTOR負(fù)調(diào)控miR-27a并通過靶向降低 GP73抑制人肝癌細(xì)胞侵襲[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2017，37（7）：1015- 1020.DOl：10.16352/j.issn.1001-6325.2017.07.020.

[52]BONGOLOCC，THOKERUNGAE，YANQ，etal.Exosomesderived from microRNA-27a-3p overexpressing mesenchymal stem cells inhibit the progression of liver cancer through suppression of Golgi membrane protein1[J].Stem Cells Int，2022，2022：9748714.DOI： 10.1155/2022/9748714.

[53]GIORDANOS，COLUMBANOA.microRNAs：New tools for diagnosis，prognosis，andtherapyinhepatocellularcarcinoma？[J].Hepatology，2013，57（2）：840-847.D0l：10.1002/hep.26095.

[54]CALLEGARI E，D'ABUNDO L，GUERRIEROP，etal.miR-199a-3p modulates MTOR and PAK4 pathways and inhibits tumor growth in ahepatocellularcarcinoma transgenicmousemodel[J].Mol Ther Nucleic Acids，2018，11：485-493.DOl：10.1016/j.omtn.2018.04.002.

[55]LOU GH，CHENL，XIA CX，etal.miR-199a-modified exosomes from adipose tissue-derivedmesenchymalstemcellsimprovehepatocellularcarcinoma chemosensitivity through mTOR pathway[J].J Exp Clin CancerRes，2020，39（1）：4.DOl：10.1186/s13046-019-1512-5.

收稿日期：2024-09-25：錄用日期：2024-12-04本文編輯：劉曉紅

引證本文：ZHAO TT，LIJF，ZHOUD，et al. Applicationvalueof gene-modified mesenchymal stem cells in liver diseases[J].JClinHepatol，2025，41（6）：1220-1226.

趙婷婷，李俊峰，周丹，等.基因修飾間充質(zhì)干細(xì)胞在肝臟疾病治療中的應(yīng)用價(jià)值[J].臨床肝膽病雜志，2025，41（6）：1220-1226.