[摘要]目的探究參苓白術(shù)散通過調(diào)節(jié)細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶/c-Jun（ERK/JNK）氨基末端激酶（ERKJNK）通路影響克羅恩?。–D）大鼠結(jié)腸炎性表達(dá)及氧化應(yīng)激的機(jī)制。方法采用隨機(jī)法將60只SD大鼠均分為空白組（CG組）、模型組（M組）美沙拉秦組（MG組）及參苓白術(shù)散高、中、低劑量組（SLZ-H、SLZ-M、SLZ-L組）。使用2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）灌腸液誘導(dǎo)CD模型，造模成功后各組給予相應(yīng)差異處理。監(jiān)測每組大鼠在用藥期間的體質(zhì)量變化，14d后進(jìn)行結(jié)腸組織病理學(xué)觀察及黏膜損傷指數(shù)（CMDI）評分，ELISA檢測C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細(xì)胞介素（IL）-2、IL-8、白蛋白（ALB）、血紅蛋白 （Hb） ） ?γ- -干擾素 （INF-γ） 的含量;DHE-熒光法檢測活性氧（ROS）的含量;Western blot 法檢測腸黏膜組織中JNK、磷酸化JNK（p-JNK）、ERK1/2、磷酸化ERK1/2（ p? -ERK1/2）蛋白表達(dá)水平。結(jié)果與CG組比較，M組大鼠CMDI評分明顯升高 （Plt;0.01 ），血清中 IFN-γ、IL-2、IL-8、CRP 水平顯著升高 （Plt;0.01 ），ALB、Hb水平明顯下降 （Plt;0.01） ，結(jié)腸組織中ROS水平明顯升高（ Plt;0.01 ），JNK ?p -JNK、ERK1/2 ?^p -ERK1/2蛋白表達(dá)顯著升高（ Plt; 0.01）；與M組相比，MG組及SLZ-H組、SLZ-M組CMDI評分顯著降低（ Plt;0.01 ，SLZ-H組 IFN-γ，IL-2，IL-8，CR P水平明顯下降（ Plt;0.01 ），ALB、Hb水平顯著上升 Plt;0.01 ），SLZ- ??M 組 IFN-γ，IL-2 水平明顯下降 Plt;0.01 ），MG組Hb水平顯著上升 Plt;0.01 ），MG、SLZ各劑量組 JNK，p -ERK1/2蛋白表達(dá)明顯降低（ Plt;0.01 ），SLZ-H組、SLZ-M組 p -JNK、ERK1/2蛋白表達(dá)顯著降低 （Plt;0.01） ；與MG組對比，SLZ-L組CMDI評分升高（ Plt;0.05） ，SLZ-H組IL-2明顯下降（ Plt;0.01 ），IL-8和ROS水平降低（ Plt;0.05） ，p-JNK ?p -ERK1/2蛋白水平顯著降低（ Plt;0.01 ），JNK、ERK1/2蛋白表達(dá)降低（ Plt;0.05） ，SLZ-M組 p -ERK1/2降低 （Plt;0.05） 。結(jié)論參苓白術(shù)散可抑制腸道氧化應(yīng)激反應(yīng)，以此緩解 CD大鼠腸道炎癥，其作用機(jī)制可能是通過對 ERK/JNK通路的抑制作用，削減 ROS 生成量，減少 IFN-γ IL-2、IL-8等炎癥因子的釋放，促使CRP水平降低，提升ALB與Hb水平。

[關(guān)鍵詞］克羅恩病；參苓白術(shù)散；炎癥因子；活性氧；細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶 [中圖分類號]R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.06.002

Effects of Shenling Baizhu Powder on colonic oxidative stress in rats with Crohn's disease based on ERK/JNK pathway

LI Qiankun'， ZOU Weiying2，BIN Donghua3*，YU Lian1* 1.Hunan UniversityofChineseMedicine，Changsha，Hunan4lO2O8，China;2.Jianghua YaoAutonomousCountyPeople's Hospital，Yongzhou，Hunan 4255O0，China; 3. The First Hospital of Hunan Universityof Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

[Abstract]Objective Toexplore themechanismbywhich ShenlingBaizhuPowder （SLBZP）affectscolonicinflammatory expresionandoxidativestressinratswithCrohnsdisease （CD）byregulatingtheextracelularsignal-regulatedkinase-JunNterminal kinase（ERK/NK）pathway.MethodsAtotalof 6OSDratswererandomlyandevenlydividedintotheblankgroup （CG group），the modelgroup（Mgroup），the mesalazine group（MGgroup），andthehigh-，medium-，andlow-doseSLBZPgroups（LBZPH，SLBZP-M，andSLBZP-Lgroups）.TheCDmodel wasinducedbyenemasolutionof246-rinitrobenzenesulfonicacid（and corresponding treatmentsweregiven toeachgroupaftersucesful modeling：Thechanges inbody mass ofrats ineach group duringtemedicationperiodwerecontinuouslymonitored.After4days，colonichistopathologicalobservationandcolonicmucosal damage ndex （MDI） scoringwereconducted.ELISAwasusedtodetectthecontentofCreactiveprotein （CRP），interleukin-2， IL-8，albumin （ALB）， hemoglobin （Hb），and interferon- γ （IFN- γ . The content of reactive oxygen species （ROS） was detected by DHEfluorescence method. The protein expression levels of JNK， phosphorylated JNK Ψ -JNK），ERK1/2， and phosphorylated ERK1/2 （pERK1/2）intheintestinal mucosaltissue weremeasured byWestern blotResults ComparedwithCG group，theCMDIscoreof M group significantly increased （ P- lt;0.01），the serum levels of IFN- γ， IL-2， IL-8，and CRP were significantly higher Plt;0.01 1）， the levels ofALB and Hb significantly decreased （ P lt;0.01），the level of ROSin the colonic tissue was significantly elevated （ P? lt;0.01），and the protein expressions of JNK， p -JNK， ERK1/2， and p -ERK1/2 significantly increased （ P lt;0.01）. Compared with M group， the CMDI scores of MG， SLBZP-H， and SLBZP-M groups significantly decreased （ P lt;0.01）; the levels of IFN- γ ，IL-2， IL-8，and CRP in SLBZP-H group were significantly reduced （ P lt;0.01），while the levels of ALB and Hb significantly increased （ P lt;0.01）;the levels of IFN- γ and IL-2 in SLBZP-M group decreased significantly （ P

[Keywords]Crohn'sdisease;Shenling Baizhu Powder;inflammatoryfactors;reactiveoxygenspecies;extracelularsignalregulated protein kinase/c-Jun N-terminal kinase

克羅恩病（Crohn's disease，CD）是炎癥性腸?。╥nflammatoryboweldisease，IBD）的主要類型之一，是一種慢性腸道炎癥性疾病，其特征是透壁性炎癥和沿整個胃腸道的可變不對稱節(jié)段性受累。CD主要癥狀包括疲勞、發(fā)熱、腹痛、腹瀉和體質(zhì)量減輕，少數(shù)患者最初會出現(xiàn)腸狹窄、膿腫或瘺管等并發(fā)癥[2]。目前，CD的治療手段以抗生素、生物制劑、免疫抑制劑等藥物結(jié)合手術(shù)治療為主，存在復(fù)發(fā)率高、不良反應(yīng)大、費用高昂等問題

研究發(fā)現(xiàn)， c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-teminalkinase，JNK）和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（extra-cellularsignal-regulated protein kinasel/2，ERK1/2）是絲裂原活化蛋白激酶信號通路（MAPK信號通路）的關(guān)鍵節(jié)點之一，ERK1/2和JNK參與調(diào)控細(xì)胞生長、凋亡及腸道炎癥反應(yīng)等[4。結(jié)腸中異常高水平的活性氧（reactiveoxygen species，ROS）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激是IBD的特征和致病因素，同時消除過量的ROS，能有效減少細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，并減少促炎因子的表達(dá)，從而有效緩解IBD炎癥

參苓白術(shù)散對于炎癥性腸病有良好的治療效果，本課題組致力于研究參苓白術(shù)散緩解CD患者腸道炎癥的作用機(jī)制，已證明參苓白術(shù)散可以下調(diào)CD模型大鼠炎癥因子水平，同時能促進(jìn)CD大鼠結(jié)腸黏膜屏障功能的修復(fù)，有效緩解CD大鼠腸黏膜屏障損傷[6-。研究表明，參苓白術(shù)散及其有效成分可以顯著降低結(jié)腸炎小鼠血清和結(jié)腸中腫瘤壞死因子（tumornecrosisfactor，TNF）白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1β和IL-6炎癥因子的水平，提高IL-10的水平，從而減輕結(jié)腸組織學(xué)損傷]。

因此，本研究通過構(gòu)建CD大鼠模型，以ERK/JNK通路為切入點，深入研究參苓白術(shù)散對CD大鼠結(jié)腸黏膜狀況以及氧化應(yīng)激水平的作用效果，從而為臨床運(yùn)用參苓白術(shù)散治療CD提供有力的實驗依據(jù)與支撐。

1材料

1.1動物

60只雌雄各半SPF級SD大鼠，體質(zhì)量 180～ 200g ，取材自斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司，實驗動物許可證編號SCXK（湘）2019-0004。動物飼養(yǎng)于第一附屬醫(yī)院實驗中心，在飼養(yǎng)溫度 24～26°C ，相對濕度 50%～70% 環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，自由攝食飲水，實驗方案符合第一附屬醫(yī)院動物倫理委員會標(biāo)準(zhǔn)（倫理委員會審查編號ZYFY20220220-01）。

1.2 藥品與試劑

以原方為基礎(chǔ)，組成：山藥 15g ，白術(shù) 15g ，茯苓15g ，人參 15g ，白扁豆 12g ，薏苡仁 ，甘草 10g ，蓮子 9g ，砂仁 6g ，桔梗6 g^[10] 。以上所有藥材均購自第一附屬醫(yī)院門診藥房（四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展有限公司，批號0143431907）；美沙拉秦顆粒（國藥準(zhǔn)字H20143164，規(guī)格 ：500mg×10 袋）； 4% 多聚甲醛（北京白鯊易科技有限公司，批號：BL539A）；蘇木精-伊紅染色液（廣州維格斯生物科技有限公司，規(guī)格： 2500mL 批號3110200531102007）;2.4.6-三硝基苯磺酸（threenitrobenzenesulfonicacid，TNBS）（批號：P2297）、戊巴比妥鈉（批號：P3761）均購自美國Sigma公司； γ -干擾素（interferon- γ. INF-γ）IL-2、IL-8、C反應(yīng)蛋白（C-reactiveprotein，CRP）、白蛋白（Albumin，ALB）、血紅蛋白（Hemoglobin，Hb）試劑盒（廈門侖昌碩生物科技有限公司，批號分別為ED30173、ED30208、ED30221、ED30078、ED30183、ED30924）；抗熒光淬滅封片劑（谷歌生物科技有限公司，批號：G1401）;冰凍切片活性氧檢測試劑盒（DHE探針）（北京百奧萊博科技有限公司，批號：HR9069）；JNK（美國FAB Industries 公司，批號：Fab7873）;p-JNK、p-ERK1/2、ERK1/2、GAPDH（美國ProteoTech公司，批號分別為80024-1-RR、80031-1-RR、11257-1-AP、60004-1-Ig）。

1.3 儀器

酶標(biāo)儀（廈門侖昌碩生物科技，型號：RaytoRT-6100）；生物組織攤烤片機(jī)（武漢俊杰電子有限公司，型號：JK-6）;微量移液器（德國Eppendorf AG公司，型號：Q37553）；高速冷凍離心機(jī)（湘儀實驗室儀器，型號：H2100R）；冰凍切片機(jī)（美國Thermo FisherScientific公司，型號：CryotomeE）;熒光顯微鏡（日本尼康，型號：Nikon EclipseTi-SR）;雙垂直電泳儀（北京六一生物科技有限公司，型號：DY-CZ-24DN）;快速轉(zhuǎn)膜儀（金斯瑞生物科技股份有限公司，型號：eBlotTML1）；水平脫色搖床（海門其林貝爾制造商，型號：TS-8）。

2方法

2.1參苓白術(shù)散藥液的制備

參照《方劑學(xué)》[中參苓白術(shù)散的組方，生藥量共 112g ，用8倍水浸泡生藥 30min 后使用大火熬煮，待煮沸后，轉(zhuǎn)文火慢煎 30min ，后用紗布去渣留液，取6倍蒸餾水再次煎煮，用水浴鍋混合并濃縮至 2.94g/mL ，存于4 C 冰箱備用。

2.2 CD大鼠模型的制備

參考MORRIS等的造模方法，將 5%TNBS 與50% 乙醇按1：1比例混合成TNBS灌腸液，使用TNBS灌腸液 3mL/kg （含TNBS 80mg/kg， 灌腸制備CD模型，造模前禁食處理，將大鼠經(jīng)腹麻醉（ 2% 戊巴比妥鈉）后倒置，潤滑腸管，以TNBS灌腸液灌腸后倒置 1min 促進(jìn)TNBS吸收。14d周期內(nèi)共灌腸2次，造模成功后隨機(jī)每組抽取2只大鼠處死，取自肛門處向上結(jié)腸（ 15±2） ） cm 段，沿縱軸剪開，常規(guī)浸泡沖洗，依據(jù)大鼠結(jié)腸黏膜充血水腫、腸壁增厚程度或有潰瘍程度判斷是否造模成功。

2.3 動物分組及給藥

60只SD大鼠依照隨機(jī)數(shù)字表分為空白組（CG組）及造模組（1：5），CG組大鼠用同體積滅菌用水行上述灌腸操作，再將造模組同上述操作分為模型組（M組）美沙拉秦組（MG組）及參苓白術(shù)散高、中、低劑量組（SLZ-H、SLZ-M、SLZ-L組），每組10只，經(jīng)隨機(jī)處死后，每組剩8只。各藥均以滅菌用水作溶劑配制，用藥劑量折算以大鼠體表面積換算公式為計算標(biāo)準(zhǔn)，大鼠每日給藥劑量 ：=[ 成人臨床劑量 ×6.3 （人與大鼠體表面積折算系數(shù)）/成人體質(zhì)量（ （60kg） [7]所有大鼠均無限制飲食，造模成功后定期灌胃給藥，綜合給藥劑量如下：MG組，美沙拉秦藥液（ 0.21g?kg^-1） 灌胃；SLZ-H、SLZ-M、SLZ-L組，參苓白術(shù)散藥液（5.88，11.76，23.52g?kg^-1） 灌胃；CG組與M組均通過相同方式給予等體積的滅菌水，每日進(jìn)行1次操作，持續(xù) 14d_c

2.4 實驗指標(biāo)檢測

2.4.1一般情況觀察及結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colon in-jurymorphologyindex，CMDI）評分觀察各組大鼠是否有食納量減少、大便習(xí)慣及性狀改變、體質(zhì)量減輕等情況。依據(jù)BUTZNER等2提出的標(biāo)準(zhǔn)觀察有無上述表現(xiàn)及治療后情況是否改善，并根據(jù)取材后大鼠結(jié)腸黏膜損傷程度、有無潰瘍等進(jìn)行CMDI評分，每組取6只大鼠進(jìn)行檢測，具體評分標(biāo)準(zhǔn)如下[2：依據(jù)形態(tài)學(xué)改變特征，黏膜完整為0分；黏膜僅存在輕度充血水腫為1分；腸黏膜充血水腫伴糜爛為2分；黏膜高度充血水腫，主要潰瘍面積 lt;40% 為3分；腸管與周圍組織有粘連，主要潰瘍面積 為4分。

2.4.2HE染色取各組大鼠結(jié)腸組織，經(jīng)選用石蠟固定，進(jìn)一步脫水后切成 4μm 厚度的連續(xù)切片，再經(jīng)干燥、脫蠟，二甲苯暴露清晰視野并封片。封片后，在光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)腸組織的病理變化。

2.4.3ELISA檢測使用雙抗體夾心法，每組取6只大鼠，抗體包被于酶標(biāo)板上，抗體與復(fù)合物結(jié)合，洗去表面雜質(zhì)，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，最終形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，洗去游離試劑成分，加入顯色底物，用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測光密度（opticaldensity，OD）值，大鼠炎癥因子濃度與該值之間成正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中炎癥因子的濃度。

2.4.4二氫乙錠（dihydroethidium，DHE）-熒光探針每組取6只大鼠結(jié)腸組織，將細(xì)胞按\"2.3\"實驗部分分組，分別向各組細(xì)胞中加入適量體積的DHE（終濃度 5μmol/L ，放回 37°C 培養(yǎng)箱避光孵育 20min 。孵育完成后，使用熒光顯微鏡在 500μm× 500μm 的視野范圍內(nèi)觀察并拍攝各組細(xì)胞的熒光圖像，通過ImageJ軟件定量分析，計算相對熒光強(qiáng)度（meanfluorescenceintensity，MFI）以評估ROS水平。2.4.5Westernblot檢測每組剪取6只大鼠等量結(jié)腸組織，經(jīng)研磨，PBS洗滌，RIPA裂解后離心 30min ，12000r?min^-1 （離心半徑 8.6cm ）、4℃取上清液，37°C 孵育 30min ，用酶標(biāo)儀測定，檢測 JNK，p-JNK 、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白含量，本研究采用ImageJ軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行分析，以GAPDH表達(dá)水平作為內(nèi)參，通過計算目標(biāo)蛋白與內(nèi)參的灰度值比值，以及磷酸化蛋白水平與總蛋白水平的灰度值比值變化來確定各蛋白的相對表達(dá)水平。

2.5 統(tǒng)計學(xué)分析

運(yùn)用SPSS27.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析分析，其中計量資料以“x+s\"表示。滿足正態(tài)性與方差齊性的多組間均數(shù)，采用單因素方差分析（One-wayANOVA），在組間兩兩比較運(yùn)用LSD檢驗；若不滿足正態(tài)性條件，則采用Krukal-Wallis H 檢驗。以 Plt; 0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1一般情況觀察及CMDI評分

CG組大鼠在研究期間整體活動度及飲食正常，排出顆粒樣糞便。造模后的第1天，M組、MG組以及SLZ各劑量組均出現(xiàn)稀便的跡象，其進(jìn)食量與活動功能相較于之前均有所減少，在進(jìn)行第二次灌腸操作后，相關(guān)癥狀表現(xiàn)更為嚴(yán)重。當(dāng)給藥持續(xù) 14d 后，M組大鼠的體質(zhì)量與CG組相比明顯降低，活動能力也顯著減弱，稀便成為普遍現(xiàn)象，并且有少量大鼠還同時出現(xiàn)了便血以及黏液便的情況。相較于M組，MG組以及SLZ的各劑量組大鼠在體質(zhì)量方面，于造模后均呈現(xiàn)出不同程度的上升態(tài)勢，其大便形態(tài)基本成形，僅在個別大鼠身上出現(xiàn)少量便血情況，且未發(fā)現(xiàn)明顯的黏液便。對大鼠結(jié)腸組織展開解剖觀察，并進(jìn)行CMDI評分。與CG組對比，M組的CMDI評分出現(xiàn)顯著升高 （Plt;0.01） ；與M組相比，MG組以及 SLZ-H，SLZ-M 組的CMDI評分則有明顯的降低（ Plt;0.01 ）；與MG組對比，SLZ-L組的CMDI評分有所提高（ （Plt;0.05） 。詳見表1。

3.2參苓白術(shù)散對CD大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)的影響

CG組的結(jié)腸黏膜結(jié)構(gòu)在形態(tài)方面未出現(xiàn)顯著的改變情況。與CG組進(jìn)行對照，M組結(jié)腸組織鏡下可見輕度的黏膜上皮脫落及腺體壞死，同時伴有黏膜下層明顯水腫、大量炎癥細(xì)胞浸潤。各個用藥組的黏膜損傷程度較M組都有明顯的減輕，MG組的部分充血水腫現(xiàn)象主要存在于黏膜層，鏡下見部分腺體萎縮，少量炎癥細(xì)胞浸潤；SLZ-L劑量組可見明顯充血水腫情況，且存在少量炎癥細(xì)胞浸潤；SLZ-M組僅有部分區(qū)域能夠觀察到炎癥反應(yīng)，大部分區(qū)域呈現(xiàn)正常結(jié)構(gòu)；SLZ-H組絕大部分黏膜結(jié)構(gòu)保持完好，僅有輕微的炎癥反應(yīng)存在。詳見圖1。

3.3參苓白術(shù)散對CD 大鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-8、CRP、ALB、Hb水平表達(dá)的影響

與CG 組比較，M組大鼠血清中IL-2、IL-8、CRP、IFN- ?γ 水平顯著升高（ Plt;0.01 ，ALB、Hb水平明顯下降（ Plt;0.01? ）;SLZ-L組中CRP、IFN- ?γ 、IL-2 水平升高（ （Plt;0.01） ），ALB水平下降 （Plt;0.01） ;SLZ-M組中CRP水平升高（ Plt;0.01 ），Hb水平下降 （Plt;0.01） 。與M組比較，SLZ-H組的 IFN-γ，IL-2，IL-8 以及CRP水平均呈下降態(tài)勢 （Plt;0.01） ，而ALB、Hb 水平顯著上升（ Plt;0.01 ）;SLZ-M組 IFN-γ，IL-2 水平明顯下降 （Plt;0.01 ），MG組Hb水平顯著上升 （Plt;0.01） 。與MG組對比，SLZ-H組IL-2明顯下降（ Plt;0.01 ），IL-8水平下降 （Plt;0.05） 。詳見表2。

3.4對CD大鼠結(jié)腸組織中ROS水平表達(dá)的影響

與空白組比較，MG組 ??M 組大鼠結(jié)腸組織中ROS水平明顯升高 ；與MG比較，SLZ-H組ROS水平降低 （Plt;0.05） 。詳見圖2、表3。

表2各組大鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-8、CRP、ALB、Hb的水平比較

3.5對CD大鼠結(jié)腸上皮組織JNK、p-JNK、ERK1/2_?p -ERK1/2表達(dá)的影響

相較于CG組，M組、MG組、SLZ-L組的JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)均顯著上升 ，且SLZ-M組的 p -ERK1/2蛋白表達(dá)也顯著升高（ Plt;0.01 ）；與M組相比，MG組、SLZ-H組、SLZ-M組、SLZ-L組的JNK、p-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯下降（ Plt;0.01） SLZ-H 組、SLZ-M組的 、ERK1/2蛋白表達(dá)顯著降低 （Plt;0.01） 。與MG組對比，SLZ-H組p-JNK、p-ERK1/2蛋白水平顯著降低0 Plt;0.01 ），JNK、ERK1/2蛋白表達(dá)降低 （Plt;0.05） ：SLZ-M組 p -ERK1/2降低（ Plt;0.05 ）。詳見圖3、表4。

4討論

CD是一種病因不明的反復(fù)發(fā)作性的腸道黏膜慢性炎癥，可以影響全消化道，常見癥狀有腹瀉、腹痛、體質(zhì)量減輕、發(fā)熱、腸道出血等[13]。中醫(yī)難以用一個病名概括CD，據(jù)其臨床表現(xiàn)可“腸癰”“腹痛”“便血\"\"痢疾\"“痔漏\"\"虛勞\"等[4。CD的演變是由炎癥反應(yīng)的復(fù)雜改變介導(dǎo)的，其特征是腸黏膜屏障先天免疫的改變[]

《太平惠民和劑局方·卷三·治脾胃虛弱泄瀉方》1中云參苓白術(shù)散：蓮子肉（去皮）、薏苡仁、縮砂仁、桔梗（炒至深黃色）各一斤，白扁豆（姜汁浸，去皮，微炒）一斤半，白茯苓、人參（去蘆）、甘草（炒）、白術(shù)、山藥（各）二斤。方中人參、白術(shù)相合，大補(bǔ)脾氣;茯苓、白術(shù)相合、清腸道之濕；山藥平補(bǔ)脾胃；蓮子肉甘平而澀、澀腸止瀉；白扁豆、薏苡仁佐臣藥以淡滲之功；砂仁辛溫醒脾、化濕和胃；桔梗宣開肺氣、通利水道、載藥上行，炙甘草益氣和中，調(diào)和諸藥1。諸藥配伍，補(bǔ)脾培中、淡滲利濕、補(bǔ)瀉兼施、補(bǔ)而不滯

目前認(rèn)為，氧化應(yīng)激是IBD發(fā)生、進(jìn)展和嚴(yán)重程度的關(guān)鍵因素，而ROS生成增加和抗氧化活性降低則是IBD的主要發(fā)病機(jī)制[8]。BALUMUS等[研究表明，氧化應(yīng)激與IBD活動有關(guān)，并且ROS產(chǎn)生的主要部位是被大量白細(xì)胞浸潤吞噬產(chǎn)生的炎癥性黏膜。ROS的過度形成會導(dǎo)致氧化還原穩(wěn)態(tài)被破壞，進(jìn)而導(dǎo)致氧化應(yīng)激對黏膜的損傷[20]。目前研究還發(fā)現(xiàn)在CD患者中，IL-1β、IL-6和IL-8的黏膜水平顯著高于空白組2]。THelper1細(xì)胞因子（IFN-γ和IL-2）基因內(nèi)單核苷酸多態(tài)性的基因型與IBD、CD和UC顯著相關(guān)；而 IFN-γ 是過度免疫反應(yīng)的主要驅(qū)動因素，可導(dǎo)致腸黏膜損傷，并促成CD發(fā)病[22-23]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SLZ-H組 IFN-γ，IL-2，IL-8 促炎因子水平較M組顯著下降，表明參苓白術(shù)散能下調(diào)CD大鼠促炎因子 _{IFN-γ，IL-2，IL-8} 的表達(dá)，減輕CD大鼠腸道氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)。

ERK是高度特異性三層激酶級聯(lián)中的效應(yīng)激酶，在細(xì)胞周期進(jìn)程、存活和分化過程中起著關(guān)鍵作用2。JNK也是MAPK家族的成員之一，主要介導(dǎo)真核細(xì)胞對各種非生物和生物應(yīng)激損傷的反應(yīng)25。JNK可以通過與硫氧還蛋白和谷二醇還蛋白等氧化還原活性蛋白的相互作用而被ROS激活2。馬齒莧提取物及其活性化合物通過抑制DSS誘發(fā)的結(jié)腸炎小鼠的促炎性細(xì)胞因子（TNF- α_ααα_α IL-6和IL-1β）的產(chǎn)生改善炎癥性腸疾病，抑制ERK、JNK和 p38 表達(dá)的磷酸化[]。研究發(fā)現(xiàn)，減少 TNF-α，IL-1β_?p-JNK_?p- ERK等炎癥細(xì)胞因子群的釋放可能與MAPK的COX2/p38/JNK/ERK/I×B-α/NF-×B 炎癥通道發(fā)揮抗炎作用有關(guān)[28]。然而尚未有研究證明參苓白術(shù)散是否通過上述通道抑制CD患者腸道炎癥反應(yīng)。本研究表明，SLZ-H組、SLZ-M組大鼠 JNK_?p-JNK 、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)較M組明顯降低。

CRP是檢測和隨訪CD疾病活動度的重要標(biāo)志物，在機(jī)體發(fā)生炎癥時，CRP/ALB比值水平對IBD疾病活動性敏感，可用于UC和CD疾病活動性的評估29-30]。本研究表明，M組CRP水平較CG組顯著升高，ALB、Hb水平較CG組明顯下降。而SLZ-H組相較M組CRP水平明顯下降，ALB、Hb水平顯著上升。

本研究結(jié)果提示，完成給藥周期后，CD大鼠出現(xiàn)明顯腸道炎癥反應(yīng)，M組大鼠的體質(zhì)量與CG組相比明顯降低，稀便成為普遍現(xiàn)象，并且有少量大鼠出現(xiàn)黏液血便的情況。M組結(jié)腸組織鏡下可見輕度的黏膜上皮脫落及腺體壞死，同時伴有黏膜下層明顯水腫、大量炎癥細(xì)胞浸潤。MG組以及SLZ各劑量組大鼠在體質(zhì)量方面，于造模后較M組均呈現(xiàn)出不同程度的上升態(tài)勢，且僅部分大鼠可見少量便血，未發(fā)現(xiàn)明顯的黏液便。與CG組比較，M組大鼠血清中IL-2、IL-8、CRP、IFN- ?γ 水平顯著升高，ALB、Hb水平明顯下降。相較于CG組，M組、MG組、SLZ-L組的JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)均顯著上升，且SLZ-M組的 p -ERK1/2蛋白表達(dá)也顯著升高。

綜上，參苓白術(shù)散能下調(diào)CD大鼠促炎因子IFN-γ IL-2、IL-8的表達(dá)，降低CRP、ALB、Hb水平，減輕CD大鼠腸道氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)，抑制JNK、p-JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)，有效緩解CD大鼠腸道炎癥，其機(jī)制可能與抑制ERK/JNK信號通路表達(dá)有關(guān)。本次實驗樣本量小，抗氧抗炎涉及信號通路較多，仍有待進(jìn)一步研究。

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（本文編輯蘇維）