羊肚菌是一種珍稀食用菌，屬子囊菌亞門盤菌綱盤菌目羊肚菌科，別稱羊肚菜、狼肚菜等。羊肚菌分布廣泛，在全國除海南省外均有栽培，近年來已成為食用菌栽培品種的新貴，市場對羊肚菌的需求不斷上升。

遼寧省羊肚菌栽培面積持續(xù)增長，但羊肚菌液體菌種的生產(chǎn)還沒有試驗(yàn)推廣，筆者在遼寧省鐵嶺縣茂森食用菌培育中心實(shí)施了液體菌種培養(yǎng)試驗(yàn)，現(xiàn)總結(jié)如下供交流參考。

1溫度對羊肚菌母種活化的影響

以羊肚菌主栽品種六妹羊肚菌、七妹羊肚菌、梯菱羊肚菌為研究對象，自3種羊肚菌新鮮子實(shí)體菌柄部位用組織分離法獲得菌株Y1（六妹）、Y2（七妹）、Y3（梯菱），經(jīng)ITS、RPB1、RPB2及TEF1多基因序列聯(lián)合分析，確定3株羊肚菌分別為六妹羊肚菌[Morchellasextelata（Mel-6）]、七妹羊肚菌[M.eximia（Mel-7）]、梯菱羊肚菌]M.importuna（Mel-10）]。

將試驗(yàn)菌株母種平板活化后，用直徑 5mm 的打孔器打出大小相同的圓形菌塊，菌塊接種于PDA固體培養(yǎng)基中央。設(shè)置5個(gè)培養(yǎng)溫度，分別為10、15，20，25，30‰ ，于恒溫條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)，每個(gè)溫度處理3次重復(fù)。分別于培養(yǎng)后 ^48，72h 在菌落邊緣畫線標(biāo)記，測量兩次標(biāo)記線之間的長度，即菌絲生長速度 （cm/d） ，并記錄菌落、菌絲等培養(yǎng)特征。

供試菌株在不同溫度處理下平均生長速度見表1，在 10～30^cC 范圍內(nèi)，3個(gè)羊肚菌菌株菌絲均萌發(fā)、生長。培養(yǎng)溫度為 10% 時(shí)，菌絲生長緩慢稀疏，菌落邊緣較整齊； 20% 時(shí)，菌絲生長速度分別為1.52、1.44，1.48cm/d ，菌絲呈放射狀生長，粗壯濃密，菌落邊緣整齊； 25^°C 時(shí)，3個(gè)菌株菌絲生長速度均達(dá)到最高值，分別為 1.68，1.57，1.56cm/d ，菌絲放射狀生長，較粗壯，較濃密，菌落邊緣整齊；培養(yǎng)溫度超過25^°C 時(shí)，菌絲生長速度顯著下降； 30% 時(shí)，3個(gè)菌株菌絲生長速度分別下降至 0.83，0.89，0.82cm/d ，菌絲逐漸纖細(xì)，分枝增多，菌落邊緣整齊度下降。綜合考慮3個(gè)菌株的菌絲生長速度，結(jié)合菌落邊緣整齊度、菌絲濃密程度等生長特征，確定 20% 為菌絲生長最佳溫度。實(shí)際生產(chǎn)中，培養(yǎng)溫度應(yīng)低于最適宜溫度 2～3C 因此，本試驗(yàn)確定羊肚菌菌絲培養(yǎng)最佳溫度為 18～20% 。3個(gè)試驗(yàn)菌株對溫度變化的響應(yīng)差異不顯著，以下試驗(yàn)選擇Y1作為研究對象。

2羊肚菌液體菌種培養(yǎng)基配方篩選

以六妹羊肚菌Y1為供試菌株，以菌絲體濕重、菌絲球直徑為考察指標(biāo)，篩選適宜羊肚菌菌絲生長的液體菌種培養(yǎng)基配方。

2.1液體菌種培養(yǎng)基配方為確定搖瓶菌種和發(fā)酵罐菌種生產(chǎn)最適培養(yǎng)基，根據(jù)前期工作基礎(chǔ)，結(jié)合相關(guān)參考文獻(xiàn)，已知羊肚菌菌絲生長的適宜碳源為葡萄糖，氮源為蛋白肺。本試驗(yàn)以PDA培養(yǎng)基為對照，設(shè)置5個(gè)培養(yǎng)基配方（表2）進(jìn)行試驗(yàn)。以菌絲體生物量（濕重）和菌絲球直徑作為參考指標(biāo)，確定適宜培養(yǎng)基配方。不同配方生產(chǎn)試驗(yàn)在鐵嶺縣茂森食用菌培育中心羊肚菌菌種生產(chǎn)車間進(jìn)行。

2.2液體菌種培養(yǎng)及測定方法配制上述培養(yǎng)基，滅菌結(jié)束后，待培養(yǎng)液溫度降至 以下時(shí)，于超凈工作臺(tái)上接種。每瓶接種2塊 5mm 菌種塊，于20°C，150r/min 條件下培養(yǎng)，每個(gè)配方3次重復(fù)。培養(yǎng) ^48h 后，置于磁力攪拌器上打碎菌絲體，繼續(xù)搖床培養(yǎng)至6d，測定菌絲體生物量（濕重）、菌絲球大?。ㄖ睆剑?。

2.3結(jié)果與分析由表3可以看出，不同培養(yǎng)基配方培養(yǎng)的羊肚菌液體菌種菌絲球大小和菌絲體生物量之間的差異。菌絲體生物量的累積與氮源添加量呈正相關(guān)，隨培養(yǎng)基中蛋白脈添加量的增加，菌絲體生物量呈現(xiàn)升高趨勢。P1＼～P5培養(yǎng)基菌絲體生物量均顯著高于對照組（ （Plt;0.05） ，其中， ^p4，p5 培養(yǎng)基菌絲體生物量達(dá)最大值，且兩者之間差異不顯著0 （Pgt;0.05） ，菌絲體濕重分別為 83.4，82.5mg/mL 5種培養(yǎng)基菌絲球直徑均小于 0.45cm ，其中，P4培養(yǎng)獲得的菌絲球直徑最小，為 0.28cm 。根據(jù)菌絲體濕重、菌絲球直徑兩個(gè)指標(biāo)，確定P4為最佳培養(yǎng)基。

3小結(jié)

2022—2023年在鐵嶺縣茂森食用菌培育中心的生產(chǎn)試驗(yàn)示范區(qū)試驗(yàn)，累計(jì)試驗(yàn)2批次，每批次800L 按照羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程進(jìn)行菌種生產(chǎn)及出菇試驗(yàn)，并跟蹤生產(chǎn)過程，分別在羊肚菌菌絲生長各個(gè)時(shí)期進(jìn)行實(shí)地考察調(diào)研。經(jīng)2022—2023年初步驗(yàn)證結(jié)果表明，按照本試驗(yàn)制備的羊肚菌液體菌種，具有菌種生產(chǎn)周期短、菌齡一致、生產(chǎn)成本低、接種方便等優(yōu)點(diǎn)，比傳統(tǒng)的固體制種培養(yǎng)期縮短60% 左右，同時(shí)解決了固體接種發(fā)菌周期長、生產(chǎn)成本高、污染率高、菌齡不一致等問題，降低原料成本和用工成本。

羊肚菌液體菌種應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中，可節(jié)約大量制作固體菌種的小麥，減少生產(chǎn)菌種產(chǎn)生多余的廢棄物，具有良好的生態(tài)效益，有利于推動(dòng)羊肚菌產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康發(fā)展。

代勇，撫順市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法隊(duì)，郵編113006（遼寧）。

收稿日期：2025-01-16