摘要：丹霞小花苣苔（Primulinadanxiaensis）為丹霞地貌特有種，隸屬于苦苣苔科，分布狹窄，數(shù)量稀少，需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)繁保育。該文以丹霞小花苣苔葉切片為外植體，通過(guò)篩選適宜的 表面消毒時(shí)間、不定芽誘導(dǎo)、芽增殖及生根的培養(yǎng)基和組培苗的移栽基質(zhì)，建立其組培快繁技術(shù)體系。結(jié)果表明：（1）外植體適宜的消毒條件為 7 5 % 酒精消毒 消毒 6 m i n ，接種存活率達(dá) 8 4 . 9 5 % 。（2）不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為 -BA ，芽誘導(dǎo)率達(dá) 100 % ，40d后平均葉片芽數(shù)達(dá)38.35。（3）芽增殖培養(yǎng)基為 -BA 0d后芽增殖系數(shù)達(dá)7.54。（4）生根培養(yǎng)基為 后生根率達(dá) 100 % ，單株生根數(shù)達(dá) 2 6 . 2 8 。（5）組培苗移栽到喀斯特地貌的腐葉土 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比為 1 ： 1 ： 1 ），泥炭王 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比為 1 ： 1 ： 1 ）和珍珠巖 + 蛭石（體積比為 1 ： 1 ）3種基質(zhì)上成活率均達(dá) 100 % ，生長(zhǎng)良好，無(wú)明顯差異。該研究可實(shí)現(xiàn)丹霞小花苣苔的大量繁殖，有助于其保護(hù)和開發(fā)利用。

中圖分類號(hào)：Q943.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1000-3142（2025）04-0667-11

In vitro culture and plant regeneration from the leaves of Primulina danxiaensis

HAN Wei ，CHANG Shengxin'， MAI Guangwei ， ZENG Xiaoyan ，CHEN Zaixiong3，F(xiàn)AN Qiang2*，YU Baiyin1*

（1.GuangdorocalKbatfUildCoeofFddeialosiRoColf andAgriculture，haoguanUniversityhaogua52Oo5，Guangdong，China；2.GuangdongProvincialKeyLaboratoryfan StressBiology，SchoolofLifeSciences，SunYat-Sen University，Guangzhou 510275，China；3.Administrative Commission of Danxiashan National Park，Shaoguan 5123Oo，Guangdong，China）

Abstract：Primulinadanxiaensis，anendemic speciesof the Danxia landform within theGesneriaceae family，exhibitsa narow distribution range anda limited population size，thereby necessitating propagation and conservation via plant tisue culture techniques.Inthis paper，inorder toestablish the tissecultureandrapid propagation technical systemof P. danxiaensis，the leaf segments of P . danxiaensis were used as explants to screen the appropriate surface disinfection time with ，the culture media for adventitious bud induction，bud proliferation and rooting，as wellas the transplanting substrates fortisse-cultured sedlings.The results were as follows：（1）Theoptimal disinfection procedure involved a 30 s immersion in 7 5 % alcohol，followed by a 6 min soak in ，achieving an 8 4 . 9 5 % survival rate of leaf explants.（2）For adventitious bud induction，the most effective medium was found to be1/2MS supplemented with 6-benzyladenine（6-BA） and α -naphthaleneaceticacid（NAA） ，resulting in a 100 % bud inductionrateand an average of 38.35 buds perleaf explant after 40 daysof culture.（3）Bud proliferation medium was optimally achieved on 1/2MS supplemented with 6-BA and NAA ，yielding aproliferation coeffcient of 7.54 after 50 days.（4）Rooting was successfully induced using 1/2MS medium supplemented with NAA （204號(hào) ，leading to a 100 % rooting rate and an average of 26.28 roots per plant after 3O days.（5） The tissuecultured seedlings were successullyaclimatizedand transplanted into threediferent mixed substrates：a mixtureof leaf mould of karst landform，perlite，and vermiculite （ 1 ： 1 ： 1 ，V/V/V），peat soil，perlite，and vermiculite（ 1 ： 1 ： 1 ， V / V / V ），and perliteand vermiculite （ 1 ： 1 ， V/V），all with 100 % survival rates and demonstrating robust growth. This studyis capable of achieving large-scale propagation of P .danxiaensis，aresultthat significantlycontributes to both its resource protection and utilization.

KeyWords：Primulina danxiaensis，leaves，in vitro culture，adventitious bud，plant regeneration

丹霞小花苣苔（Primulinadanxiaensis）隸屬于苦苣苔科（Gesneriaceae），原為小花苣苔屬（Chiritopsis），后經(jīng)分類學(xué)修訂，被并入報(bào)春苣苔屬（Primulina）（Wanget al.，2O11；Weber et al.，2011），是一種多年生草本植物，其植株高2～10c m ，根狀莖長(zhǎng) ，花白色，花期為5一6月，該物種于2010年首次被報(bào)道，對(duì)環(huán)境要求較高，一般生長(zhǎng)于海拔 1 0 0 ～ 2 5 0 m 大巖石裂縫中，靠近淺池塘、濕坑或陰暗洞穴，常與苦苣苔科旋蒴苣苔、鳳尾蕨科劍葉鳳尾蕨、蕁麻科赤車、鱗始蕨科圓葉鱗始蕨和禾本科淡竹葉等小型植物伴生（Shenetal.，2010）。目前，僅分布于丹霞地貌區(qū)域，在廣東丹霞山存在12個(gè)居群，每個(gè)居群包含50～70個(gè)體，其中包括10～20株幼苗，在湖南永興、江西寧都和興國(guó)有3個(gè)居群（張貴志和喻勛林，2012；田徑等，2014），植株約800株。Chen等（2021）運(yùn)用簡(jiǎn)化基因組測(cè)序（RAD-seq）技術(shù)對(duì)采自丹霞山12個(gè)居群的104個(gè)丹霞小花苣苔個(gè)體進(jìn)行了遺傳多樣性分析，研究表明丹霞小花苣苔屬于極小種群物種，具有很強(qiáng)的遺傳結(jié)構(gòu)，應(yīng)對(duì)每個(gè)現(xiàn)存種群采取措施進(jìn)行保護(hù)。

報(bào)春苣苔屬是我國(guó)苦苣苔科最大的屬，在全球范圍內(nèi)約有230多種，其中我國(guó)分布有210多種（馬虎生等，2025），該屬植物有較高的園林開發(fā)應(yīng)用前景，同時(shí)還有很多藥用價(jià)值，有消炎止痛、散瘀消腫、解蛇毒等功效（王寧等，2023；羅彭等，2023）。但其分布狹窄，生境特殊，一旦生境被破壞很難生存，因此其種質(zhì)資源亟待保護(hù)（寧祖林，2017）。丹霞小花苣苔作為報(bào)春苣苔屬植物之一，其花色艷麗，花朵精致，具有良好的觀賞價(jià)值，適合于室內(nèi)小盆栽培或園林盆景點(diǎn)綴。華南國(guó)家植物園寧祖林等人將采自丹霞山的短序唇柱苣苔作為父本，與丹霞小花苣苔為母本進(jìn)行雜交，成功培育出“紫霞”報(bào)春苣苔，并于2014年獲國(guó)際新品種登錄。開展丹霞小花苣苔人工繁殖的研究對(duì)報(bào)春苣苔屬植物種質(zhì)資源的保護(hù)和開發(fā)利用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

在自然條件下，丹霞小花苣苔主要依靠種子進(jìn)行繁殖，但其種子較小，收集難度大，限制了人工播種繁殖的開展。然而報(bào)春苣苔屬植物能夠采用扦插方式進(jìn)行繁殖，因此針對(duì)不同濃度植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的處理效果、扦插方式及扦插基質(zhì)等影響扦插的關(guān)鍵因素已開展相關(guān)研究（戚華沙等，2018；閆海霞等，2019a，2020），但扦插繁殖仍存在繁殖系數(shù)低且受季節(jié)影響，需要較多葉片作為材料。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可不受季節(jié)限制，利用少量植物組織，通過(guò)再生能獲得大量植株，這一技術(shù)在報(bào)春苣苔屬植物保育擴(kuò)繁方面的研究結(jié)果陸續(xù)被報(bào)道。但不同植物的再生途徑存在差異。例如，Ma等（2010）和Yang等（2012）以報(bào)春苣苔的葉片為外植體，通過(guò)誘導(dǎo)體胚和不定芽實(shí)現(xiàn)植株再生；付傳明等（2015）以條葉唇柱苣苔的葉片為外植體，通過(guò)不定芽誘導(dǎo)途徑獲得了再生植株；閆海霞等（2017）以褐紋報(bào)春苣苔的葉片為外植體，通過(guò)不定芽和愈傷組織誘導(dǎo)兩種途徑建立了其組培快繁體系；何東平等（2024）通過(guò)葉片誘導(dǎo)不定芽，建立了壽城報(bào)春苣苔的離體再生技術(shù)，需針對(duì)不同植物探索其再生條件。截至目前，關(guān)于丹霞小花苣苔繁殖技術(shù)的研究，尚未見相關(guān)報(bào)道。

本研究以野生丹霞小花苣苔的葉片為材料，比較 不同消毒時(shí)間對(duì)葉片表面消毒效果的影響；研究不同濃度的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)不定芽誘導(dǎo)和增殖的影響，篩選適宜不定芽誘導(dǎo)和增殖的培養(yǎng)基；觀察和統(tǒng)計(jì)不同的生根培養(yǎng)基及不同移栽基質(zhì)分別對(duì)組培苗生根和移栽馴化成活的影響，以篩選最佳生根培養(yǎng)基和移栽馴化栽培基質(zhì)。旨在建立其組培快繁技術(shù)體系，實(shí)現(xiàn)其種質(zhì)資源的保護(hù)、種群擴(kuò)大及開發(fā)利用，為其他報(bào)春苣苔屬植物的繁殖提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1材料

經(jīng)丹霞山管理委員會(huì)批準(zhǔn)，在原生地韶關(guān)仁化丹霞山（海拔 9 5 m ， ）采集丹霞小花苣苔（Primulinadanxiaensis）野生植株（圖1：A），后種植于韶關(guān)學(xué)院藥用植物資源圃中（圖1：B）。待植株生長(zhǎng)一段時(shí)間后，進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2方法

1.2.1材料的表面消毒從韶關(guān)學(xué)院藥用植物資源圃中剪取丹霞小花苣苔的葉片帶回實(shí)驗(yàn)室，先將剪取的葉片用洗衣粉浸泡 1 0 m i n ，再用清水輕輕洗滌干凈，最后進(jìn)行表面消毒。消毒過(guò)程為先用 7 5 % 酒精消毒 3 0 s ，無(wú)菌水洗3次，再用 分別浸泡消毒 ，無(wú)菌水洗4次。將消毒后的葉片切成長(zhǎng) x 寬約為 0 . 8 c m× 0 . 8 c m 的小塊（圖1：C）。接人 -BA ， 培養(yǎng)基中，15d后統(tǒng)計(jì)葉切片外植體褐化率、污染率和成活率，比較 不同消毒時(shí)間對(duì)葉片生長(zhǎng)的影響。每個(gè)處理接種至少30個(gè)葉切片，重復(fù)3次。其中，褐化率 （ % ） = 褐化外植體數(shù)/接種外植體數(shù) × 1 0 0 （褐化外值體以接種葉切片褐化面積等于或小于1/3的計(jì)數(shù)），污染率 （ % ） = 污染外植體數(shù)/接種外植體數(shù) Φ× 1 0 0 ，外植體成活率 （ % ） = 成活外植體數(shù)/接種外植體數(shù) × 1 0 0 。

1.2.2不定芽的誘導(dǎo)采用 7 5 % 酒精 對(duì)葉片消毒后，以葉切片為外植體，參考?xì)W明燭（2023）的方法，以 1 / 2 M S 為基本培養(yǎng)基，設(shè)置不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合，以下同此。分別為 和NAA（0.1、0.2、0.5 ）組合的9種不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基。 4 0 d 后統(tǒng)計(jì)不定芽誘導(dǎo)率和每個(gè)葉片芽數(shù)。每個(gè)處理接種至少30個(gè)葉切片，重復(fù)3次。其中，不定芽誘導(dǎo)率 （ % ） = 誘導(dǎo)出芽的外植體數(shù)/成活的外植體數(shù) × 100，平均每片葉片的芽數(shù) Σ= Σ 誘導(dǎo)出的芽數(shù)/有芽的葉片數(shù)。

1.2.3不定芽的增殖將誘導(dǎo)的不定芽（3～5個(gè)為一叢）接入6-BA ）與NAA ）組合的12種芽增殖培養(yǎng)基上（基本培養(yǎng)基為 1 / 2 M S ），40d后統(tǒng)計(jì)不定芽的增殖情況，計(jì)算增殖系數(shù)。每個(gè)處理接種至少30叢芽，重復(fù)3次。其中，芽增殖系數(shù) Σ= Σ 增殖后的總芽數(shù)/接種的芽數(shù)。

1.2.4生根培養(yǎng)將增殖的不定芽切分成單芽后分別轉(zhuǎn)入 1 / 2 M S 含有 （的3種培養(yǎng)基中。30d后觀察芽的生根情況，統(tǒng)計(jì)生根率和平均根數(shù)。每個(gè)處理接種至少30個(gè)芽苗，重復(fù)3次。其中，苗成活率 （ % ） = 成活的苗/接種的苗 × 1 0 0 ，生根率 （ % ） = 有根的苗/成活的苗× 1 0 0 ，平均根數(shù)=生根總條數(shù)/成活的苗。

1.2.5煉苗和移栽將生根的組培苗移到正常室溫下經(jīng)過(guò)7d煉苗，后移栽到3種不同的基質(zhì)上，分別是喀斯特地貌的腐葉土 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比 1 ： 1 ： 1 ），泥炭土 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比1 ： 1 ： 1 ），珍珠巖 + 蛭石（體積比 1 ： 1 ）。統(tǒng)計(jì)移栽成活率和新葉長(zhǎng)出率，比較不同的基質(zhì)對(duì)組培苗移栽成活的影響。其中，移栽成活率 （ % ） = 成活的植株/移栽的植株 × 1 0 0 ，新葉長(zhǎng)出率 （ % ） = 長(zhǎng)出新葉的植株/成活的植株 × 1 0 0 。

1.2.6培養(yǎng)基的制備和培養(yǎng)條件

1.2.6.1培養(yǎng)基的制備使用分析純化學(xué)試劑配制MS培養(yǎng)基母液后再配制培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中蔗糖為 ，瓊脂粉為 。在1 2 1 ‰ 下滅菌 2 0 m i n 后備用。

1.2.6.2培養(yǎng)條件不定芽誘導(dǎo)先暗處 1 0 d 后再移入光照培養(yǎng)。芽增殖、生根、移栽馴化階段均在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度（ 、光照強(qiáng)度 光照時(shí)間 。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用Excel2021軟件整理，后輸入到南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院王紹華編制的STST方差分析軟件，采用單因素隨機(jī)區(qū)組方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析（李春喜等，2023）。

2 結(jié)果與分析

消毒時(shí)間對(duì)丹霞小花苣苔葉片表面消毒效果的影響

以不同的 消毒時(shí)間對(duì)葉片進(jìn)行表面消毒，將葉片接種到培養(yǎng)基上10d后，觀察到葉片存在輕度褐化和重度褐化情況。由表1可知，葉片的污染率、褐化率及成活率差異明顯，其中污染率為 1 . 3 6 % ～ 7 . 5 3 % ，褐化率為 9 . 6 8 % ～ 3 4 . 2 6 % ，成活率為 6 8 . 4 7 % ～ 8 4 . 9 5 % 。葉片消毒時(shí)間為 8 ～ 1 0 m i n 時(shí)污染率下降，但褐化率升高，成活率降低，說(shuō)明消毒時(shí)間大于 8 m i n 時(shí)，對(duì)外植體傷害較大。當(dāng) 消毒時(shí)間為 6 m i n 時(shí)，褐化率最低，為 9 . 6 8 % ，成活率最高，為 8 4 . 9 5 % ，視為丹霞小花苣苔葉片表面消毒適宜的時(shí)間。

2.26-BA與NAA組合對(duì)丹霞小花苣苔葉片不定 芽誘導(dǎo)的影響

將丹霞小花苣苔的葉片接人到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（圖1：C）， 2 0 d 后發(fā)現(xiàn)葉片開始膨大，變厚，卷起（圖1：D），葉片的邊緣或表面先產(chǎn)生芽點(diǎn)并有愈傷組織產(chǎn)生（圖2：A），30d后分化的不定芽逐漸長(zhǎng)大（圖2：B）。由表2可知，9種培養(yǎng)基上葉片不定芽誘導(dǎo)率無(wú)明顯差異且均能達(dá) 100 % ，但葉片誘導(dǎo)的芽數(shù)有差異，平均為 2 1 . 3 4 ～ 3 8 . 3 5 。當(dāng)NAA濃度一定、6-BA濃度范圍為 時(shí)，葉片誘導(dǎo)的平均芽數(shù)有隨著6-BA濃度的升高而升高的趨勢(shì)。其中，當(dāng)6-BA濃度為 時(shí)不定芽誘導(dǎo)效果最好，每葉片誘導(dǎo)的平均芽數(shù)為 3 2 . 2 3 ～ 38.35，顯著高于其他處理且芽生長(zhǎng)良好，無(wú)明顯玻璃化現(xiàn)象。在6-BA 組合的培養(yǎng)基上，葉片誘導(dǎo)的平均芽數(shù)最多，達(dá)到38.35，為適宜的丹霞小花苣苔葉片誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基。

2.36-BA與NAA組合對(duì)丹霞小花苣苔不定芽增殖的影響

將葉片誘導(dǎo)的不定芽（每叢3～5個(gè)芽）接入到12種芽增殖培養(yǎng)基后， 1 0 d 內(nèi)觀察到芽生長(zhǎng)較慢，之后芽生長(zhǎng)速度加快， 2 0 d 后在芽的周圍增殖出較多的不定芽（圖2：C）。由表3可知，12種培養(yǎng)基上不定芽的增殖系數(shù)不同，芽增殖系數(shù)為 1 . 7 7 ～ 7.54。當(dāng)?shù)蜐舛萅AA 與低濃度6-BA（ ）組合時(shí)，芽增殖系數(shù)低且差異不明顯；而當(dāng)?shù)蜐舛?NAA（ 0 . 0 5 ～ 0 . 2 m g ）與較高濃度6-BA（ ）組合時(shí)，芽增殖系數(shù)提高至 3 . 3 5 ～ 7 . 5 4 ，與其他培養(yǎng)基相比，差異明顯。其中，以6-B （20 的培養(yǎng)基中芽增殖系數(shù)最高，為7.54，并且芽生長(zhǎng)良好，無(wú)明顯玻璃化現(xiàn)象，為適宜丹霞小花苣苔不定芽增殖的培養(yǎng)基。綜合得出，當(dāng)NAA濃度為 ，6-BA濃度為1～3 時(shí)，芽的增殖系數(shù)會(huì)隨著6-BA濃度的升高而升高。

2.4不同的生根培養(yǎng)基及栽培基質(zhì)分別對(duì)組培苗生根和移栽成活的影響

將增殖的健壯不定芽接人到生根培養(yǎng)基上后，發(fā)現(xiàn)不定芽生長(zhǎng)良好，20d左右觀察到不定芽基部有不定根出現(xiàn)。由表4可知，3種生根培養(yǎng)基上苗成活率和生根率差異不明顯，均能達(dá) 100 % 。但苗的平均根數(shù)隨著NAA濃度的升高而明顯升高，范圍為 2 2 . 4 1 ～ 2 6 . 2 8 ，根的外觀纖細(xì)，長(zhǎng)度范圍為 0 . 5 ～ 2 . 0 c m 。綜合對(duì)比， ， 為適宜生根培養(yǎng)基（圖2：D）。

選取生根狀況良好的組培苗，經(jīng)過(guò)煉苗處理后，將其移栽至基質(zhì)上進(jìn)行馴化（圖2：E）。從30d后統(tǒng)計(jì)移栽成活率可看出，生根的組培苗移栽到3種基質(zhì)后，組培苗成活率均可達(dá) 100 % ， 9 7 . 7 8 % 以上的植株長(zhǎng)出了新葉，生長(zhǎng)良好（表5）。移栽到3種基質(zhì)中的組培苗外觀無(wú)明顯差異，說(shuō)明喀斯特地貌的腐葉土 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比為 ，泥炭土 + 珍珠巖 + 蛭石（體積比為1 ： 1 ： 1 和珍珠巖 + 蛭石（體積比為 1 ： 1 ）3種基質(zhì)均適合丹霞小花苣苔組培苗的移栽。

表1不同 消毒時(shí)間對(duì)葉片表面消毒效果的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（ ，下同。以葉片褐化面積小于或等于1/3為輕度褐化計(jì)入褐化率，葉片褐化面積大于2/3為重度褐化按致死計(jì)算。

Note：Diffrent lowercase letters after the same column of data indicate statistical differences （ P lt; 0 . 0 5 ） ，the same below.The degree of leafrowningiPrimulinadanxiaensiscanbdividedintoildandsevere，theildbowingwithleafbrowingarealestanorqualto 1/3 is included inthe browningrate，and severe browning withleaf browning area greaterthan 2/3iscalculatedaslethal.

3討論與結(jié)論

3.1外植體的處理和表面消毒

外植體表面處理和消毒能否成功是建立快繁技術(shù)體系的第一步?？嘬奶浦参锶~片通常采用7 5 % 酒精 + 0 . 1 % （204號(hào) 組合進(jìn)行表面消毒，但不同植物消毒的技術(shù)流程不同。楊晨星（2020）使用7 5 % 酒精消毒 3 0 s 及 浸泡 1 0 m i n 對(duì)大巖桐葉片消毒效果最好；張雪蓮（2018）則發(fā)現(xiàn)短莖半蒴苣苔葉片用 消毒 9 m i n 效果最好。本研究使用 對(duì)丹霞小花苣苔葉片進(jìn)行 的表面消毒，通過(guò)綜合考量污染率、褐化率及成活率之間的平衡關(guān)系，得出 6 m i n 為葉片合適的表面消毒時(shí)間，表明丹霞小花苣苔葉片的消毒無(wú)需太長(zhǎng)時(shí)間。這與歐明燭（2023）對(duì)輻花苣苔的葉片使用 7 5 % 酒精消毒 2 0 s 及 0 . 1 % 消毒 5 m i n 的成活率較高的研究結(jié)果相似，但需要注意的是，輻花苣苔的葉片在消毒前需用流水沖洗""，而丹霞小花苣苔的葉片則不能用流水沖洗，僅用清水輕輕洗滌 1 0 m i n 左右即可。若用流水沖洗丹霞小花苣苔的葉片，會(huì)導(dǎo)致接種的葉片發(fā)白或變褐，進(jìn)而影響外植體的正常生長(zhǎng)，這可能與丹霞小花苣苔葉片較嫩且薄，流水沖洗會(huì)損傷其葉肉細(xì)胞有關(guān)，這一點(diǎn)可為苦苣苔植物葉片前期清洗處理提供借鑒。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著"消毒時(shí)間的延長(zhǎng)，污染率并不總是呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，如有時(shí)會(huì)出現(xiàn)消毒 1 0 m i n 的葉片污染率高于消毒 8 m i n 的情況，這可能與葉片的內(nèi)生菌和不同批次取材的葉片有關(guān)。

3.2葉片的分化與不定芽誘導(dǎo)

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類和濃度對(duì)苣苔科植物的葉片分化和植株再生有重要影響。Chen等（2016）發(fā)現(xiàn)，鐘冠唇柱苣苔的葉片在單獨(dú)使用6BA的培養(yǎng)基上能直接再生出不定芽，而在 NAA兩者組合的培養(yǎng)基上則產(chǎn)生愈傷組織。Ouyang等（2016）發(fā)現(xiàn)，單座苣苔葉片在單獨(dú)使用（2號(hào) 或6-BA 培養(yǎng)基上能同時(shí)產(chǎn)生不定芽和體胚。與上述結(jié)果不同的是，本研究發(fā)現(xiàn)丹霞小花苣苔的葉片在 NAA兩者組合的培養(yǎng)基上直接再生不定芽，這與閆海霞等（2019b）發(fā)現(xiàn)貴港報(bào)春苣苔葉片在 IAA組合的培養(yǎng)基上能直接再生的結(jié)果相似，二者均需適宜的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素配合調(diào)控葉片直接再生。由此可見，不同種苦苣苔科植物的葉片再生對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑需求不同，不同的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑可調(diào)控葉片產(chǎn)生不同的再生途徑，出現(xiàn)這些差異的原因除了與葉片自身的差異有關(guān)外，可能與植物內(nèi)源激素的含量和種類有關(guān)（陳勁楓和張俊蓮，2022）。本研究發(fā)現(xiàn)不同在濃度6- 組合的培養(yǎng)基上，丹霞小花苣苔每個(gè)葉片的芽數(shù)存在明顯差異，以較高濃度6 組合的培養(yǎng)基芽數(shù)最多，閆海霞等（2018，2019b）同樣發(fā)現(xiàn)在較高濃度6-BA 組合的培養(yǎng)基上黃花牛耳朵葉片誘導(dǎo)的芽數(shù)最多，4 組合的培養(yǎng)基上貴港報(bào)春苣苔葉片誘導(dǎo)的芽數(shù)最多。由此可見，一定范圍內(nèi)較高濃度的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素組合，提高了葉片誘導(dǎo)的芽數(shù)，可能是較高濃度6-BA與適當(dāng)濃度的生長(zhǎng)素組合提高了苦苣苔科植物葉片不定芽分化的能力。

3.3不定芽的增殖

苦苣苔科植物不定芽的增殖能力是決定其能否實(shí)現(xiàn)大規(guī)模繁殖及有效開發(fā)利用的關(guān)鍵因素，為促進(jìn)芽的增殖，培養(yǎng)基中常添加不同濃度和種類的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素配比。Wang等（2018）

研究發(fā)現(xiàn)，彌勒苣苔的不定芽在低濃度6-BA1 組合的培養(yǎng)基上增殖較好；Li等（2013）研究發(fā)現(xiàn)含低濃度6-BA 0 . 5 m g ? （20 或含低濃度6-BA 的培養(yǎng)基較適合齒葉吊石苣苔不定芽的增殖。與上述研究結(jié)果不同的是，本研究發(fā)現(xiàn)丹霞小花苣苔不定芽在低濃度6-BA（ ）與NAA組合芽增殖系數(shù)較低，較高濃度6-BA（ （20 ）與NAA組合促進(jìn)了芽的增殖，具體為6-BA3 組合的培養(yǎng)基較適合丹霞小花苣苔不定芽的增殖。這一發(fā)現(xiàn)與劉偉和黃勇（2010）關(guān)于吊石苣苔不定芽增殖的研究結(jié)果相一致，同樣發(fā)現(xiàn)使用較高濃度6-BA NAA 組合的培養(yǎng)基能促進(jìn)不定芽增殖。上述結(jié)果表明，在不定芽增殖階段，不同苦苣苔科植物所需的細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例不同，產(chǎn)生這種差異的原因除了與植物種類和基因型有關(guān)外，還與對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的敏感度不同有關(guān)（逯錦春等，2022；武曉云等，2024）。

3.4生根

在苦苣苔科植物組培苗的生根階段，通常選擇MS或1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加不同濃度和種類的NAA、IBA或IAA以優(yōu)化生根效果。Li等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，齒葉吊石苣苔不定芽在含有 或NAA的MS培養(yǎng)基上生根最好，而本研究發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用低濃度NAA就可使丹霞小花苣苔組培苗生根，其中不定芽在含有 的 1 / 2 M S 培養(yǎng)基上生根率無(wú)明顯差異，均能達(dá) 100 % ，這為簡(jiǎn)化苦苣苔科植物組培苗生根提供參考，但隨著生長(zhǎng)素NAA濃度的升高其生根條數(shù)明顯增加，這一結(jié)果與閆海霞等（2018）在黃花牛耳朵不定芽生根以及楊晨星（2020）在非洲紫羅蘭不定芽生根培養(yǎng)上的研究結(jié)果相似，這說(shuō)明一定范圍內(nèi)生長(zhǎng)素NAA濃度的升高有顯著促進(jìn)苦苣苔科植物組培苗生根的作用，原因可能是適宜濃度的生長(zhǎng)素促進(jìn)了根原基細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng)，表現(xiàn)為生根條數(shù)增加（江玲和周燮，2000）。

3.5栽培基質(zhì)

栽培基質(zhì)的選擇對(duì)于組培苗的成活率至關(guān)重要。張琳娜等（2018）研究表明，當(dāng)珍珠巖、蛭石與

表5生根的組培苗移栽

腐殖質(zhì)草炭混合時(shí)，彌勒苣苔組培苗移栽成活率可達(dá) 100 % 。然而，李謙盛等（2016）的研究發(fā)現(xiàn)，珍珠巖和蛭石是否添加腐殖質(zhì)草炭，牛耳朵的組培苗移栽成活率均能達(dá) 100 % 。本研究中，丹霞小花苣苔組培苗在珍珠巖 + 蛭石是否添加有腐殖質(zhì)喀斯特地貌的腐葉土或泥炭土基質(zhì)上均表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)狀態(tài)，移栽成活率均達(dá) 100 % ，這一結(jié)果與李謙盛等（2016）的研究結(jié)果有相似之處，可能與丹霞小花苣苔的生境有關(guān)。該植物生長(zhǎng)在巖石的裂縫中，土層較薄，可能更依賴于土壤的濕度和透氣性，而對(duì)土壤有機(jī)質(zhì)的含量要求相對(duì)較低。因此，在移栽丹霞小花苣苔組培苗時(shí)，可選擇上述3種基質(zhì)中的任一種。

綜上所述，本研究以丹霞小花苣苔的葉切片作為外植體，探究了 表面消毒時(shí)間及植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)其不定芽誘導(dǎo)、芽增殖及生根培養(yǎng)的具體影響，對(duì)比了組培苗在不同移栽基質(zhì)中的生長(zhǎng)表現(xiàn)，并據(jù)此成功建立了丹霞小花苣苔的離體培養(yǎng)和植株再生體系。這一技術(shù)體系為丹霞小花苣苔提供了一種有效的無(wú)性繁殖方法，能夠大量繁殖該物種，從而為丹霞小花苣苔的開發(fā)與利用提供了技術(shù)支撐。

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（責(zé)任編輯 周翠鳴）