[摘要]目的：探討低強(qiáng)度脈沖超聲（Low-intensity pulsed ultrasound，LIPUS）聯(lián)合骨形成蛋白9（Bone morphogenetic protein 9，BMP9）修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow derived mesenchymal stem cells，BMSCs）對牙槽骨缺損的修復(fù)作用。方法：在大鼠上頜第一磨牙近中區(qū)造成牙周骨缺損構(gòu)建牙槽骨缺損大鼠模型，將45只大鼠隨機(jī)平均分為5組，每組9只，即正常組、對照組、超聲治療組、細(xì)胞治療組、聯(lián)合治療組。通過CT掃描評價大鼠牙槽骨再生，通過HE染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠骨缺損修復(fù)程度。利用生物發(fā)光成像在體內(nèi)追蹤BMSCs。結(jié)果：微型CT結(jié)果顯示，與對照組相比，超聲治療組，細(xì)胞治療組，聯(lián)合治療組促進(jìn)了更多的新骨形成、BV、Tb.N增加、Tb.Sp降低，其中聯(lián)合治療組的新骨形成率明顯增加（P＜0.05）；HE染色和Masson染色結(jié)果顯示，在三組治療組中，均可以觀察到結(jié)締組織、新血管形成和鈣沉積物，聯(lián)合治療組中更明顯；免疫組化染色結(jié)果顯示，在三組治療組中，聯(lián)合治療組COL-I 和骨橋蛋白表達(dá)增高更明顯。生物發(fā)光顯像顯示LIPUS聯(lián)合BMP9修飾的BMSCs組的熒光信號明顯多于其他組，有較多的BMSCs定植于牙槽骨缺損區(qū)。結(jié)論：LIPUS聯(lián)合BMP9修飾的BMSCs可以促進(jìn)牙槽骨再生，對牙槽骨缺損修復(fù)的效果更好。

[關(guān)鍵詞]低強(qiáng)度脈沖超聲（LIPUS）；骨形成蛋白9（BMP9）；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）；牙槽骨修復(fù)；聯(lián)合作用

[中圖分類號]R781.42" " [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A" " [文章編號]1008-6455（2025）06-0006-05

Study on the Repair Effect of LIPUS Combined with BMP9 Modified BMSCs on Alveolar Bone Defects in Rats

LIN Lirong， LI Zhenxing

（ Shijiazhuang Medical College， Shijiazhuang 050000， Hebei， China ）

Abstract： Objective" Exploring the repair effect of LIPUS combined withBone morphogenetic protein 9（BMP9）modified Bone marrow derived mesenchymal stem cells（BMSCs）on alveolar bone defects. Methods" A rat model of alveolar bone defect was constructed by creating periodontal bone defects in the mesial area of the first maxillary molar in rats. 45 rats were randomly divided into 5 groups， with 9 rats in each group， namely the normal group：normal group， control group， beyond treatment group， cell therapy group， combination therapy group. Eight weeks after surgery， the rats were euthanized and samples were collected. Evaluate alveolar bone regeneration in rats using CT， and the degree of bone defect repair was observed using HE staining， Masson staining， and immunohistochemical staining. BMSCs were tracked in vivo using bioluminescence imaging. Results" The micro CT results showed that compared with the control group， the treatment group， cell therapy group， and combination therapy group promoted more new bone formation， BV， and Tb N increases， Tb Sp decreased， with a significant increase in new bone formation rate in the combination treatment group （P＜0.05）. The results of HE staining and Masson staining showed that in all three treatment groups， connective tissue， neovascularization， and calcium deposition were observed， with a more pronounced effect in the combination treatment group. The immunohistochemical staining results showed that among the three treatment groups， the combined treatment group had a more significant increase in COL-I and osteopontin expression. Bioluminescence imaging showed that the fluorescence signal of the LIPUS combined with BMP9 modified BMSCs group was significantly higher than that of the other groups， and more BMSCs were implanted in the alveolar bone defect area. Conclusion" Lipus combined with BMP9 modified BMSCs can promote alveolar bone regeneration and have a better effect on repairing alveolar bone defects.

Key words： low-intensity pulsed ultrasound（ LIPUS ）; bone morphogenetic protein 9 （ BMP9 ）; bone marrow derived mesenchymal stem cells（ bmscs ）; alveolar bone repair; combined effect

牙周炎是人類最常見的口腔疾病之一，牙槽骨再生是牙周炎治療中的關(guān)鍵問題[1]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）是維持骨代謝的主要細(xì)胞。BMSCs表現(xiàn)出多系分化能力，包括軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞，其可通過遷移到骨損傷部位對骨缺損進(jìn)行修復(fù)[2]。目前BMSCs已廣泛應(yīng)用于組織修復(fù)和再生醫(yī)學(xué)[3-4]?；贐MSCs的治療，在促進(jìn)牙槽骨和牙周組織再生方面是有效和安全的[5-7]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMPS）在骨骼發(fā)育和骨形成過程中，具有介導(dǎo)促進(jìn)間充質(zhì)BMSCs向成骨細(xì)胞分化的作用[8]。骨形成蛋白9（BMP9）是BMPs家族成員之一，在促進(jìn)成骨分化和骨形成方面發(fā)揮著重要作用[9]。BMP9作為最有效的成骨因子之一，是一種很有前途的骨組織工程細(xì)胞因子[10]。

低強(qiáng)度脈沖超聲（LIPUS）是一種非侵入性治療性超聲，已被美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and drug administration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)用于治療骨折愈合和骨不連[11]。LIPUS治療可促進(jìn)新牙槽骨的形成，加速牙周組織的重建[12-13]。當(dāng)LIPUS與基于BMSCs的治療相結(jié)合時，促進(jìn)脊髓損傷的更好的功能恢復(fù)[14-15]。研究發(fā)現(xiàn)LIPUS可以增強(qiáng)骨折愈合過程中BMSCs的歸巢[16]。近年來，已有研究報道通過誘導(dǎo)BMSCs歸巢進(jìn)而參與組織的修復(fù)和再生[17-18]。然而，目前關(guān)于LIPUS對BMSCs歸巢到牙周組織損傷部位的影響尚未闡明。本研究在大鼠體內(nèi)建立了牙槽骨缺損模型，通過BMSCs靜脈注射，下頜骨暴露于LIPUS治療，探究BMP9修飾的BMSCs聯(lián)合 LIPUS治療對牙槽骨缺損的修復(fù)效果和作用機(jī)制，為臨床上應(yīng)用BMSCs修復(fù)牙槽骨缺損提供理論依據(jù)。

1" 材料和方法

1.1 實驗動物：45只6周齡雄性[體重（180±20）g]Sprague Dawley大鼠購自南通大禹生物技術(shù)有限公司（China）[許可證號：SYXK（蘇）2022-0009]。本研究經(jīng)石家莊醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校動物倫理委員會批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：20220014）。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)：處死兩個月大的大鼠以獲得脛骨[17]。然后用PBS洗滌脛骨，沖洗出骨髓，然后懸浮于含有10%胎牛血清（FBS；Hyclone）、100 U/ml青霉素和100 mg/ml鏈霉素（Hyclone）。第3～5代BMSCs用于以下研究。

1.3 Ad-BMP9轉(zhuǎn)染及形態(tài)學(xué)觀察：取鋪滿瓶底的第3代BMSCs，倒掉原培養(yǎng)液，PBS清洗兩遍倒掉，加入1 ml 0.25%胰酶，37℃下消化約1 min，鏡下觀察大部分細(xì)胞縮小變圓，即可加入3 ml培養(yǎng)基終止消化，巴氏管吹打細(xì)胞，使細(xì)胞完全脫落，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，1 000 r/min，離心3 min，倒掉上清液，加入培養(yǎng)基3 ml，吹打細(xì)胞制懸，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T-25培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)足培養(yǎng)基至4.5 ml，鏡下觀察細(xì)胞80%～90%已伸展貼壁時，加入Ad-BMP9病毒原液5μl，輕輕振蕩混勻，37℃，5%CO2孵箱中培養(yǎng)，8 h后更換新鮮成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，對照組加入Ad-GFP 5μl，空白對照組加入5μl PBS。分別在24 h、48 h鏡下觀察熒光表達(dá)情況，連續(xù)培養(yǎng)7 d。每日在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和狀態(tài)，并記錄。

1.4 BMSCs的分化

1.4.1 成脂分化：將補(bǔ)充有10%FBS、1 mM地塞米松、10 mM胰島素、200 mM吲哚美辛和0.5 mM IBMX（Sigma-Aldrich，St. Louis，MO，USA）用作誘導(dǎo)介質(zhì)。每3 d更新培養(yǎng)基，持續(xù)1周。然后將細(xì)胞用油紅0（Solarbio，Beijing，China）染色并進(jìn)行顯微鏡檢查。

1.4.2 成骨分化：將補(bǔ)充有10%FBS、50μg/ml抗壞血酸（Sigma，St. Louis，MO，USA）、IOO nM地塞米松（Sigma-Aldrich，St. Louis，MO，USA）和5 mM L-甘油磷酸鹽（Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA）用于誘導(dǎo)細(xì)胞分化。每3天更換培養(yǎng)基。3周后，將細(xì)胞用茜素紅（Sigma-Aldrich，St.Louis，MO，USA）染色。

1.5 細(xì)胞標(biāo)記：為了在體內(nèi)追蹤BMSCs，用熒光素酶和EGFP蛋白標(biāo)記BMSCs（將1×105個BMSCs接種于24孔培養(yǎng)板中）。用5μ/ml聚凝胺轉(zhuǎn)染pLenti-CMV-EGFP-連接子-Luc-PGK-Puro慢病毒（購自O(shè)BiO technology，Shanghai，China）24 h，并通過嘌呤霉素選擇。然后使用倒置熒光顯微鏡（Olympus，Japan）檢測轉(zhuǎn)染。

1.6 模型構(gòu)建和干預(yù)方法：大鼠腹腔注射35 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉。在無菌環(huán)境下，在上頜第一磨牙的近中區(qū)域上手術(shù)創(chuàng)建牙周骨缺損[12-13]。具體操作如下：①在上頜第一磨牙的近中區(qū)域和齦溝上制作緩解切口，并且用骨膜分離器分離骨膜。②在鹽水沖洗下通過手鉆以低速（≤1 500 rpm）去除骨組織。③在形成臨界尺寸的缺損（4 mm×5 mm×1 mm）后，在生理鹽水洗滌后，應(yīng)用膠原屏障膜（Bio-Gide?，Geist-lich，Beijing，China）來填充這些缺損。④替換皮瓣并使用可吸收縫線閉合傷口。

將大鼠隨機(jī)分成五組（n=9）。①正常組：正常無缺損；②對照組：注射磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）；③超聲治療組：LIPUS治療；④細(xì)胞治療組：注射Ad-BMP9-BMSCs；⑤聯(lián)合治療組：注射Ad-BMP9-BMSCs并LIPUS聯(lián)合治療。

術(shù)后靜脈注射1×106個EGFP-Luc標(biāo)記的BMSCs或 PBS。在靜脈注射后第1天、第3天、1周、4周追蹤BMSCs。

1.7 LIPUS治療：LIPUS裝置由國家超聲醫(yī)學(xué)工程研究中心（重慶醫(yī)科大學(xué)重慶分校）設(shè)計制造。將超聲探頭與牙周缺損區(qū)域進(jìn)行固定和接觸。將建模區(qū)域暴露于LIPUS（200-μs爆發(fā)正弦波，頻率為1.5 MHz，脈沖重復(fù)頻率為1.0 kHz，強(qiáng)度為30 mW/cm2）。BMSCs/LIPUS組動物缺損區(qū)用LIPUS處理2周，每天20 min。對照組和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組動物缺損面積處理方法相同，LIPUS裝置關(guān)閉。

1.8 CT掃描：8周后在CO2室中處死大鼠。解剖下頜骨并使用CT掃描儀（vivaCT 40，Scanco Medical AG，Bassersdorf，Switzerland）掃描。使用以下掃描儀設(shè)置進(jìn)行掃描：X射線源電壓70 kV，電流114 μA，功率8 W，體素尺寸19 μm。使用Scanco Medical分析軟件生成三維重建。使用Scanco Medical分析軟件在定向的樣品中進(jìn)行骨密度測量。牙冠的第一，第二，第三磨牙是可見的軸向平面。在定向之后，選擇235～1 000的閾值作為用于分析的感興趣區(qū)域。分析從分叉首次出現(xiàn)的切片開始，向頂部進(jìn)行。記錄各組的骨體積（BV）、組織體積（TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）和骨小梁間隔（Tb.Sp）值并取平均值（對于所有CT分析，n=9）。

1.9 組織學(xué)和免疫組織化學(xué)染色：樣本在4%的多聚甲醛中固定48 h，并在石蠟包埋和切片前使用10%的EDTA進(jìn)行脫礦。切片（5μm）然后脫蠟和脫水使用二甲苯和乙醇。蘇木精-伊紅（Hamp;E）染色和馬尾松染色按照生產(chǎn)廠家的說明書（Solarbio，Beijing，China）進(jìn)行。這些切片在BX41顯微鏡下成像（日本奧林巴斯）。用抗骨橋蛋白抗體和抗膠原Ⅰ（Abcam，Cambridge，UK）抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。然后使用DAB試劑盒（ZSGB-BIO，北京，中國）檢測抗體并用蘇木精復(fù)染。使用BX41顯微鏡（Olympus， Japan）獲得圖像。

1.10 生物發(fā)光成像：將大鼠麻醉并在成像前用D-熒光素IP注射。在第1、3、7和28天使用IVIS Lumina Series Ⅲ系統(tǒng)（Perkim Elmer，Waltham，USA）對大鼠成像。

1.11 統(tǒng)計學(xué)分析：采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所有實驗重復(fù)至少三次，結(jié)果表示為（xˉ±s）。通過Student's t檢驗或單因素ANOVA分析數(shù)據(jù)，并通過GraphPad Prism 7.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)顯著性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1 BMSCs的形態(tài)學(xué)表征：48 h后將原代BMSCs附著于培養(yǎng)皿（見圖1A）。第3代BMSCs顯示出均勻的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)（見圖1B）。在成脂誘導(dǎo)中觀察到脂滴，這些脂滴對于油紅O染色是陽性的（見圖1C）。在成骨分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)后形成礦化結(jié)節(jié)。在誘導(dǎo)的BMSCs中觀察到茜素紅的陽性染色（見圖1D）。

2.2 細(xì)胞標(biāo)記：轉(zhuǎn)染后，在嘌呤霉素選擇前后，在BMSCs中均觀察到綠色熒光（見圖2）。

2.3 BMSCs體內(nèi)標(biāo)記：結(jié)果顯示，在正常組、對照組和LIPUS超聲治療組中4周內(nèi)均未觀察到生物發(fā)光信號（見圖3）。在細(xì)胞治療組和聯(lián)合治療組中，在第1天和第3天在下頜骨、心臟或肺處檢測到生物發(fā)光信號，其中信號在心臟或肺區(qū)域較為強(qiáng)烈。在第1周和第4周，聯(lián)合治療組在下頜骨檢測到周信號，其他組中未顯示信號。

2.4 微型CT分析：顯微CT圖像顯示，與對照組相比，超聲治療組、細(xì)胞治療組、聯(lián)合治療組促進(jìn)了更多的新骨形成（見圖4A）。與對照組相比，超聲治療組、細(xì)胞治療組、聯(lián)合治療組BV、Tb.N增加，其中聯(lián)合治療組增加顯著（P＜0.05），見圖B～C。與對照組相比，超聲治療組、細(xì)胞治療組和聯(lián)合治療組的Tb.Sp降低（P＜0.05），見圖4D。Tb.N和Tb.Sp指標(biāo)表明聯(lián)合治療組新骨形成和成熟較早。TV指數(shù)和Tb.Th指數(shù)各組之間無顯著差異（見圖4E～F）。

2.5 LIPUS聯(lián)合BMP9修飾BMSCs在牙槽骨再生的作用：HE染色顯示牙周缺損組缺損區(qū)邊緣有少量新生骨形成，中心區(qū)以纖維連接組織為主。在超聲治療組和細(xì)胞治療組中，可以觀察到一些結(jié)締組織、新血管形成和少量的鈣沉積物。在聯(lián)合治療組中，可以看到更多的結(jié)締組織、新血管形成和鈣沉積物，有利于后續(xù)牙槽骨再生。Masson染色的結(jié)果更能反映骨成熟度，并且結(jié)果與HE染色一致。術(shù)后8周，超聲治療組和細(xì)胞治療組缺損區(qū)可見新生骨組織和鈣沉積物，但少于聯(lián)合治療組。免疫組化染色結(jié)果顯示，超聲治療組、細(xì)胞治療組和聯(lián)合治療組骨缺損區(qū)均可見骨橋蛋白（OPN）陽性細(xì)胞，主要分布于新骨和類骨質(zhì)形成區(qū)。COL-I的免疫組織化學(xué)染色顯示出類似的趨勢。見圖5。

3" 討論

在牙周炎中，細(xì)菌誘導(dǎo)的炎癥總是導(dǎo)致牙槽骨破壞。目前臨床上已采用了多種再生治療策略，如骨移植、引導(dǎo)組織再生和引導(dǎo)骨再生。然而，再生是有限的和不可預(yù)測的?；诩?xì)胞的治療，特別是BMSCs的治療，可增加新生骨量、促進(jìn)血管新生，加快骨質(zhì)修復(fù)，已被報道在促進(jìn)牙槽骨和牙周組織再生方面是有效和安全的[19-20]。有研究表明，BMP9具有促進(jìn)BMSCs分化的功效[21-22]。裘吉雨等[23]研究發(fā)現(xiàn)，Ad-BMP9能促進(jìn)牙周膜細(xì)胞早、晚期成骨分化能力。正如本研究的結(jié)果所顯示的，經(jīng)BMP9誘導(dǎo)后BMSCs能夠分化成脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，這表明了它們在骨修復(fù)和再生方面的潛力。LIPUS已廣泛應(yīng)用于骨折治療、牙周病治療、種植體周圍炎等的治療[24-25]。Azuma Y等[26]報道，在手術(shù)后連續(xù)接受LIPUS治療17～24 d的骨骼中，骨折部位的骨橋形成更廣泛。此外，與未處理的骨骼相比，LIPUS處理的骨骼的硬度顯著增加。Konno M等[27]報道說，在骨損傷后的早期，LIPUS治療可有效加速骨愈合。體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)，LIPUS輻照后，鈣鹽沉積加快、新骨成熟時間縮短且機(jī)械強(qiáng)度增加[28]。有研究表明，LIPUS可能通過機(jī)械效應(yīng)增強(qiáng)基于BMSCs的骨再生，促進(jìn)BMSCs的成骨分化[29]。有實驗證明LIPUS可促進(jìn)BMSCs細(xì)胞歸巢至骨折部位[30]。本研究結(jié)果表明，相比LIPUS和Ad-BMP9-BMSCs單獨治療，聯(lián)合治療組生成更多的新骨且新骨形成和成熟較早，更有利于增強(qiáng)骨形成。生物發(fā)光成像結(jié)果顯示，聯(lián)合治療組出現(xiàn)更高的生物發(fā)光信號，且在1周之后，只有聯(lián)合治療組在下頜骨檢測到生物發(fā)光信號，初步預(yù)測LIPUS可以促進(jìn)BMSCs向牙周缺損區(qū)歸巢。

綜上，Ad-BMP9-BMSCs聯(lián)合LIPUS治療具有促進(jìn)牙槽骨再生的作用，對牙槽骨缺損修復(fù)的效果更好，可能受益于LIPUS增強(qiáng)循環(huán)BMSCs歸巢至損傷部位有關(guān)，從而支持更有效的LIPUS和基于BMSCs的療法的臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化開發(fā)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Hajishengallis G， Chavakis T. Local and systemic mechanisms linking periodontal disease and inflammatory comorbidities [J]. Nat Rev Immunol， 2021，21（7）：426-440.

[2]Pittenger M F， Mackay A M， Beck S C， et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells [J]. Science， 1999，284（5411）：143-147.

[3]Wang X， Wang C， Gou W， et al. The optimal time to inject bone mesenchymal stem cells for fracture healing in a murine model [J]. Stem Cell Res Ther， 2018，9（1）：272.

[4]Liu S， Zhou M， Li J， et al. LIPUS inhibited the expression of inflammatory factors and promoted the osteogenic differentiation capacity of hPDLCs by inhibiting the NF-kappaB signaling pathway[J]. J Periodontal Res， 2020，55（1）：125-140.

[5]周勇，鄭樹燦，邵海賓等.基于TGFβ1/Smad信號通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的機(jī)制研究[J].臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2023，39（11）：643-648.

[6]Liu L， Guo S ， Shi W，et al.Bone marrw mesenchymal stem cell-derivedsmall extracellular vesicles prmote periodontal regeneration[J]. TissueEng Part A， 2021，27（13）：962-976.

[7]Liu Q， Wen Y， Qiu J， et al. Local SDF-1alpha application enhances the therapeutic efficacy of BMSCs transplantation in osteoporotic bone healing [J]. Heliyon， 2020，6（6）：e04347.

[8]Khorsand B， Elangovan S， Hong L， et al. A comparative study of the bone regenerative effect of chemically modified rna encoding BMP-2 or BMP-9 [J]. AAPS J， 2017，19（2）：438-446.

[9]Jiang T， Xia C， Chen X， et al. Melatonin promotes the BMP9-induced osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells by activating the AMPK/beta-catenin signalling pathway [J]. Stem Cell Res Ther， 2019，10（1）：408.

[10]Zhu J H， Liao Y P， Li F S， et al. Wnt11 promotes BMP9-induced osteogenic differentiation through BMPs/Smads and p38 MAPK in mesenchymal stem cells [J]. J Cell Biochem， 2018，119（11）：9462-9473.

[11]Pounder N M， Harrison A J. Low intensity pulsed ultrasound for fracture healing： a review of the clinical evidence and the associated biological mechanism of action [J]. Ultrasonics， 2008，48（4）：330-338.

[12]Wang Y， Qiu Y， Li J， et al. Low-intensity pulsed ultrasound promotes alveolar bone regeneration in a periodontal injury model [J]. Ultrasonics， 2018，90：166-72.

[13]Wang Y， Li J， Qiu Y， et al. Low?intensity pulsed ultrasound promotes periodontal ligament stem cell migration through TWIST1-mediated SDF-1 expression [J]. Int J Mol Med， 2018，42（1）：322-330.

[14]Hormozi Moghaddam Z， Mokhtari-Dizaji M， Nilforoshzadeh M A， et al. Low-intensity ultrasound combined with allogenic adipose-derived mesenchymal stem cells （AdMSCs） in radiation-induced skin injury treatment [J]. Sci Rep， 2020，10（1）：20006.

[15]Ning G Z， Song W Y， Xu H， et al. Bone marrow mesenchymal stem cells stimulated with low-intensity pulsed ultrasound： Better choice of transplantation treatment for spinal cord injury： Treatment for SCI by LIPUS-BMSCs transplantation [J]. CNS Neurosci Ther， 2019，25（4）：496-508.

[16]Wei F Y， Leung K S， Li G， et al. Low intensity pulsed ultrasound enhanced mesenchymal stem cell recruitment through stromal derived factor-1 signaling in fracture healing [J]. PLoS One， 2014，9（9）：e106722.

[17]劉倩.促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢修復(fù)骨質(zhì)疏松大鼠牙槽骨缺損的實驗研究[D].西安：第四軍醫(yī)大學(xué)，2016.

[18]Kim K， Lee C H， Mao J， et al. Anatomically shaped tooth and periodontal regeneration by cellhoming [J].J Dent Res， 89（8）：842-847.

[19]Moreno Sancho F， Leira Y， Orlandi M， et al. Cell-based therapies for alveolar bone and periodontal regeneration： concise review[J]. Stem Cells Transl Med， 2019，8（12）：1286-95.

[20]Yan X Z， Yang F， Jansen J A， et al. Cell-based approaches in periodontal regeneration： a systematic review and meta-analysis of periodontal defect models in animal experimental work[J]. Tissue Eng Part B Rev， 2015，21（5）：411-426.

[21]龍國，程嬌，蔣練.BMP9介導(dǎo)多種干細(xì)胞成骨分化的研究進(jìn)展門[J].醫(yī)學(xué)綜述，2020，26（11）：2099-2105.

[22]成亞琳，趙怡心，張任飛，等.Wnt/B-atenin通路在FSHB增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用研究[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2020，26（12）：1773-1778.

[23]裘吉雨.BMP9轉(zhuǎn)染的HPDLCS與HATCP支架復(fù)合體促進(jìn)牙周骨再生的實驗研究[D].重慶：重慶醫(yī)科大學(xué)，2020.

[24]Carter D R， Fyhrie D P， Whalen R T. Trabecular bone density and loading history：regulation of connective tissue biology by mechanical energy [J]. J Biomech， 1987，20（8）：785-794.

[25]Mayr E， Frankel V， Ruter A. Ultrasound--an alternative healing method fornonunions [J]. Arch Orthop Trauma Surg， 2000，120（1-2）：1-8.

[26]Azuma Y， Ito M， Harada Y， et al. Low-intensity pulsed ultrasound accelerates rat femoral fracture healing by acting on the various cellular reactions in the fracture callus [J]. J Bone Miner Res， 2001，16（4）：671-680.

[27]Konno M， Asano H， Fujii Y， et al. Effects of low-intensity pulsed ultrasound on callus formation： A comparative morphological study [J]. J Tokyo Wom Med Univ， 2017，87（4）：108-116.

[28]Kristiansen T K， Ryaby J P， McCabe J， et al. Accelerated healing of distal radial fractures with the use of specific， low-intensity ultrasound. A multicenter， prospective， randomized， double-blind， placebo-controlled study[J]. J Bone Joint Surg Am， 1997，79（7）：961-973.

[29]Elango J， Robinson J， Zhang J， et al. Collagen peptide upregulates osteoblastogenesis from bone marrow mesenchymal stem cells through MAPK- Runx2[J]. Cells， 2019，8（5）：446.

[30]Kumagai K， Takeuchi R， Ishikawa H， et al. Low-intensity pulsed ultrasound accelerates fracture healing by stimulation of recruitment of both local and circulating osteogenic progenitors [J]. J Orthop Res， 2012，30（9）：1516-1521.

[收稿日期]2024-04-03

本文引用格式：林利榮，李振興.低強(qiáng)度脈沖超聲聯(lián)合BMP9修飾的BMSCs對大鼠牙槽骨缺損修復(fù)效果的研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2025，34（6）：6-11.