摘要：目的探討過度機械應(yīng)力調(diào)控Piezo1通道誘發(fā)小鼠成軟骨細(xì)胞鐵死亡的作用機制。方法選取小鼠ATDC5成軟骨細(xì)胞系進行實驗，使用siRNA-Piezo1干擾質(zhì)粒和Piezo1過表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，給予機械應(yīng)力刺激（MS），構(gòu)建對照組（Control組）、MS組、MS+siRNA-Piezo1組（MS+sh組）和MS+Piezo1過表達組（MS+OV組）。用細(xì)胞增殖和毒性檢測法（CCK-8）檢測各組細(xì)胞增殖活力，透射電鏡觀察線粒體的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，生化檢測氧化應(yīng)激和亞鐵離子（Fe2+）水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測脂質(zhì)活性氧（ROS）水平，蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測溶質(zhì)載體家族7成員11（SLC7A11）、谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）、Ⅱ型膠原蛋白（CollagenⅡ）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-13、蛋白聚糖（Aggrecan）及p53蛋白的表達水平。結(jié)果與Control組比較，MS組細(xì)胞活力下降，F(xiàn)e2+、ROS、丙二醛（MDA）水平升高，還原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）水平降低（均P＜0.05），電鏡示線粒體嵴減少，SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平下降，p53和MMP-13蛋白水平則升高（均P＜0.05）。與MS組比較，MS+sh組的Fe2+、ROS、MDA水平下降，GSH、SOD水平升高（均P＜0.05），SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平升高，MMP-13和p53蛋白水平下降（均P＜0.05）。與MS組比較，MS+OV組的細(xì)胞活力下降，F(xiàn)e2+、ROS、MDA水平升高，GSH、SOD水平降低，SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平下降，MMP-13和p53蛋白水平上升（均P＜0.05）。結(jié)論過度機械應(yīng)力能夠通過Piezo1通道蛋白介導(dǎo)成軟骨細(xì)胞鐵死亡，促進細(xì)胞外基質(zhì)降解。

關(guān)鍵詞：骨關(guān)節(jié)炎；軟骨細(xì)胞；應(yīng)力，物理；鐵死亡；Piezo1

中圖分類號：R684.3文獻標(biāo)志碼：A DOI：10.11958/20241259

The mechanism of excessive mechanical stress modulates Piezo1-mediatedferroptosis in chondrocytes

WU Bin1，LIU Zhaoxiang2，ZHANG Yuehong3，WANG Changyao4△

1 Department of Orthopedics，Qingdao University Linyi People's Hospital，Linyi 276000，China;2 Department of Orthopedics，Yishui Second People's Hospital;3 Department of Second Orthopedics，Dongming People's Hospital;4 Department of JointSurgery，the Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College

△Corresponding Author E-mail：swxg.1@163.com

Abstract：Objective To explore the mechanism of excessive mechanical stress regulated ferroptosis induced by Piezo1 channel in mouse chondrocytes.Methods The experiment was performed on mouse ATDC5 chondrocytes.siRNA-Piezo1 interference plasmid and Piezo1 overexpression plasmid were used to transfect chondrocytes，and mechanical stress stimulation was given.The control group，the mechanical stress stimulation group（MS group），the MS+siRNA-Piezo1 group（MS+sh group）and the MS+Piezo1 overexpression group（MS+OV group）were constructed，respectively.The cell viability，F(xiàn)e2+，ROS levels，the expression of ferroptosis-related proteins SLC7A11 and GPX4，and the expression of CollagenⅡ，MMP-13，Aggrecan and p53 proteins were detected in each group.Results Compared with the control group，the cell viability was decreased in the MS group（P＜0.05）.Levels of Fe2+，reactive oxygen species（ROS）and malondialdehyde（MDA）were increased（P＜0.05）.Levels of reduced glutathione（GSH）and superoxide dismutase（SOD）were decreased（Plt;0.05），and the mitochondrial ridge was decreased detected by transmission electron microscopy.Protein levels of SLC7A11，GPX4，CollagenⅡand Aggrecan were decreased（P＜0.05），while protein levels of p53 and MMP-13 were increased（Plt;0.05）.Compared with the MS group，F(xiàn)e2+，ROS and MDA levels were decreased in the MS+sh group（P＜0.05），GSH andSOD levels were increased（P＜0.05），and protein levels of SLC7A11，CollagenⅡ，GPX4 and Aggrecan were increased（Plt;0.05）.The protein levels of MMP-13 and p53 were decreased（P＜0.05）.Compared with the MS group，cell viability was decreased（P＜0.05），F(xiàn)e2+，ROS and MDA levels were increased（P＜0.05），GSH and SOD levels were decreased（P＜0.05），and protein levels of SLC7A11，CollagenⅡ，GPX4 and Aggrecan were decreased in the MS+OV group（P＜0.05）.Levels of MMP-13 and p53 protein were increased（P＜0.05）.Conclusion Excessive mechanical stress can induce chondrocyte ferroptosis and promote extracellular matrix degradation via Piezo1 channel protein.

Key words：osteoarthritis;chondrocytes;stress，mechanical;ferroptosis;Piezo1

骨性關(guān)節(jié)炎（OA）是一種常見的慢性關(guān)節(jié)退行性疾病，具有較高的發(fā)病率和致殘率。OA以軟骨損傷、軟骨下骨化和骨贅形成等為主要的病理特征［1］。早期OA表現(xiàn)為關(guān)節(jié)疼痛、腫脹，晚期出現(xiàn)不同程度的關(guān)節(jié)畸形、晨僵，嚴(yán)重者可致殘疾。據(jù)統(tǒng)計，全世界OA患者累計約3億人，每年相關(guān)醫(yī)療費用支出超過3 000億美元［2］。隨著人口老齡化和肥胖問題的加劇，OA發(fā)病率與致殘率逐年增加，已成為全世界面臨的重要公共健康問題之一。

大量研究表明，OA的發(fā)病機制主要包括軟骨細(xì)胞死亡、軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解2個方面［3-4］。軟骨細(xì)胞是關(guān)節(jié)軟骨的唯一細(xì)胞類型，對機械應(yīng)力刺激敏感。生理性機械應(yīng)力對維持軟骨細(xì)胞穩(wěn)態(tài)是必需的，而過度機械應(yīng)力負(fù)荷可激發(fā)軟骨細(xì)胞損傷和死亡，至于具體激發(fā)機制和細(xì)胞死亡機制尚不明確［5］。在細(xì)胞死亡事件中，鐵死亡是一種鐵離子依賴性的新型程序性細(xì)胞死亡方式，以脂質(zhì)活性氧（ROS）累積、線粒體皺縮為主要特征。Piezo1作為一種機械敏感性離子通道蛋白，主要分布在軟骨細(xì)胞表面，能夠把機械信號轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)信號，調(diào)控軟骨細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)［6］。最近的研究表明，鐵死亡、Piezo1通道蛋白均與軟骨損傷密切相關(guān)［7-8］。關(guān)閉Piezo1通道蛋白可以起到保護軟骨細(xì)胞的作用［9］。鐵螯合劑可抑制OA軟骨細(xì)胞鐵死亡相關(guān)蛋白的表達，從而減輕軟骨基質(zhì)的降解［10］。目前，關(guān)于機械應(yīng)力調(diào)控Piezo1介導(dǎo)軟骨細(xì)胞鐵死亡的研究仍相對較少。本研究旨在探討過度機械應(yīng)力調(diào)控Piezo1介導(dǎo)軟骨細(xì)胞鐵死亡的作用機制。

1材料與方法

1.1實驗細(xì)胞選取小鼠ATDC5成軟骨細(xì)胞系進行本實驗，購自廣州吉妮歐生物科技有限公司。細(xì)胞培養(yǎng)使用完全培養(yǎng)基，在37℃、5%CO2條件下完全濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 d換液1次。

1.2主要試劑和儀器細(xì)胞完全培養(yǎng)基購自美國iCell公司。細(xì)胞增殖和毒性檢測法（CCK-8）試劑盒、0.25%胰蛋白酶溶液、亞鐵離子（Fe2+）含量檢測試劑盒、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）凝膠制備試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、高效RIPA裂解液購自北京索萊寶科技有限公司。無水乙醇、丙酮購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。電鏡固定液、Western blot一抗稀釋液、二抗稀釋液購自武漢賽維爾生物科技有限公司。Lipofectamine 2000購自美國Invitrogen公司。丙二醛（MDA）、ROS、還原型谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司。PVDF膜購自美國Millipore公司。兔抗小鼠溶質(zhì)載體家族7成員11（SLC7A11）、谷胱甘肽過氧化物酶（GPX）4、膠原蛋白（Collagen）Ⅱ、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）?13、蛋白聚糖（Aggrecan）及p53一抗購自武漢華美生物工程有限公司。羊抗兔IgG-HRP二抗購自英國Abcam公司。多功能酶標(biāo)儀（美國Molecular Devices公司），CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱（美國Thermo Scientific公司），透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司），流式細(xì)胞儀（美國Becton-Dickinson公司），凝膠成像分析系統(tǒng)（美國Bio-Rad公司），機械牽張應(yīng)力加載模型系統(tǒng)（美國Flexcell公司）。

1.3機械應(yīng)力刺激（MS）通過周期性體外細(xì)胞機械牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)對細(xì)胞施加機械應(yīng)力，為培養(yǎng)細(xì)胞創(chuàng)建一個循環(huán)拉伸應(yīng)變的環(huán)境，模擬身體運動過程中的MS。具體操作如下：細(xì)胞接種到預(yù)涂有CollagenⅠ的6孔BioFlex培養(yǎng)板，密度為2×105/孔，暴露于參數(shù)為10%強度、0.5 Hz和1/2正弦波的周期性細(xì)胞機械應(yīng)力下8 h。

1.4細(xì)胞分組和轉(zhuǎn)染siRNA-Piezo1干擾質(zhì)粒和Piezo1過表達質(zhì)粒的構(gòu)建和篩選由上海吉凱生物公司完成。使用Lipofectamine 2000試劑轉(zhuǎn)染細(xì)胞，構(gòu)建對照組（Control組）、MS組、MS+siRNA-Piezo1組（MS+sh組）和MS+Piezo1過表達組（MS+OV組）。細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟：將細(xì)胞預(yù)先接種于6孔板（5×105個/孔），根據(jù)Lipofectamine 2000說明書將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到ATDC5成軟骨細(xì)胞中，48 h收集細(xì)胞用于后續(xù)實驗。

1.5 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活力將對數(shù)生長期細(xì)胞接種于96孔板（3×103/孔），過夜，按照Control組、MS組、MS+sh組、MS+OV組分組情況干預(yù)細(xì)胞24 h，向每孔中加入10μL CCK-8溶液，37℃避光孵育1 h，采用酶標(biāo)儀測450 nm處光密度（OD），計算細(xì)胞活力值。

1.6透射電子顯微鏡觀察線粒體的形態(tài)與結(jié)構(gòu)離心收集細(xì)胞，去培養(yǎng)基加入電鏡固定液，4℃重懸混勻固定2～4 h，瓊脂預(yù)包埋，室溫條件下1%鋨酸固定2 h，丙酮梯度脫水，812包埋劑浸脂，聚合制成透射電子顯微鏡標(biāo)本，超微切片機切割成為超薄切片（80 nm），用醋酸鈾酰和檸檬酸鉛進行雙重染色。透射電鏡觀察線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.7細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激和Fe2+水平測定按照每5×106個細(xì)胞加入1 mL裂解液裂解細(xì)胞，并使用超聲波（功率200 W，超聲3 s，間隔10 s，重復(fù)30次）破碎細(xì)胞，按照檢測試劑盒說明書測定GSH、SOD、MDA和Fe2+水平。

1.8流式細(xì)胞術(shù)檢測脂質(zhì)ROS水平將細(xì)胞接種于6孔板（5×105/孔）中過夜，各組按照相應(yīng)的干預(yù)方式干預(yù)細(xì)胞24 h，去除細(xì)胞培養(yǎng)液，更換為無血清培養(yǎng)基配制的10μmol/L DCFH-DA熒光探針，37℃孵育20 min，PBS洗滌3次，流式細(xì)胞儀進行檢測。使用Flow Jo軟件進行定量分析。

1.9 Western blot檢測蛋白表達水平將細(xì)胞以5×105/孔的密度接種于6孔板中過夜，按照Control組、MS組、MS+sh組、MS+OV組分組情況干預(yù)細(xì)胞24 h，裂解并收集各組細(xì)胞，BCA法檢測蛋白濃度。蛋白樣品經(jīng)10%SDS-PAGE并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，室溫下用5%脫脂奶粉封閉1 h，一抗在4℃下孵育過夜，室溫孵育二抗1 h，蛋白條帶用ECL發(fā)光液顯色，凝膠成像分析系統(tǒng)獲取條帶圖像。

1.10統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。使用Shapiro-Wilk檢驗分析數(shù)據(jù)的分布，正態(tài)分布的數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較用LSD-t法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組細(xì)胞增殖活力比較組間比較：與Control組比較，在相同時間點（24 h、48 h和72 h），MS組、MS+sh組和MS+OV組細(xì)胞增殖活力均降低（Plt;0.05）；與MS組比較，在相同時間點（24 h、48 h和72 h），MS+sh組細(xì)胞增殖活力均升高，而MS+OV組細(xì)胞增殖活力均降低（P＜0.05）。組內(nèi)比較：Control組、MS組和MS+sh組48 h和72 h的細(xì)胞增殖活力相比各自組24 h依次升高（P＜0.05）；而MS+OV組72 h時細(xì)胞增殖活力較24 h和48 h時升高（P＜0.05）。見表1。

2.2各組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)形態(tài)變化Control組線粒體結(jié)構(gòu)正常，線粒體嵴排布密集，呈長條形或橢圓形；與Control組相比，MS+sh組、MS組和MS+OV組線粒體形態(tài)損傷依次加重，表現(xiàn)為線粒體膜發(fā)生皺縮，形態(tài)由長棒形縮為圓形，線粒體嵴明顯減少，MS+sh組、MS組和MS+OV組軟骨細(xì)胞的死亡方式均為鐵死亡。見圖1。

2.3過度機械應(yīng)力對細(xì)胞氧化應(yīng)激和Fe2+水平的影響與Control組相比，MS組的ROS、MDA、Fe2+水平升高，GSH、SOD水平下降（P＜0.05）；與MS組比較，MS+sh組的ROS、MDA、Fe2+水平下降，GSH、SOD水平升高（P＜0.05），MS+OV組的ROS、MDA、Fe2+水平升高，GSH、SOD水平下降（P＜0.05），見表2。

2.4各組細(xì)胞蛋白表達水平比較與Control相比，MS組SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平降低，MMP-13、p53蛋白水平升高（P＜0.05）；與MS組比較，MS+sh組的SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平升高，MMP-13、p53蛋白水平下降（P＜0.05）；與MS組比較，MS+OV組的SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平降低，MMP-13、p53蛋白水平升高（P＜0.05）。見圖2、表3。

3討論

軟骨細(xì)胞是一種機械敏感細(xì)胞，可以將機械信號轉(zhuǎn)化為生化信號，參與調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞的各種生物學(xué)過程［11］。機械應(yīng)力是一把“雙刃劍”，適度的機械應(yīng)力刺激可保護軟骨，維持軟骨穩(wěn)態(tài)，而過度的機械應(yīng)力則是OA發(fā)病的重要危險因素之一［12］。越來越多的證據(jù)表明，軟骨細(xì)胞鐵死亡在OA發(fā)病機制中發(fā)揮關(guān)鍵作用［13-15］。然而，過度的機械應(yīng)力和鐵死亡在OA中的作用機制尚不完全明確。

Piezo1作為一種機械敏感的離子通道，能夠?qū)S轉(zhuǎn)化為電或化學(xué)信號，傳遞至胞內(nèi)引起一系列生化反應(yīng)［16］。有研究表明，Piezo1能夠介導(dǎo)軟骨細(xì)胞受到MS所形成的內(nèi)電流，從而證實Piezo1在軟骨細(xì)胞中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用［17］。另有研究發(fā)現(xiàn)，行全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的OA患者軟骨受損區(qū)的Piezo1蛋白水平顯著升高［18］。以上證據(jù)表明，Piezo1在OA的病理過程中發(fā)揮重要作用。然而，Piezo1與鐵死亡在OA中的關(guān)系尚不清楚。本研究通過在體外成軟骨細(xì)胞中應(yīng)用siRNA-Piezo1和Piezo1過表達以確定Piezo1在細(xì)胞發(fā)生鐵死亡中的作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過度MS能夠降低細(xì)胞的增殖活力，使線粒體形態(tài)發(fā)生損傷；siRNA-Piezo1能夠在過度MS的基礎(chǔ)上提高細(xì)胞的增殖活力，減輕線粒體損傷，而過表達Piezo1將在過度MS的基礎(chǔ)上進一步降低細(xì)胞的增殖活力，加重線粒體損傷。此外，鐵死亡的過程中伴隨著氧化應(yīng)激水平的加劇。本研究發(fā)現(xiàn)，過度MS能夠提高細(xì)胞ROS、MDA的水平，降低GSH、SOD的水平。綜合以上研究結(jié)果說明，過度MS能夠通過Piezo1介導(dǎo)細(xì)胞鐵死亡的發(fā)生。

細(xì)胞鐵死亡過程受到多種蛋白的調(diào)控。SLC7A11作為一種重要的細(xì)胞膜氨基酸轉(zhuǎn)運體，主要通過SLC7A11/GPX4信號通路調(diào)控鐵死亡［19］。GPX4是鐵死亡發(fā)生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，能夠通過消除細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)ROS來抵抗鐵死亡［20］。p53是一種典型的抑癌基因，通過轉(zhuǎn)錄的方式抑制SLC7A11的表達，導(dǎo)致胱氨酸轉(zhuǎn)運障礙，抑制GPX4活性，從而使細(xì)胞對鐵死亡的敏感性增加［21］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，過度機械應(yīng)力刺激能夠使軟骨細(xì)胞鐵死亡通路中的相關(guān)蛋白發(fā)生明顯變化，p53表達水平升高，SLC7A11和GPX4蛋白表達水平降低，這證實了p53/SLC7A11/GPX4信號通路在軟骨細(xì)胞鐵死亡過程中的關(guān)鍵作用。軟骨細(xì)胞作為軟骨唯一的細(xì)胞成分，參與細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的合成。ECM主要由CollagenⅡ和Aggrecan構(gòu)成［22］。MMP-13在ECM降解過程中起到重要的作用［23-24］。然而，Piezo1與ECM降解之間的關(guān)系尚不清楚。本研究結(jié)果表明，過度機械應(yīng)力刺激能夠通過Piezo1通道蛋白使CollagenⅡ和Aggrecan的表達明顯降低，而MMP-13的表達明顯上升，這表明過度機械刺激能夠促進ECM降解。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，過度機械應(yīng)力能夠通過Piezo1通道蛋白介導(dǎo)軟骨細(xì)胞鐵死亡，促進ECM降解，這對理解過度機械應(yīng)力如何導(dǎo)致OA提供了新的理論依據(jù)。

參考文獻

［1］BARNETT R.Osteoarthritis［J］.Lancet，2018，391（10134）：1985.doi：10.1016/S0140-6736（18）31064-X.

［2］ABRAMOFF B，CALDERA F E.Osteoarthritis：pathology，diagnosis，and treatment options［J］.Med Clin North Am，2020，104（2）：293-311.doi：10.1016/j.mcna.2019.10.007.

［3］MOLNAR V，MATI?I?V，KODVANJ I，et al.Cytokines and chemokines involved in osteoarthritis pathogenesis［J］.Int J MolSci，2021，22（17）：9208.doi：10.3390/ijms22179208.

［4］JIANG Y.Osteoarthritis year in review 2021：biology［J］.Osteoarthritis Cartilage，2022，30（2）：207-215.doi：10.1016/j.joca.2021.11.009.

［5］ARGOTE P F，KAPLAN J T，POON A，et al.Chondrocyte viability is lost during high-rate impact loading by transfer of amplified strain，but not stress，to pericellular and cellular regions［J］.Osteoarthritis Cartilage，2019，27（12）：1822-1830.doi：10.1016/j.joca.2019.07.018.

［6］LAI A，COX C D，CHANDRA SEKAR N，et al.Mechanosensing by Piezo1 and its implications for physiology and various pathologies［J］.Biol Rev Camb Philos Soc，2022，97（2）：604-614.doi：10.1111/brv.12814.

［7］LEE W，NIMS R J，SAVADIPOUR A，et al.Inflammatory signaling sensitizes Piezo1 mechanotransduction in articular chondrocytes as a pathogenic feed-forward mechanism in osteoarthritis［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2021，118（13）：e2001611118.doi：10.1073/pnas.2001611118.

［8］孫銘遠(yuǎn)，郭文超，賈慶運，等.機械敏感離子通道蛋白Piezo1在骨關(guān)節(jié)炎中的作用研究進展［J］.中國骨與關(guān)節(jié)損傷雜志，2024，39（5）：496-500.SUN M Y，GUO W C，JIA Q Y，et al.Advances in the role of Piezo1，a mechanosensitive ion channel protein，in osteoarthritis［J］.Chin J Bone Joint Injury，2024，39（5）：496-500.doi：10.7531/j.issn.1672-9935.2024.05.010.

［9］SUN Y，LENG P，GUO P，et al.G protein coupled estrogen receptor attenuates mechanical stress-mediated apoptosis of chondrocyte in osteoarthritis via suppression of Piezo1［J］.Mol Med，2021，27（1）：96.doi：10.1186/s10020-021-00360-w.

［10］YAO X，SUN K，YU S，et al.Chondrocyte ferroptosis contribute to the progression of osteoarthritis［J］.J Orthop Translat，2021，27：33-43.doi：10.1016/j.jot.2020.09.006.

［11］HE M，LU B，OPOKU M，et al.Metformin prevents or delays the development and progression of osteoarthritis：new insight and mechanism of action［J］.Cells，2022，11（19）：3012.doi：10.3390/cells11193012.

［12］ASTEPHEN WILSON J L，KOBSAR D.Osteoarthritis year in review 2020：mechanics［J］.Osteoarthritis Cartilage，2021，29（2）：161-169.doi：10.1016/j.joca.2020.12.009.

［13］YANG J，HU S，BIAN Y，et al.Targeting cell death：pyroptosis，ferroptosis，apoptosis and necroptosis in osteoarthritis［J］.Front Cell Dev Biol，2021，9：789948.doi：10.3389/fcell.2021.789948.

［14］SUN K，HOU L，GUO Z，et al.JNK-JUN-NCOA4 axis contributes to chondrocyte ferroptosis and aggravates osteoarthritis via ferritinophagy［J］.Free Radic Biol Med，2023，200：87-101.doi：10.1016/j.freeradbiomed.2023.03.008.Tianjin Med J，January 2025，Vol.53 No.1

［15］GONG Z，WANG Y，LI L，et al.Cardamonin alleviates chondrocytes inflammation and cartilage degradation of osteoarthritis by inhibiting ferroptosis via p53 pathway［J］.Food Chem Toxicol，2023，174：113644.doi：10.1016/j.fct.2023.113644.

［16］HUANG H，KAMM R D，LEE R T.Cell mechanics and mechanotransduction：pathways，probes，and physiology［J］.Am J Physiol Cell Physiol，2004，287（1）：C1-11.doi：10.1152/ajpcell.00559.2003.

［17］SERVIN-VENCES M R，MORONI M，LEWIN G R，et al.Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes［J］.Elife，2017，6：e21074.doi：10.7554/eLife.21074.

［18］REN X，ZHUANG H，LI B，et al.Gsmtx4 alleviated osteoarthritis through Piezo1/Calcineurin/NFAT1 signaling axis under excessive mechanical strain［J］.Int J Mol Sci，2023，24（4）：4022.doi：10.3390/ijms24044022.

［19］LI P，YU J，HUANG F，et al.SLC7A11-associated ferroptosis in acute injury diseases：mechanisms and strategies［J］.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2023，27（10）：4386-4398.doi：10.26355/eurrev_202305_32444.

［20］BERSUKER K，HENDRICKS J M，LI Z，et al.The CoQ oxidoreductase FSP1 acts parallel to GPX4 to inhibit ferroptosis［J］.Nature，2019，575（7784）：688-692.doi：10.1038/s41586-019-1705-2.

［21］XU R，WANG W，ZHANG W.Ferroptosis and the bidirectional regulatory factor p53［J］.Cell Death Discov，2023，9（1）：197.doi：10.1038/s41420-023-01517-8.

［22］劉平舉，唐魁韓，孫立，等.龍膽苦苷對骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的影響［J］.世界中醫(yī)藥，2024，19（7）：957-961.LIU P J，TANG K H，SUN L，et al.Effect of gentiopicroside on extracellular matrix of cartilage cells in osteoarthritis［J］.World Chin Med，2024，19（7）：957-961.doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2024.07.008.

［23］WANG M，SAMPSON E R，JIN H，et al.MMP13 is a critical target gene during the progression of osteoarthritis［J］.Arthritis Res Ther，2013，15（1）：R5.doi：10.1186/ar4133.

［24］張春虹，黃洪超，劉越，等.基于RNA測序和生物信息學(xué)分析鑒定椎旁肌退變中關(guān)鍵的鐵死亡基因［J］.天津醫(yī)藥，2024，52（9）：991-995.ZHANG C H，HUANG H C，LIU Y，et al.Identification of key ferroptosis genes in paraspinal muscle degeneration based on RNA sequencing and bioinformatics analysis［J］.Tianjin Med J，2024，52（9）：991-995.doi：10.11958/20240587.

（2024-09-03收稿2024-11-03修回）

（本文編輯李國琪）