摘""要：金釵石斛具有較高的觀賞價(jià)值，是春石斛雜交品種群的重要親本之一，為探索金釵石斛花響應(yīng)高溫脅迫的生理和分子機(jī)制，本研究結(jié)合水勢、細(xì)胞膜通透性監(jiān)測、乙烯相關(guān)化合物含量測定，以及轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析，以36"℃高溫脅迫5、10、24"h為處理組，常溫培養(yǎng)為對(duì)照組，研究36"℃下金釵石斛花的生理特性，分析其對(duì)高溫的響應(yīng)轉(zhuǎn)錄組特征。結(jié)果表明：36"℃高溫脅迫在24"h內(nèi)對(duì)金釵石斛花水分狀況和細(xì)胞膜通透性幾乎沒有影響，3個(gè)高溫處理組的金釵石斛花乙烯前體（ACC）含量與對(duì)照組（Dno-CK）相比均顯著增加；高溫處理5"h與常溫對(duì)照組（Dno-CK"vs"Dno-5h）、高溫處理10"h與常溫對(duì)照組（Dno-CK"vs"Dno-10h）、高溫處理24"h與常溫對(duì)照組（Dno-CK"vs"Dno-24h）3個(gè)比較組的差異基因分別為25"204、25"528、26"878個(gè)，上調(diào)表達(dá)與下調(diào)表達(dá)的基因量約為1∶1，隨著高溫脅迫時(shí)間的延長，金釵石斛花的差異表達(dá)的基因總數(shù)逐漸上升。KEGG富集分析結(jié)果表明，3個(gè)比較組差異基因均富集到單萜生物合成通路，說明高溫促進(jìn)金釵石斛花揮發(fā)性萜類化合物的合成。GO功能富集分析結(jié)果表明，金釵石斛花受高溫脅迫大部分差異基因富集到遺傳信息處理途徑、代謝途徑相關(guān)的通路，在核苷酸切除修復(fù)、淀粉和蔗糖代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工3條通路中差異基因數(shù)量最多，說明高溫激發(fā)金釵石斛花提高各類代謝活動(dòng)響應(yīng)熱脅迫。對(duì)差異表達(dá)基因中熱激蛋白基因（HSP）篩選發(fā)現(xiàn)，金釵石斛花的HSP基因大量上調(diào)表達(dá)響應(yīng)高溫脅迫，金釵石斛花在24"h內(nèi)響應(yīng)高溫脅迫的HSP基因主要是HSP20基因，其次是HSP90基因。金釵石斛花的熱響應(yīng)基因的進(jìn)一步研究可針對(duì)HSP20基因和HSP90基因。本研究結(jié)果可為石斛耐熱育種研究提供參考，為耐高溫春石斛品系的培育提供理論支持。

關(guān)鍵詞：金釵石斛；高溫脅迫；生理特性；轉(zhuǎn)錄組分析；熱激蛋白中圖分類號(hào)：S567.239""""""文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Physiological"and"Transcriptome"Response"Analysis"of"Dendrobium"nobile"Flowers"under"High"Temperature"Stress

MENG"Hongxia1，2，"LI"Jiawei1，2*，"GONG"Jianying3，"WANG"Huaxin3

1."College"of"Forestry，"Guangxi"University"/"Guangxi"Key"Laboratory"of"Forest"Ecology"and"Conservation，"Nanning，"Guangxi""530004，"China;"2."State"Key"Laboratory"for"Conservation"and"Utilization"of"Subtropical"Agro-bioresources，"College"of"Forestry，"Guangxi"University，"Nanning，"Guangxi"530004，"China;"3."Guangxi"Forestry"Research"Institute，"Nanning，"Guangxi"530002，"China

Abstract："Dendrobium"nobile"has"a"high"ornamental"value"and"is"one"of"the"important"parental"plants"in"the"hybridization"group"of"Dendrobium."To"explore"the"physiological"and"molecular"mechanisms"of"D."nobile"flowers"in"response"to"high-temperature"stress，"this"study"combined"water"potential，"cell"membrane"permeability"monitoring，"ethylene-related"compound"content"determination，"and"transcriptome"analysis."Treatment"groups"were"subjected"to"36"℃"high-tempe rat ure"stress"for"5"h，"10"h"and"24"h，"with"a"normal"temperature"culture"as"the"control."The"physiological"characteristics"of""D."nobile"flowers"under"36"℃"and"the"transcriptome"response"to"high"temperature"were"studied."The"results"shoed"that"36"℃"high-temperature"stress"had"almost"no"effect"on"the"water"status"and"cell"membrane"permeability"of"D."nobile"flowers"within"24h."The"content"of"ethylene"precursor"（ACC）"in"the"flowers"significantly"increased"in"all"three"high-temperature"treatment"groups"compared"to"the"control"（Dno-CK）."The"number"of"differentially"expressed"genes"between"the"5"h"high-temperature"treatment"and"the"control"group"（Dno-CK"vs"Dno-5h），"the"10"h"high-temperature"treatment"and"the"control"（Dno-CK"vs"Dno-10h），"and"the"24"h"high-temperature"treatment"and"the"control"（Dno-CK"vs"Dno-24h）"was"25"204，"25"528"and"26"878，"respectively，"with"the"number"of"genes"up-and"downregulated"was"approximately"1∶1."As"the"duration"of"high-temperature"stress"increased，"the"total"number"of"differentially"expressed"genes"in"D."nobile"flowers"gradually"rose."KEGG"enrichment"analysis"showed"that"the"differential"genes"of"the"three"comparison"groups"were"enriched"tonbsp;the"monoterpene"biosynthesis"pathway，"indicating"that"high"temperature"promoted"the"synthesis"of"volatile"terpenoids"in"D."nobile."Functional"enrichment"analysis"indicated"that"most"of"the"differentially"ex-pressed"genes"in"response"to"high-temperature"stress"were"enriched"in"pathways"related"to"genetic"information"processing"and"metabolic"pathways，"with"the"highest"number"of"differential"genes"in"the"nucleotide"excision"repair，"starch"and"sucrose"metabolism，"and"protein"processing"in"the"endoplasmic"reticulum"pathways."This"suggests"that"high"temperature"stimulates"D."nobile"flowers"to"enhance"various"metabolic"activities"in"response"to"heat"stress."Screening"of"differentially"expressed"genes"revealed"that"heat"shock"protein"（HSP）"genes"in"D."nobile"flowers"were"significantly"up-regulated"in"response"to"high-temperature"stress."The"HSP"genes"responding"to"high-temperature"stress"within"24"h"in"D."nobile"flowers"were"primarily"the"HSP20"genes，"followed"by"the"HSP90"genes."Further"research"on"the"heat"re-sponse"genes"of"D."nobile"flowers"can"focus"on"the"HSP20"and"HSP90"genes."This"study"on"the"physiological"and"transcriptome"response"of"""""D."nobile"flowers"to"high-temperature"stress"would"provide"a"reference"for"heat-tolerant"breeding"research"and"theoretical"support"for"the"cultivation"of"heat-resistant"D."varieties.

Keywords："Dendrobium"nobile;"high"temperature"stress;"physiological"property;"transcriptome"analysis;"heat"shock"protein

DOI："10.3969/j.issn.1000-2561.2025.02.003

蘭科石斛屬（Dendrobium）園藝種是盆花與切花中的名貴類群，可分為春石斛和秋石斛兩類雜交品種群。春石斛是以原產(chǎn)于東亞低緯度高海拔地區(qū)的落葉種類為親本，主要親本包括原產(chǎn)于中國的金釵石斛（D."nobile）。金釵石斛性喜溫暖濕潤，生于山地林中樹干上或山谷巖石上，目前在中國廣西、湖北、貴州、云南、西藏等地區(qū)均有分布[1]?；ㄏ憧梢栽鰪?qiáng)觀賞植物的美學(xué)特性，在植物的繁殖過程中起著重要作用，金釵石斛花香輕清，具有較高觀賞價(jià)值的同時(shí)還可以用于鎮(zhèn)靜解郁、抗炎等[2]。金釵石斛生境的特殊性導(dǎo)致其生長發(fā)育容易受到各種環(huán)境因子的影響，高溫便是其中之一。目前針對(duì)植物高溫脅迫的研究主要集中在植物營養(yǎng)器官的形態(tài)、生理生化特性、光合作用與呼吸作用、分子調(diào)節(jié)機(jī)制等方面[3]，對(duì)于花器官的直接關(guān)注較少。

植物水分生理狀態(tài)可以通過植物器官的水勢直接反映，植物在面臨脅迫時(shí)水勢變化較為敏感，大部分植物通過降低水勢應(yīng)對(duì)脅迫，如景天植物在低鹽與高鹽脅迫下葉片水勢均呈下降趨勢[4]，新疆大葉苜蓿在輕度與重度水分脅迫下葉片水勢均呈下降趨勢[5]。也有部分植物如豬毛菜采用升高葉水勢的方式適應(yīng)脅迫環(huán)境[6]。高溫脅迫會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜受損，內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡，電導(dǎo)率可以在一定程度上反映其受損程度。一般情況下，耐熱性強(qiáng)的植株細(xì)胞膜穩(wěn)定性高于耐熱性差的植株，植物遭受溫度脅迫的程度與電導(dǎo)率大小呈正比關(guān)系[7-8]。氣態(tài)植物激素乙烯參與植物對(duì)脅迫環(huán)境的響應(yīng)，如40"℃高溫脅迫下黑油冬白菜在48"h內(nèi)乙烯含量呈直線上升狀態(tài)[9]。乙烯的合成主要由2種特定的酶促過程完成，ACC合酶（ACS）將底物轉(zhuǎn)化為ACC后，氧化酶（ACO）將ACC轉(zhuǎn)化為乙烯，研究表明，ACC（乙烯前體）預(yù)處理可以提高擬南芥在40"℃下的存活率，減少氧化損傷，并誘導(dǎo)其耐熱性[10-11]。

高溫脅迫啟動(dòng)各種代謝途徑，目前已有大量與響應(yīng)高溫脅迫高度相關(guān)的途徑被鑒別，如谷胱甘肽代謝途徑（glutathione"metabolism"pathways）、光合作用-天線蛋白代謝通路（photosyn thetic-an t enna"protein"metabolism"pathway）、葉綠素代謝通路（the"chlorophyll"metabolism"pathway）、碳代謝途徑（carbon"metabolic"pathways）、單萜類生物合成（monoterpene"class"biosynthesis）等[12-15]。處于高溫脅迫的植物通過各種熱響應(yīng)基因的表達(dá)適應(yīng)脅迫環(huán)境，近年研究發(fā)現(xiàn)，熱激蛋白（heat"shock"proteins，"HSP）在植物遭受高溫脅迫過程中大量表達(dá)，如火龍果在40"℃高溫脅迫下處理5"h后HSP21基因開始大量上調(diào)表達(dá)[16]。月季RcHSP18.1基因常溫下不表達(dá)，受到46"℃高溫脅迫2.5"h內(nèi)大量表達(dá)[17]。三棱蝦脊蘭在高溫脅迫后的差異基因中鑒定到XTH、HSP等基因家族，且脅迫后HSP20、HSP40和HSP70基因全部上調(diào)表達(dá)[18]。在42"℃高溫脅迫處理6"h內(nèi)，黃瓜HSP20、HSP70和HSP90基因也全部上調(diào)表達(dá)[19]。高溫脅迫會(huì)導(dǎo)致生物體中的蛋白質(zhì)變性，HSP作為分子伴侶，協(xié)助蛋白質(zhì)復(fù)性、穩(wěn)定、細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和降解，防止受損蛋白質(zhì)的積累，維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性[20-21]。

前人針對(duì)石斛高溫脅迫分子機(jī)制的相關(guān)研究表明，翅萼石斛花在40"℃高溫脅迫3"h后有82個(gè)HSP基因明顯上調(diào)表達(dá)[22]；鐵皮石斛經(jīng)歷35"℃高溫脅迫后，與跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能相關(guān)的基因均下調(diào)表達(dá)，推測高溫脅迫會(huì)降低石斛的質(zhì)膜轉(zhuǎn)運(yùn)能力[23]；40"℃高溫脅迫1"h后，鼓槌石斛花中表達(dá)量最高的10個(gè)基因均為HSP基因[24]。目前有關(guān)金釵石斛高溫脅迫轉(zhuǎn)錄組響應(yīng)分析的相關(guān)研究較少，基于前人對(duì)石斛屬植物高溫脅迫的研究，本研究以金釵石斛作為試驗(yàn)材料，常溫下的植株作為對(duì)照組，利用人工氣候箱進(jìn)行36"℃高溫處理5、10、24"h，利用RNA-seq技術(shù)對(duì)處理后的金釵石斛花被進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法測定花被乙烯類激素含量，同時(shí)測定水勢、電導(dǎo)率參數(shù)。通過解讀金釵石斛高溫脅迫生理響應(yīng)及轉(zhuǎn)錄組響應(yīng)，以期為金釵石斛的耐高溫品種選育提供科學(xué)依據(jù)。

1""材料與方法

1.1""材料

供試材料為金釵石斛（圖1），采自廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，于花期（2024年4月）選取長勢一致且健康的12株石斛進(jìn)行試驗(yàn)。高溫處理：在花朵完全展開時(shí)將植株放入人工氣候箱，設(shè)置36"℃高溫5"h（Dno-5h）、10"h（Dno-10h）、24"h（Dno-24h）3組處理，光照12"h/d。常溫培養(yǎng)（24～26"℃）的金釵石斛植株作為對(duì)照（Dno-CK），每個(gè)處理3株金釵石斛。各處理結(jié)束后采集花朵的花瓣放入50"mL離心管中，液氮速凍6～8"min，于?80"℃冰箱中保存，用于后續(xù)轉(zhuǎn)錄組測序及乙烯類激素含量測定。

1.2""方法

1.2.1""花朵水勢及電導(dǎo)率測定""對(duì)照組（Dno-"CK）采集常溫下的花朵，高溫處理組（Dno-5h、Dno-10h、Dno-24h）在處理結(jié)束后將植株拿出人工氣候箱后，迅速采集測定?；ǘ渌畡莶捎脡毫菟畡輧x（PMS，"Corvallis，Oregon，USA）測定，花朵電導(dǎo)率采用電導(dǎo)率儀（DDSJ-319L型）測定，每個(gè)處理在3株金釵石斛上各自采集1朵花朵測定。

1.2.2""乙烯類激素含量測定""采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）測定，研磨Dno-CK、Dno-5h、Dno-10h、Dno-24h四個(gè)處理的樣品后加入內(nèi)標(biāo)混合溶液、提取劑，離心后80%甲醇溶液復(fù)溶，過濾，置于樣瓶里。設(shè)置液相條件和質(zhì)譜條件提取代謝物采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，采用Analyst"1.6.3軟件和MultiQuant"3.0.3軟件處理質(zhì)譜數(shù)據(jù)，繪制激素的標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算其含量。

1.2.3""轉(zhuǎn)錄組測序""（1）RNA提取、cDNA文庫構(gòu)建及測序。采用乙醇沉淀法和CTAB-"PBIOZOL提取試驗(yàn)樣本總RNA，使用Qubit熒光定量儀和Qsep400高通量生物片段分析儀對(duì)總RNA進(jìn)行鑒定和定量。cDNA文庫構(gòu)建步驟主要包括：富集mRNA，以小片段mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄生成第一鏈cDNA并合成第二鏈cDNA，對(duì)雙鏈cDNA進(jìn)行測序接頭連接后獲取250～350"bp的插入片段的文庫，經(jīng)PCR擴(kuò)增后構(gòu)建完成文庫。庫檢合格后進(jìn)行Illumina測序。

（2）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)處理。使用fastp對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行過濾得到clean"reads，轉(zhuǎn)錄本組裝使用Trinity軟件完成，聚類去冗余由Corset軟件完成。利用DIAMOND軟件在KEGG、NR、Swiss-Prot、GO、COG/KOG、Trembl數(shù)據(jù)庫中對(duì)去冗余后的轉(zhuǎn)錄本序列進(jìn)行注釋分析。

（3）差異表達(dá)基因分析。使用RSEM軟件計(jì)算轉(zhuǎn)錄本的FPKM值，以此定量基因表達(dá)水平。使用DESeq"2分析Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三組之間的差異表達(dá)基因（DEGs），差異基因的篩選條件為|log2"（Fold"Change）|≥1，且FDRlt;0.05。基于超幾何檢驗(yàn)進(jìn)行富集分析，KEGG富集分析以Pathway為單位進(jìn)行超幾何分布檢驗(yàn)，GO富集分析則基于GO-term進(jìn)行。

1.2.4""揮發(fā)性成分分析""采用HS-SPME-GC-MS進(jìn)行揮發(fā)性成分分析。選擇3株生長良好的金釵石斛于盛花期采集花朵，每株采集2朵花，保存于?80"℃冰箱中。樣品進(jìn)行液氮研磨，每個(gè)樣本稱取約500"mg于頂空瓶中，加入飽和NaCl溶液和20"μL內(nèi)標(biāo)溶液，設(shè)置HS-SPME萃取條件、色譜條件和質(zhì)譜條件，進(jìn)行樣本萃取及GC-MS分析。通過MassHunter軟件處理質(zhì)譜分析后的原始數(shù)據(jù)，對(duì)樣本的代謝物進(jìn)行質(zhì)譜定性定量分析，根據(jù)離子流峰面積歸一化法計(jì)算各組分在總揮發(fā)物中的相對(duì)含量。

1.3""數(shù)據(jù)處理

使用Excel"2016軟件處理數(shù)據(jù)，使用SPSS"26.0軟件評(píng)估差異的顯著性，使用Origin"2021軟

件制圖。

2""結(jié)果與分析

2.1""高溫脅迫下金釵石斛花朵生理響應(yīng)

在電導(dǎo)率方面，3個(gè)高溫組處理的花朵電導(dǎo)率與對(duì)照組基本一致，保持在4.29～4.95"μs/cm，無顯著性差異（圖2A），說明36"℃高溫脅迫在24"h內(nèi)對(duì)金釵石斛花朵細(xì)胞膜幾乎無影響。在水勢方面，3個(gè)高溫組處理的花水勢基本一致，保持在?1.36～?1.34"MPa，與對(duì)照組相比略有降低但無顯著性差異（圖2B），說明36"℃高溫脅迫在24"h內(nèi)對(duì)金釵石斛花朵水勢的影響不大。乙烯前體（ACC）含量，與Dno-CK相比，Dno-5h增加了76.9%，差異顯著；Dno-10h增加了17.9%，差異顯著；Dno-24h增加了92.9%，差異顯著。金釵石斛在36"℃高溫脅迫24"h時(shí)ACC變化量達(dá)到最高，增長量最低點(diǎn)則在脅迫10"h時(shí)（圖2C）。

2.2""測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估

本研究對(duì)4個(gè)處理結(jié)束后的金釵石斛花朵進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，得到12組金釵石斛花朵的原始數(shù)據(jù)和質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)（表1）。其中，過濾后獲得的clean"reads量共102.17"Gb，占原始數(shù)據(jù)（raw"reads）的98.01%以上。12組金釵石斛花朵的GC含量均大于45%，Q30堿基百分比保持在95%以上，Q20堿基百分比則保持在98%以上。表明本試驗(yàn)的轉(zhuǎn)錄組測序質(zhì)量較好，能滿足基因功能注釋和分析要求。

2.3""差異表達(dá)基因篩選和分析

3個(gè)高溫處理組與對(duì)照組Dno-CK差異表達(dá)基因的篩選結(jié)果顯示（圖3），金釵石斛經(jīng)過5"h的36"℃高溫脅迫后共差異表達(dá)25"204個(gè)基因，包括11"703個(gè)上調(diào)表達(dá)基因和13"501個(gè)下調(diào)表達(dá)基因；經(jīng)過10"h的36"℃高溫脅迫后共差異表達(dá)25"528個(gè)基因，表達(dá)上調(diào)和下調(diào)的差異基因分別為12"532個(gè)和12"996個(gè)；在24"h的36"℃高溫脅迫后，金釵石斛差異表達(dá)的基因總數(shù)有26"878個(gè)，包括13"876個(gè)上調(diào)表達(dá)基因和13"002個(gè)下調(diào)表達(dá)基因。隨著高溫脅迫時(shí)間的延長，金釵石斛差異表達(dá)的基因總數(shù)逐漸上升。與5"h相比，10"h高溫脅迫多了324個(gè)差異表達(dá)基因，而經(jīng)過24"h高溫脅迫的金釵石斛比Dno-5h、Dno-10h分別多了1674個(gè)、1350個(gè)差異表達(dá)基因。說明金釵石斛遭受高溫脅迫5"h后差異基因數(shù)量有較大程度上升，且在熱處理24"h的差異基因數(shù)量保持持續(xù)增長的狀態(tài)。

2.4""差異表達(dá)基因KEGG分析

對(duì)高溫處理組與對(duì)照組的差異表達(dá)基因進(jìn)行KEGG信號(hào)通路富集分析（圖4），結(jié)果表明，Dno-"CK"vs"Dno-5h組富集最顯著的20條通路中差異基因數(shù)量排名前5的通路主要包括剪接體（ko03040）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工（ko04141）、RNA聚合酶（ko03020）、核苷酸切除修復(fù)（ko03420）、淀粉和蔗糖代謝（ko00500）；Dno-CK"vs"Dno-10h組富集的通路主要包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工（ko04141）、淀粉和蔗糖代謝（ko00500）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（ko04075）、剪接體（ko03040）、次生代謝物的生物合成（ko01110）；Dno-CK"vs"Dno-24h組富集的通路主要包括次生代謝物的生物合成（ko01110）、淀粉和蔗糖代謝（ko00500）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（ko04075）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工（ko04141）、核苷酸切除修復(fù)（ko03420）。

此外，Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-"10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三組中差異表達(dá)基因顯著富集的相同通路有8個(gè)，分別是歸屬于遺傳信息處理過程的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工（ko04141）、核苷酸切除修復(fù)（ko03420）通路；歸屬于代謝過程的角質(zhì)、木栓質(zhì)和蠟生物合成（ko00073）、牛磺酸和低?；撬岬拇x（ko00430）、氰氨基酸代紅色方框代表3個(gè)比較組合差異表達(dá)基因顯著富集的相同通路。

謝（ko00460）、淀粉和蔗糖代謝（ko00500）、脂肪酸降解（ko00071）、單萜生物合成（ko00902）通路。說明金釵石斛在經(jīng)高溫脅迫5～24"h的過程中，遺傳信息處理途徑和代謝途徑發(fā)生了較大變化，其中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工（ko04141）、核苷酸切除修復(fù)（ko03420）、淀粉和蔗糖代謝（ko00500）3條通路富集程度較顯著，且差異基因數(shù)量較多，說明這3條信號(hào)通路可能在金釵石斛響應(yīng)高溫脅迫上具有重要作用。

2.5""差異表達(dá)基因GO富集分析

對(duì)高溫處理組與對(duì)照組的差異表達(dá)基因進(jìn)行GO富集分析（圖5）發(fā)現(xiàn)，Dno-CK"vs"Dno-5h組的差異表達(dá)基因GO富集有14"696個(gè)基因，Dno-CK"vs"Dno-10h組有14"865個(gè)基因，Dno-CK"vs"Dno-24h組有15"654個(gè)基因。分別取3組富集最顯著的9個(gè)GO"term進(jìn)行分析，結(jié)果表明，Dno-CK"vs"Dno-5h組的差異表達(dá)基因主要富集于2-羥戊二酸依賴性雙加氧酶活性、伴侶蛋白結(jié)合、綠葉揮發(fā)性物質(zhì)生物合成過程、sm樣蛋白家族復(fù)合物、二十碳烷酸代謝過程、解剖結(jié)構(gòu)形態(tài)發(fā)生的調(diào)控、剪接體snRNP復(fù)合物、細(xì)胞對(duì)熱的響應(yīng)和生長素穩(wěn)態(tài)。Dno-CK"vs"Dno-10h組的差異表達(dá)基因主要富集于果膠分解代謝過程、酶抑制劑活性、伴侶蛋白結(jié)合、綠葉揮發(fā)性物質(zhì)生物合成過程、二十碳烷酸代謝過程、天冬氨酸酯酶活性、L-甲硫氨酸從甲基硫代腺苷的回收、氨基酸回收和L-甲硫氨酸回收。Dno-CK"vs"Dno-24h組的差異表達(dá)基因主要富集于氧化還原酶活性、綠葉揮發(fā)性物質(zhì)生物合成過程、黃酮類生物合成過程、外肽酶活性、絲氨酸型外肽酶活性、絲氨酸型羧基肽酶活性、羧肽酶活性、二十碳烷酸代謝過程和脂氧酶途徑。此外，Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三組中差異表達(dá)基因顯著富集的相同通路為綠葉揮發(fā)性物質(zhì)生物合成過程和二十碳烷酸代謝過程。

2.6""熱激蛋白基因分析

熱激蛋白（heat"shock"proteins，"HSP）是在高溫下合成的重要蛋白質(zhì)，已被證明參與對(duì)環(huán)境壓力的各種反應(yīng)并調(diào)節(jié)許多發(fā)育過程。在高溫處理組與對(duì)照組的差異表達(dá)基因功能注釋列表中篩選紅色方框代表3個(gè)比較組合差異表達(dá)基因顯著富集的相同通路。

熱激蛋白表達(dá)相關(guān)基因，結(jié)果表明（附表1），Dno-CK"vs"Dno-5h組差異表達(dá)基因中有71個(gè)上調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（48個(gè)HSP20基因，23個(gè)HSP90基因）和8個(gè)下調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（4個(gè)HSP20基因，4個(gè)HSP90基因）；Dno-CK"vs"Dno-10h組差異表達(dá)基因中有78個(gè)上調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（49個(gè)HSP20基因，1個(gè)HSP70基因，28個(gè)HSP90基因）和9個(gè)下調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（7個(gè)HSP20基因，2個(gè)HSP90基因）；Dno-CK"vs"Dno-24h組差異表達(dá)基因中有69個(gè)上調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（41個(gè)HSP20基因，28個(gè)HSP90基因）和6個(gè)下調(diào)表達(dá)的熱激蛋白基因（5個(gè)HSP20基因，1個(gè)HSP90基因）。說明金釵石斛熱激蛋白基因大量上調(diào)表達(dá)響應(yīng)高溫脅迫且表達(dá)的熱激蛋白基因以HSP20為主。

對(duì)Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三組中共同上調(diào)表達(dá)的49個(gè)熱激蛋白基因進(jìn)行分析，結(jié)果如圖6所示。有28個(gè)基因在5～24"h的高溫脅迫處理下表達(dá)量呈下降趨勢（圖6A）；有12個(gè)基因在5～10"h的表達(dá)量呈上升趨勢，10～24"h的表達(dá)量呈下降趨勢，10"h的表達(dá)量最高（圖6B），而余下9個(gè)基因趨勢與其相反，在10"h的表達(dá)量最低（圖6C）。這49個(gè)熱激蛋白基因由33個(gè)HSP20基因和16個(gè)HSP90基因組成。此外，Cluster-61924.7（HSP90基因）的表達(dá)量在3個(gè)高溫脅迫處理中明顯高于其余48個(gè)基因，在Dno-CK"vs"Dno-5h組中的表達(dá)量為其余基因的1.17～8.63倍，在Dno-CK"vs"Dno-10h組中的表達(dá)量為1.82～15.28倍，在Dno-CK"vs"Dno-24h組中的表達(dá)量為1.81～14.19倍。推測金釵石斛的Cluster-61924.7在響應(yīng)高溫脅迫過程中發(fā)揮重要作用。

2.7""金釵石斛花朵揮發(fā)性成分分析

對(duì)金釵石斛盛花期的花朵揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒定，共檢測出1480種揮發(fā)性物質(zhì)，其中，萜類化合物的種類最多（296種），占總量的20%，其次為酯類（266種），占總量的18%，其余主要成分包括酮類、醇類、雜環(huán)化合物、醛類等（圖7A）。揮發(fā)性成分相對(duì)含量較高的化合物為雜環(huán)化合物、脂類、萜類、酮類，分別達(dá)到271.74、271.67、267.39、266.06"μg/g（圖7B）。對(duì)金釵石斛花中的揮發(fā)性萜類化合物進(jìn)行分析，共有21種成分對(duì)花香具有貢獻(xiàn)（圖7C、圖7D），其中2，6-二甲基-7-辛烯-2-醇和3，7-二甲基-1，3，7-辛三烯的貢獻(xiàn)最大，"其相對(duì)含量分別為0.91、0.45"μg/g。

3""討論

短期高溫脅迫會(huì)對(duì)植物基因表達(dá)、生理活動(dòng)、植株形態(tài)等造成一定的影響，為了生存和適應(yīng)高溫的逆境，植物在進(jìn)化過程中發(fā)展出了復(fù)雜的自我防御機(jī)制。一般情況下，植物組織通過升高或降低水勢響應(yīng)脅迫環(huán)境，其水勢與吸水能力成反比關(guān)系，金釵石斛在面臨干旱脅迫時(shí)，葉片通過升高水勢延遲脫水來應(yīng)對(duì)干旱環(huán)境[25]。本研究發(fā)現(xiàn)高溫處理下的花朵水勢與常溫對(duì)照組相比略有降低但無顯著性差異，說明36"℃高溫脅迫在24"h內(nèi)對(duì)金釵石斛花朵水分狀況影響不高。同一高溫脅迫下不同種金線蓮葉片電導(dǎo)率趨勢不同，福建金線蓮于脅迫的第2天電導(dǎo)率顯著下降，第6天顯著上升，而臺(tái)灣金線蓮葉片在高溫脅迫6"d的電導(dǎo)率與對(duì)照組相比無顯著性差異，這與大部分研究高溫脅迫與電導(dǎo)率關(guān)系的結(jié)果不完全一致[26]。本研究中4個(gè)處理下的金釵石斛花朵電導(dǎo)率均無顯著性差異，與臺(tái)灣金線蓮葉片電導(dǎo)率的變化情況相似，說明金釵石斛對(duì)36"℃高溫脅迫具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力，此溫度處理對(duì)其細(xì)胞膜通透性幾乎沒有影響。趙暉等[27]研究表明在高溫脅迫下杜鵑花葉片乙烯釋放速率增高且乙烯合成相關(guān)酶活性升高，本研究中3個(gè)高溫處理組的金釵石斛花乙烯前體（ACC）含量與對(duì)照組Dno-CK相比均顯著增加，這與趙暉等的研究結(jié)果相似。

本研究利用轉(zhuǎn)錄組測序篩選出Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三個(gè)比較組的差異基因分別為25"204、25"528、26"878個(gè)，上調(diào)表達(dá)與下調(diào)表達(dá)的基因量約為1∶1，這些基因可以作為后續(xù)研究與金釵石斛響應(yīng)高溫脅迫密切相關(guān)基因的候選基因。隨著高溫脅迫時(shí)間的延長，金釵石斛差異表達(dá)的基因總數(shù)逐漸上升。這與程秋如等[28]低溫脅迫處理油棕的研究結(jié)果一致，說明植物通過激活大量基因表達(dá)響應(yīng)溫度脅迫。本研究前期對(duì)常溫狀態(tài)下金釵石斛進(jìn)行揮發(fā)性成分分析發(fā)現(xiàn)，萜類化合物的種類及相對(duì)含量均較高，賦花香的主要成分為2，6-二甲基-7-辛烯-2-醇、3，7-二甲基-1，3，7-辛三烯。對(duì)差異基因進(jìn)行KEGG功能富集分析發(fā)現(xiàn)，Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三個(gè)比較組差異基因均富集到單萜生物合成通路，說明高溫促進(jìn)金釵石斛花揮發(fā)性萜類化合物的合成。對(duì)差異基因進(jìn)行GO功能富集分析發(fā)現(xiàn)，金釵石斛受高溫脅迫大部分差異基因富集到遺傳信息處理途徑、代謝途徑相關(guān)的通路，在核苷酸切除修復(fù)、淀粉和蔗糖代謝、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工3條通路中差異基因數(shù)量最多。說明高溫激發(fā)金釵石斛提高各類代謝活動(dòng)響應(yīng)熱脅迫，這與菜心、茶樹等植物受高溫脅迫后差異基因富集結(jié)果一致[29-30]。

熱激蛋白是植物在溫度脅迫下產(chǎn)生的一類保護(hù)性蛋白質(zhì)，高度保守并存在于幾乎所有生物體中，參與許多生長發(fā)育過程并對(duì)逆境脅迫做出反應(yīng)[31]。對(duì)差異表達(dá)基因中HSP基因的篩選發(fā)現(xiàn)，金釵石斛熱激蛋白基因大量上調(diào)表達(dá)，響應(yīng)高溫脅迫，Dno-CK"vs"Dno-5h、Dno-CK"vs"Dno-10h、Dno-CK"vs"Dno-24h三組中共同上調(diào)表達(dá)的49個(gè)熱激蛋白基因由33個(gè)HSP20基因和16個(gè)HSP90基因組成。這說明金釵石斛在24"h內(nèi)響應(yīng)高溫脅迫的HSP基因主要是HSP20基因，其次是HSP90基因。研究表明，HSP20是植物中最大的HSP家族，HSP20蛋白是許多高等植物中高溫脅迫誘導(dǎo)的最豐富的蛋白質(zhì)，HSP20基因在植物的非生物脅迫中起著關(guān)鍵作用[32]；HSP90基因與植物脅迫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、受體折疊、轉(zhuǎn)錄因子和激酶以及輔助細(xì)胞在脅迫下的存活有關(guān)[33-35]。共同上調(diào)表達(dá)的HSP基因大部分在5"h的表達(dá)量最高，5～24"h的表達(dá)量呈下降趨勢。這與朱白婢等[36]研究高溫處理后冬瓜耐熱基因在0～4"h的表達(dá)模式相同，熱響應(yīng)基因在高溫脅迫短時(shí)間內(nèi)迅速表達(dá)，植物適應(yīng)高溫后開始逐漸下降。金釵石斛熱響應(yīng)基因的進(jìn)一步研究可針對(duì)HSP20基因和HSP90基因進(jìn)行，本研究對(duì)金釵石斛高溫脅迫轉(zhuǎn)錄組響應(yīng)的分析可為石斛耐熱育種研究提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1]"明興加，"李博然，"趙紀(jì)峰，"張植瑋，"袁良琛，"王剛，"羅毅波."金釵、金釵石斛的名實(shí)考證[J]."中國中藥雜志，"2016，"41（10）："1956-1964.MING"X"J，"LI"B"R，"ZHAO"J"F，"ZHANG"Z"W，"YUAN"L"C，"WANG"G，"LUO"Y"B."Investigation"of"original"materials"under"traditonal"Chinese"medicine"names"of"“Jinchai”"and"“Jinchai"Shihu”[J]."China"Journal"of"Chinese"Materia"Medica，"2016，"41（10）："1956-1964."（in"Chinese）

[2]"顏沛沛，"葉煒，"江金蘭，"王培育."金釵石斛花香氣日變化規(guī)律[J]."亞熱帶農(nóng)業(yè)研究，"2021，"17（3）："179-183.YAN"P"P，"YE"W，"JIANG"J"L，"WANG"P"Y."Diurnal"variation"of"floral"scents"emitted"from"Dendrobium"nobile"Lindl."[J]."Subtropical"Agriculture"Research，"2021，"17（3）："179-183."（in"Chinese）

[3]"江珊，"吳龍英，"趙寶生，"黃佳惠，"蔣宇喆，"焦元，"黃進(jìn)."植物耐受高溫脅迫的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J]."中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，"2024，"40（9）："132-138.JIANG"S，"WU"Lnbsp;Y，"ZHAO"B"S，"HUANG"J"H，"JIANG"Y"J，"JIAO"Y，"HUANG"J."Molecular"mechanism"of"heat"stress"tolerance"in"plants："a"review[J]."Chinese"Agricultural"Science"Bulletin，"2024，"40（9）："132-138."（in"Chinese）

[4]"張國軍."鹽脅迫對(duì)4種景天幼苗水勢、熒光效率、丙二醛的影響[J]."農(nóng)業(yè)科技與裝備，"2012（7）："3-6.ZHANG"G"J."Effect"of"salt"stress"on"the"water"potential，"fluorescence"efficiency，"malonaldehyde"of"four"stonecrop"seedlings[J]."Agricultural"Science"amp;"Technology"and"Equipment，"2012（7）："3-6."（in"Chinese）

[5]"南思睿，"羅永忠，"于思敏，"仝慧鑫，"何鈺."水分脅迫對(duì)紫花苜蓿葉片水勢及生物量分配的影響[J]."草原與草坪，"2022，"42（6）："63-70.NAN"S"R，"LUO"Y"Z，"YU"S"M，"TONG"H"X，"HE"Y."Effects"of"water"stress"on"leaf"water"potential"and"biomass"allocation"of"Medicago"sativa[J]."Grassland"and"Turf，"2022，"42（6）："63-70."（in"Chinese）

[6]"付曉玥，"閆建成，"梁存柱，"賈成朕，"史斌，"張景慧，"齊小軍."干旱與半干旱區(qū)一年生植物水勢對(duì)模擬降水變化的響應(yīng)[J]."內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），"2012，"43（2）："160-167.FU"X"Y，"YAN"J"C，"LIANG"C"Z，"JIA"C"Z，"SHI"B，"ZHANG"J"H，"QI"X"J."Water"potentials"of"annual"plants"responseto"simulated"rainfall"in"aridand"semiarid"regions[J]."Journal"of"Inner"Mongolia"University"（Natural"Science"Edition），"2012，"43（2）："160-167."（in"Chinese）

[7]"胡娜，"孫玉紅，"張國新，"陳思."6個(gè)品種櫻花在北京地區(qū)的適應(yīng)性研究[J]."亞熱帶植物科學(xué)，"2021，"50（1）："33-38.HU"N，"SUN"Y"H，"ZHANG"G"X，"CHEN"S."Adaptability"of"six"cultivars"of"cerasus"in"Beijing[J]."Subtropical"Plant"Science，"2021，"50（1）："33-38."（in"Chinese）

[8]"王宏輝，"顧俊杰，"房偉民，"陳發(fā)棣，"張棟梁."不同品種紅掌葉片細(xì)胞膜穩(wěn)定性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)高溫脅迫的響應(yīng)[J]."上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，"2020，"36（6）："24-27.WANG"H"H，"GU"J"J，"FANG"W"M，"CHEN"F"D，"ZHANG"D"L."Response"of"cell"membrane"stability"and"osmotic"adjustment"substances"in"leaves"of"different"cultivars"of"Anthurium"andraeanum"under"high"temperature"stress[J]."Acta"Agriculturae"Shanghai，"2020，"36（6）："24-27."（in"Chinese）

[9]"高璐，"李曉鋒，"奚丹丹，"朱玉英，"朱紅芳."不同溫度條件下淹水脅迫對(duì)不結(jié)球白菜植物激素的影響[J]."上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，"2022，"38（1）："33-40.GAO"L，"LI"X"F，"XI"D"D，"ZHU"Y"Y，"ZHU"H"F."Effects"of"waterlogging"stress"on"plant"hormones"in"non-heading"Chinese"cabbage"under"different"temperature"conditions[J]."Acta"Agriculturae"Shanghai，"2022，"38（1）："33-40."（in"Chinese）

[10]"BOLLER"T，"HERNER"R"C，"KENDE"H."Assay"for"and"enzymatic"formation"of"an"ethylenenbsp;precursor，"1-aminocyclo pro p ane-1-carboxylic"acid[J]."Planta，"1979，"145："293-303.

[11]"LARKINDALE"J，"KNIGHT"M"R."Protection"against"heat"stress-induced"oxidative"damage"in"Arabidopsis"involves"calcium，"abscisic"acid，"ethylene，"and"salicylic"acid[J]."Plant"Physiol，"2002，"128："682-695.

[12]"朱丹，"秦亞東，"李林華，"高煥."高溫脅迫誘導(dǎo)薄荷差異表達(dá)基因的分析[J]."安徽科技學(xué)院學(xué)報(bào)，"2022，"36（6）："54-62.ZHU"D，"QIN"Y"D，"LI"L"H，"GAO"H."Analysis"of"differentially"expressed"genesin"Mentha"haplocalyx"Briq."inducedby"high"temperature"stress[J]."Journal"of"Anhui"Science"and"Technology"University，"2022，"36（6）："54-62."（in"Chinese）

[13]"周娜，"鄭陽，"陸景偉，"胡燕，"陶偉林，"雷開榮，"潘曉雪."高溫脅迫下蘿卜苗期的轉(zhuǎn)錄組分析[J]."南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2022，"53（3）："665-675.ZHOU"N，"ZHENG"Y，"LU"J"W，"HU"Y，"TAO"W"L，"LEI"K"R，"PAN"X"X."Transcriptome"analysis"of"Raphanus"sativus"seedlings"in"response"to"high"temperature"stress[J]."Journal"of"Southern"Agriculture，"2022，"53（3）："665-675."（in"Chinese）

[14]"郝力慧，"董彬，"朱紹華，"馬進(jìn)."牡丹響應(yīng)高溫脅迫的轉(zhuǎn)錄組分析及PsHSP基因表達(dá)[J]."浙江農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)，"2021，"38（4）："802-811.HAO"L"H，"DONG"B，"ZHU"S"H，"MA"J."Transcriptome"analysis"and"PsHSP"gene"expression"of"Paeonia"suffruticosa"in"response"to"high"temperature"stress[J]."Journal"of"Zhejiang"A"amp;"F"University，"2021，"38（4）："802-811."（in"Chinese）

[15]"宋姣敏，"徐小萍，"陳裕坤，"陳桂信，"賴鐘雄."熱脅迫下水仙花葉片的轉(zhuǎn)錄組分析[J]."熱帶作物學(xué)報(bào)，2019，"40（10）："1991-2000.SONG"J"M，"XU"X"P，"CHEN"Y"K，"CHEN"G"X，"LAI"Z"X."An a l yses"of"leaf"transcriptome"under"heat"stress"in"narcissus[J]."Chinese"Journal"of"Tropical"Crops，"2019，"40（10）："1991-2000."（in"Chinese）

[16]"李俊成，"黨蕓芝，"孫清明."高溫脅迫下火龍果轉(zhuǎn)錄組及熱激蛋白響應(yīng)分析[J]."浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，"2024，"36（5）："1067-"1075.LI"J"C，"DANG"Y"Z，"SUN"Q"M."Transcriptome"analysis"and"HSP"response"of"pitaya"（Selenicereus"spp.）"under"heat"stress[J]."Acta"Agriculturae"Zhejiangensis，"2024，"36（5）："1067-1075."（in"Chinese）

[17]"楊碧楠，"李博文，"楊振宇，"徐奕芃，"閻韻清，"婁玉霞，"奉樹成，"明鳳."月季‘安吉拉’熱脅迫反應(yīng)機(jī)制及功能基因的挖掘[J]."園藝學(xué)報(bào)，"2024，"51（6）："1284-1296.YANG"B"N，"LI"B"W，"YANG"Z"N，"XU"Y"P，"YAN"Y"Q，"LOU"Y"X，"FENG"S"C，"MING"F."The"mechanism"of"heat"stress"response"and"the"exploration"of"functional"genes"in"Rosa"chinensis"'Angela'[J]."Acta"Horticulturae"Sinica，"2024，"51（6）："1284-1296."（in"Chinese）

[18]"陳倫妍，"朱雅婷，"陸艾鮮，"吳悠，"冀宏宇，"陳志清，"吳沙沙，"翟俊文."2種蝦脊蘭屬（Calanthe"R."Br.）植物熱脅迫相關(guān)基因表達(dá)模式分析[J]."植物遺傳資源學(xué)報(bào)，"2023，"24（5）："1413-1425.CHEN"L"Y，"ZHU"Y"T，"LU"A"X，"WU"Y，"JI"H"Y，"CHEN"Z"Q，"WU"S"S，"ZHAI"J"W."The"analysis"of"expression"patterns"of"heat"stress-related"genes"in"two"species"of"Calanthe"R."Br.[J]."Journal"of"Plant"Genetic"Resources，"2023，"24（5）："1413-1425."（in"Chinese）

[19]"陳雪倩，"韓靜，"任仲海."黃瓜響應(yīng)高溫脅迫轉(zhuǎn)錄組分析[J]."分子植物育種，"2021，"19（12）："3905-3914.CHEN"X"Q，"HAN"J，"REN"Z"H."Transcriptome"analysis"of"cucumber"in"response"to"high"temperature"stress[J]."Molecular"Plant"Breeding，"2021，"19（12）："3905-3914."（in"Chinese）

[20]"SONG"N"H，"AHN"Y"J."DcHsp17."7，"a"small"heat"shock"protein"in"carrot，"is"tissue-specifically"expressed"under"salt"stress"and"confers"tolerance"to"salinity[J]."New"Biotechnol，"2011，"28："698-704.

[21]"QIN"F，"YU"B，"LI"W."Heat"shock"protein"101"（HSP101）"promotes"flowering"under"nonstress"conditions[J]."Plant"Physiol，"2021，"186："407-419".

[22]"陳宏宇，"于瑩."翅萼石斛花在溫度脅迫下的轉(zhuǎn)錄組分析[J]."安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，"2023，"29（15）："37-42.CHEN"H"Y，"YU"Y."Transcriptome"analysis"of"Dendrobium"cariniferum"under"temperature"stress[J]."Anhui"Agricultural"Science"Bulletin，"2023，"29（15）："37-"42."（in"Chinese）

[23]"徐載萍，"王孟穎，"孫福英，"趙雯，"楊莘鍇，"萬林春，"曾黎明."高溫脅迫下鐵皮石斛的轉(zhuǎn)錄組分析[J]."中國中藥雜志，"2024，"49（20）："5433-5440.XU"Z"P，"WANG"M"Y，"SUN"F"Y，"ZHAO"W，"YANG"X"K，"WAN"L"C，"ZENG"L"M."Transcriptome"analysis"of"Dendr obi um"officinale"exposed"to"high"temperature"stress[J]."China"Journal"of"Chinese"Materia"Medica，"2024，"49（20）："5433-"5440."（in"Chinese）

[24]"陳宏宇，"于瑩，"李菲."基于轉(zhuǎn)錄組鑒定鼓槌石斛花溫度脅迫響應(yīng)基因[J]."高師理科學(xué)刊，"2023，"43（11）："44-49.CHEN"H"Y，"YU"Y，"LI"F."Identifying"genes"responsive"to"temperature"stress"in"Dendrobium"chrysotoxum"flower"based"on"transcriptome"analysis[J]."Journal"of"Science"of"Teachers'"College"and"University，"2023，"43（11）："44-49."（in"Chinese）

[25]"呂朝燕，"高智席，"嚴(yán)羽，"王利霞，"魏英，"葉麗，"盧珊珊，"張琴."干旱-復(fù)水對(duì)兩種石斛屬植物葉水勢的影響[J]."廣西植物，"2021，"41（2）："177-182.LYU"C"Y，"GAO"Z"X，"YAN"Y，"WANG"L"X，"WEI"Y，"YE"L，"LU"S"S，"ZHANG"Q."Effects"of"drought-rewatering"on"leaf"water"potential"of"two"Dendrobium"plants[J]."Guihaia，"2021，"41（2）："177-182."（in"Chinese）

[26]"林曉紅，"施木田，"林三睦."高溫脅迫對(duì)金線蓮葉綠素?zé)晒鈪?shù)及SOD活性與電導(dǎo)率的影響[J]."熱帶作物學(xué)報(bào)，"2014，"35（6）："1137-1142.LIN"X"H，"SHI"M"T，"LIN"S"M."Effects"of"high-temperature"stress"on"chlorophyll"fluorescence"parameters，"SOD"activity"and"electrolyte"leakage"of"Anoectochilus"roxburghii"（Wall.）"Lindl."and"Anoectochilus"formosanus"Hayata[J]."Chinese"Jour n al"of"Tropical"Crops，"2014，"35（6）："1137-1142."（in"Chinese）

[27]"趙暉，"耿興敏，"王露露，"許世達(dá)."乙烯在杜鵑花耐熱機(jī)制中的作用研究[J]."園藝學(xué)報(bào)，"2022，"49（3）："561-570.ZHAO"H，"GENG"X"M，"WANG"L"L，"XU"S"D."Research"on"the"effect"of"ethylene"in"heat"resistance"mechanism"of"Rhododendron[J]."Acta"Horticulturae"Sinica，"2022，"49（3）："561-570."（in"Chinese）

[28]"程秋如，"劉加能，"劉子凡，"潘登浪，"曾憲海，"曾精."油棕響應(yīng)低溫脅迫的轉(zhuǎn)錄組分析[J/OL]."分子植物育種，"（2024-"06-25）[2024-08-27]."http：//kns.cnki.net/kcms/d etail/46.1068."S.20240624.1745.008.html.CHENG"Q"R，"LIU"J"N，"LIU"Z"F，"PAN"D"L，"ZENG"X"H，"ZENG"J."Transcriptome"analysis"of"oil"palm"in"response"to"low"temperature"stress[J]."Molecular"Plant"Breeding，"（2024-06-25）[2024-08-27]."http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46."1068.S.20240624.1745.008.html."（in"Chinese）

[29]"江定，"李光光，"袁凡崇，"雷世康，"張華，"戴修純，"鄭巖松."菜心響應(yīng)高溫脅迫的轉(zhuǎn)錄組分析與基因挖掘[J]."南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，"2024，"55（3）："766-783.JIANG"D，"LI"G"G，"YUAN"F"C，"LEI"S"K，"ZHANG"H，"DAI"X"C，"ZHENG"Y"S."Transcriptome"analysis"and"gene"mining"of"flowering"Chinese"cabbage"in"response"to"high"temperature"stress[J]."Journal"of"Southern"Agriculture，"2024，"55（3）："766-"783."（in"Chinese）

[30]"翟秀明，"唐敏，"李解，"陳世春，"胡方潔，"侯渝嘉."基于RNA-Seq技術(shù)的茶樹響應(yīng)高溫脅迫轉(zhuǎn)錄組差異性分析[J]."分子植物育種，"2020，"18（17）："5629-5637.ZHAI"X"M，"TANG"M，"LI"J，"CHEN"S"C，"HU"F"J，"HOU"Y"J."Difference"analysis"of"heat"stress-responsive"transcriptome"of"Camellia"sinensis"based"on"RNA-Seq"technology[J]."Molecular"Plant"Breeding，"2020，"18（17）："5629-5637."（in"Chinese）

[31]"FEDER"M"E."Organismal，"ecological，"and"evolutionary"aspects"of"heat-shock"proteins"and"the"stress"response："established"conclusions"and"unresolved"issues[J]."American"Zoologist，"1999，"39："857-864.nbsp;（in"Chinese）

[32]"OUYANG"Y，"CHEN"J，"XIE"W，"WANG"L，"ZHANG"Q."Comp rehensive"sequence"and"expression"profile"analysis"of"Hsp20"gene"family"in"rice[J]."Plant"Molecular"Biology，"2009，"70（3）："341-57.

[33]"HAN"Y，"CHEN"Y，"YIN"S，"ZHANG"M，"WANG"W."Over-ex pre ssion"of"TaEXPB23，"a"wheat"expansin"gene，"improves"oxidative"stress"tolerance"in"transgenic"tobacco"plants[J]."Plant"Physiol，"2015，"173："62-71.

[34]"CHA"J，"AHN"G，"KIM"J"Y，"KANG"S"B，"KIM"M"R，"SU'UDI"M，"KIM"W"Y，"SON"D."Structural"and"functional"differences"of"cytosolic"90-kDa"heat-shock"proteins"（Hsp90s）"in"Arabidopsis"thaliana[J]."Plant"Physiology"and"Biochemistry，"2013，"70："368-373.

[35]"JACKSON"S"E，"QUEITSCH"C，"TOFT"D."Hsp90："from"structure"to"phenotype[J]."Nature"Structural"amp;"Molecular"Biology，"2004，"11（12）："1152-1155.

[36]"朱白婢，"王靜，"張文，"胡艷平，"李雪嶠."冬瓜響應(yīng)高溫脅迫的轉(zhuǎn)錄組測序及分析[J/OL]."分子植物育種，"（2024-04-"30）[2024-08-27]."http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.S."20 240430.0955.004.html.ZHU"B"B，"WANG"J，"ZHANG"W，"HU"Y"P，"LI"X"Q."Tran sc ri pt ome"sequencing"and"analysis"of"wax"gourd"in"resp on se"to"high"temperature"stress[J]."Molecular"Plant"Breeding，"（2024-"04-30）[2024-08-27]."http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068."S.20240430.0955.004.html."（in"Chinese）