摘要：蘭州百合是中國名特優(yōu)新農(nóng)產(chǎn)品之一，為促進(jìn)蘭州百合產(chǎn)業(yè)中優(yōu)質(zhì)脫毒種苗的高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，根據(jù)國家及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合多年試驗(yàn)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，從適用范圍、苗體選擇、煉苗方法與培養(yǎng)條件、后期管理等方面總結(jié)制定了蘭州百合組培脫毒苗煉苗技術(shù)規(guī)程。本規(guī)程的制定可提高蘭州百合組培脫毒苗移栽的成活率，以期為規(guī)模化生產(chǎn)提供有力的技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞：蘭州百合；脫毒苗；煉苗；組織培養(yǎng)；移栽；技術(shù)規(guī)程

中圖分類號(hào)：S644.1" " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B" " " " " " 文章編號(hào)：2097-2172（2025）01-0084-03

doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2025.01.014

Technical Regulation for the Seedling Hardening in Virus-free

Tissue Culture Seedlings of Lanzhou Lily

HOU Yiqing， WANG Liguang， ZHANG Minmin， LIU Yaoquan， PEI Huaidi

（Institute of Biotechnology， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou Gansu 730070， China）

Abstract： Lanzhou lily is one of the national famous， special and new agricultural products. Based on national and industry standards and combined with years of testing and production experience， the technical regulation for the hardening of Lanzhou lily tissue culture virus-free seedlings were summarized and formulated from the aspects of application scope， selection of tissue culture virus-free seedlings， hardening methods and culture conditions， and post-management. The formulation of this regulation could improve the survival rate of transplanted Lanzhou lily tissue culture virus-free seedlings， which would provide strong technical support for the large-scale production of high-quality virus-free seedlings in the Lanzhou lily industry.

Key words： Lanzhou lily; Virus-free seedling; Seedling hardening; Tissue culture; Transplanting; Technical regulation

蘭州百合（Lilium davidii var. unicolor）是一種獨(dú)特的中國本土甜百合品種，因其顯著的營養(yǎng)和藥用價(jià)值而聞名。蘭州百合以大型白色鱗莖和甜美的口感為特征，在甘肅省種植已超過400年［1 - 3 ］。蘭州百合不僅是美味佳肴，同時(shí)也是一種具有健脾養(yǎng)胃和抗衰老等功效的藥用植物。截至目前，甘肅省種植面積約1.58萬hm2，總產(chǎn)量11.16萬t，產(chǎn)值10.06億元。蘭州百合作為原國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局認(rèn)可的地理標(biāo)志保護(hù)產(chǎn)品，是甘肅省重要的經(jīng)濟(jì)作物，也是當(dāng)?shù)剞r(nóng)民致富的支柱產(chǎn)業(yè)［4 ］。

近年來，隨著市場需求的增加，蘭州百合種植面積不斷擴(kuò)大，加之長期無性繁殖，百合植株體內(nèi)病毒積累，導(dǎo)致品種退化，品質(zhì)逐年下降［5 - 6 ］。植物組織培養(yǎng)脫病毒技術(shù)是以組織培養(yǎng)技術(shù)為媒介，通過一系列技術(shù)手段去除植物體內(nèi)病毒病原，從而培育并繁殖出無毒植株。脫去病毒的植株具有抗病能力強(qiáng)、繁殖效率高、作物產(chǎn)量和品質(zhì)顯著提高等特點(diǎn)，目前已經(jīng)成為百合種苗商品化生產(chǎn)的主要技術(shù)［7 - 8 ］。然而，將脫毒組培苗馴化成商品栽培苗（即煉苗），提高馴化成活率，是該技術(shù)成熟應(yīng)用的核心部分［9 ］。我們以多年的試驗(yàn)研究及蘭州百合組培脫毒苗生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，提出并制定蘭州百合組培脫毒苗的煉苗技術(shù)規(guī)程，確保蘭州百合脫毒種苗的可持續(xù)生產(chǎn)，為蘭州百合產(chǎn)業(yè)的前端打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

1" "適用范圍

本規(guī)程規(guī)定了蘭州百合脫毒組培苗的煉苗方式、組培脫毒苗選擇、基質(zhì)的配置、煉苗方法、培養(yǎng)條件、后期管理技術(shù)措施。

本規(guī)程適用于甘肅省蘭州市七里河區(qū)、榆中縣，定西市臨洮縣和臨夏州永靖縣，海拔1 500～3 500 m的育苗溫室內(nèi)，其他產(chǎn)區(qū)可參考執(zhí)行。其中，育苗溫室需符合GB/T 51424 — 2022規(guī)范［10 ］。

2" "規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本規(guī)程的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本規(guī)程。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本規(guī)程。

GB/T 51424 — 2022" "農(nóng)業(yè)溫室結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)［10 ］

GB/T 8321.10 — 2018" "農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（十）［11 ］

NY/T 1276 — 2007" "農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則［12 ］

NY/T 1107 — 2020" "大量元素水溶肥料［13 ］

3" "術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本規(guī)程。

3.1" "脫毒組培苗

是指以組織培養(yǎng)技術(shù)為媒介，通過一系列技術(shù)手段去除百合苗體中的病毒病原，從而培育并繁殖出的健康百合種苗［14 ］。

3.2" "煉苗

因植物組織培養(yǎng)技術(shù)的特征，組培苗是在密閉狹小可控的環(huán)境中生長，不能在室外的環(huán)境中存活，需通過調(diào)整培養(yǎng)環(huán)境等各種方法將其馴化，使其逐漸適應(yīng)室外環(huán)境并生長，該過程稱作煉苗［15 - 16 ］。

3.3" "脫毒組培苗根部器官定向培養(yǎng)

是指通過組織培養(yǎng)技術(shù)，將脫毒組培苗接種于特定的培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)其根部向特定的方向發(fā)育生長。

4" "苗體選擇

4.1" "脫毒組培苗根部器官定向培養(yǎng)

將脫毒組培苗反復(fù)繼代，接種于MS+NAA 0.2 mg/L的培養(yǎng)基中進(jìn)行根部器官膨大培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24 ℃。使苗體達(dá)到煉苗標(biāo)準(zhǔn)。

4.2" "煉苗苗體的選擇

從根部膨大培養(yǎng)的脫毒組培苗中，選擇苗體長6～7 cm，具有4～6條主根的健壯苗體進(jìn)行煉苗，未達(dá)到條件的苗體可接種于4.1中所述的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件中，反復(fù)繼代至煉苗標(biāo)準(zhǔn)。

5" "基質(zhì)的配置

草炭土、珍珠巖、蛭石按體積比1∶2∶2混合使用，基質(zhì)可重復(fù)利用。多菌靈可濕性粉劑兌水噴灑到基質(zhì)中并攪拌均勻，多菌靈用量為50 g/m3。攪拌均勻后的基質(zhì)達(dá)到輕微潮濕即可裝盆使用。多菌靈的使用應(yīng)符合GB/T 8321.10 — 2018規(guī)定，基質(zhì)伴藥處理場所應(yīng)符合NY/T 1276 — 2007規(guī)定。

6" "煉苗

6.1" "脫毒組培苗馴化

將選擇的脫毒組培苗帶瓶放置于苗床上，放置環(huán)境光照強(qiáng)度＜12 000 lx，溫度為23～26 ℃。24 h后，打開瓶蓋繼續(xù)在光照強(qiáng)度＜5 000 lx，溫度23～26 ℃，濕度80%～100%下放置1 d。第3天，調(diào)節(jié)放置環(huán)境光照強(qiáng)度＜5 000 lx，溫度23～26 ℃，濕度50%～60%。第4天，調(diào)節(jié)放置環(huán)境光照強(qiáng)度＜5 000 lx，溫度23～26 ℃，濕度40%～60%。馴化第4天如遇葉片干卷，可臨時(shí)平鋪報(bào)紙于瓶體上方，并將報(bào)紙澆濕。

6.2" "苗體處理

將馴化4 d的脫毒組培苗從瓶體中取出，放置于干凈的盆中，加入清水，清洗掉苗體根部培養(yǎng)基塊，小心操作，以防損傷苗體根部。洗凈去除培養(yǎng)基后，苗體用清水沖洗2遍，待用。

6.3" "扦插

在基質(zhì)上用干凈的鑷子做出2～3 cm的孔洞，將馴化并清洗過的脫毒組培苗根部向下扦插于基質(zhì)上的孔洞中，用周圍基質(zhì)填充并壓實(shí)孔洞，根部距離基質(zhì)表層4～6 cm。扦插苗體間距3～4 cm。扦插完成后澆透水。

6.4" "緩苗

將扦插于基質(zhì)上的脫毒苗平鋪于苗床上進(jìn)行緩苗處理，緩苗環(huán)境光照強(qiáng)度＜5 000 lx，溫度23～26 ℃，空氣濕度50%～70%。光照強(qiáng)度可用黑色遮陰網(wǎng)控制，緩苗2 d后可去除。

7" "后期管理

7.1" "光照

保持培養(yǎng)環(huán)境光照強(qiáng)度＜12 000 lx。

7.2" "溫度

保持培養(yǎng)環(huán)境溫度25～28 ℃，夜間溫度＞15 ℃。

7.3" "濕度

保持空氣濕度40%～70%，基質(zhì)濕度18%～30%。

7.4" "病蟲害防治

待萎蔫的百合葉片變挺拔后，及時(shí)處理發(fā)現(xiàn)的病蟲害。百合病害主要有灰霉病和疫病?；颐共】筛腥救~片和莖，發(fā)病初期可用50%多菌靈可濕性粉劑500～800倍液噴施防治，每14 d噴施1次，連噴1～2次；也可用1 000億株/g的枯草芽孢桿菌1 000倍液噴施，每7 d噴1次，連噴2～3次，同時(shí)控制溫棚內(nèi)的濕度。疫病可造成根莖部、花器枯萎腐敗或全株枯萎死亡，發(fā)病初期可用75%百菌清可濕性粉劑600倍液，或25%甲霜靈可濕性粉劑1 500倍液噴霧防治，每10 d噴1次，連噴2～3次，同時(shí)控制溫室和基質(zhì)的濕度＜20%。后期應(yīng)及時(shí)將患病植株拔除銷毀。

常見的百合蟲害有蚜蟲和粉虱，主要危害百合葉片和莖。粉虱可使用黃色、綠色粘板按說明 書誘殺，盛發(fā)期可用70%艾美樂水分散粒15 000倍液噴殺；蚜蟲可用高氯啶蟲脒微乳劑（高效氯氰菊酯2%，啶蟲脒3%）20 mL兌水20 L，噴霧防殺，1 d噴1次，連噴2 d。

其余病蟲害可依據(jù)NY/T 1276 — 2007、GB/T 8321. 10 — 2018，適當(dāng)使用低毒農(nóng)藥進(jìn)行防治。

7.5" "營養(yǎng)補(bǔ)充

脫毒苗煉化在基質(zhì)上存活后，可在澆水時(shí)適量施用稀釋的液體肥料，以促進(jìn)苗體生長和生根，稀釋的液體肥料應(yīng)符合NY/T 1107 — 2020規(guī)定，成分含量N+P2O5+K2O≥50%、Fe+B為0.2%～0.3%，每次施用量為0.42 kg/hm2，葉面噴灑至基質(zhì)澆濕。

8" "注意事項(xiàng)

提高百合脫毒組培苗煉苗成活率有三個(gè)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)，一是選擇根部健壯的苗體進(jìn)行煉苗；二是組培苗瓶蓋揭開后，環(huán)境濕度＞70%；三是經(jīng)過馴化、清洗的脫毒組培苗扦插在基質(zhì)上進(jìn)行緩苗，培養(yǎng)環(huán)境的光照強(qiáng)度＜5 000 lx，濕度＞50%，該緩苗過程可用打濕的報(bào)紙或遮陰網(wǎng)進(jìn)行時(shí)宜調(diào)節(jié)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 裴懷弟，李" "琦，李淑潔，等." 蘭州百合試管小鱗莖膨大及碳水化合物變化規(guī)律研究［J］." 甘肅農(nóng)業(yè)科技，2021，52（12）：5-10.

［2］ 厚毅清，羅俊杰，歐巧明，等." 卷丹及主要食用百合EST-SSR鑒別體系的構(gòu)建［J］." 中草藥，2020，51（16）：4308-4315.

［3］ 李玉帆，明" "軍，楊新艷，等." 15個(gè)百合品種和品種的食用性比較研究［J］." 園藝學(xué)報(bào)，2013，40（S）：2693-2694.

［4］ 宋小霞." 蘭州百合產(chǎn)業(yè)發(fā)展路徑研究與思考［J］." 甘肅農(nóng)業(yè)，2019（10）：49-50.

［5］ 柳玉晶." 百合植物組織培養(yǎng)脫毒技術(shù)研究進(jìn)展［J］." 現(xiàn)代園藝，2023，46（13）：12-14.

［6］ 尹" "燕，楊道蘭，梁玉文，等." 光暗條件下蔗糖和大量元素對(duì)蘭州百合鱗莖生長的影響［J］." 寒旱農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，2（3）：254-259.

［7］ 樊亞敏，周云帆." 淺談組培苗的脫毒及應(yīng)用［J］." 現(xiàn)代園藝，2023，46（5）：82-84.

［8］ 高文敬，董景湘，劉靈娣." 中藥材組培脫毒技術(shù)研究進(jìn)展［J］." 河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，27（2）：83-86；90.

［9］ 王" "昊，哈" "蓉，楊" "波，等." 釀酒葡萄組培苗馴化煉苗關(guān)鍵因子研究［J］." 農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2023，44（3）：38-43.

［10］ 中華人民共和國住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部，中華人民共和國國家市場監(jiān)督管理總局." 農(nóng)業(yè)溫室結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 51424 — 2022［S］." 北京：中國計(jì)劃出版社，2022.

［11］ 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)." 農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則（十）：GB/T 8321.10 — 2018［S］." 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2018.

［12］ 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部." 農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則：NY/T 1276 — 2007［S］." 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

［13］ 中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部." 大量元素水溶肥料：NY/T 1107 — 2020［S］." 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2020.

［14］ 董" "薇，余永亮，楊紅旗，等." ‘豫菊花2號(hào)’脫毒培養(yǎng)及脫毒苗分級(jí)［J］." 分子植物育種，2024，22（13）：4333-4340.

［15］ 葛玉君，鞏" "娜，楊建峰，等." 棉花組培苗高效移栽馴化技術(shù)的研究［J］." 中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2024，40（7）：14-19.

［16］ 張雪冰，王" "鴻，張" "帆，等." 山桃生根成苗關(guān)鍵技術(shù)研究［J］." 寒旱農(nóng)業(yè)科學(xué)，2023，2（3）：270-274.