摘 要 為建立靈敏、特異的大豆凝集素（soybean agglutinin，SBA）酶聯(lián)免疫吸附（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)方法。試驗(yàn)以SBA鼠源單克隆抗體為捕獲抗體，SBA兔源多克隆抗血清為檢測(cè)抗體，羊抗兔酶標(biāo)抗體為二抗，通過(guò)對(duì)抗體的工作濃度及反應(yīng)時(shí)間優(yōu)化，建立SBA的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，并用建立的方法檢測(cè)大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。結(jié)果表明：建立SBA雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法的檢測(cè)范圍為39.06～1 250 ng/mL，檢出限為3.00 ng/mL，樣品添加回收率為 77.96%～116.15%，變異系數(shù)為6.11%～18.34%，與大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI，大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗?fàn)I養(yǎng)因子均無(wú)交叉反應(yīng)。大豆中SBA含量顯著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕（Plt;0.05）；大豆粕中SBA含量顯著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕（Plt;0.05）；膨化大豆粕顯著高于酶解大豆粕中SBA含量（Plt;0.05）。綜上，本研究建立了靈敏度高、特異性好的SBA雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法，該方法可用于飼料中大豆凝集素的監(jiān)控檢測(cè)。

關(guān)鍵詞 大豆凝集素；抗?fàn)I養(yǎng)因子；多克隆抗體；單克隆抗體；夾心ELISA

大豆是優(yōu)質(zhì)的食品及飼料原料。大豆中蛋白質(zhì)、必需脂肪酸、礦物質(zhì)、維生素和膳食纖維等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，是人和動(dòng)物獲取營(yíng)養(yǎng)的重要來(lái)源，大豆中一些成分對(duì)人的一些慢性疾病起到預(yù)防的作用，對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能及產(chǎn)品品質(zhì)具有改善作用^［1-4］。然而大豆及其制品中含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子及致敏蛋白^［5-6］，不僅會(huì)降低人體及動(dòng)物對(duì)其他營(yíng)養(yǎng)成分的吸收率，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)對(duì)人體健康構(gòu)成威脅，在一定程度上對(duì)大豆食品開發(fā)利用產(chǎn)生不良影響。大豆凝集素（soybean agglutinin，SBA）是大豆中主要抗?fàn)I養(yǎng)因子，約占大豆蛋白含量的10%，作為含量較高、副作用明顯的一類抗?fàn)I養(yǎng)因子，對(duì)人及動(dòng)物機(jī)體存在極大的潛在危害，首先是對(duì)腸道及其內(nèi)環(huán)境產(chǎn)生不良影響^［7］，從而影響動(dòng)物機(jī)體代謝性能，導(dǎo)致動(dòng)物蛋白氮損失增加，降低了動(dòng)物生長(zhǎng)速度，甚至由于營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致動(dòng)物死亡，尤其是對(duì)幼齡動(dòng)物危害極大^［8］。因此，對(duì)大豆凝集素進(jìn)行滅活，建立SBA的準(zhǔn)確識(shí)別與定量檢測(cè)方法對(duì)降低凝集素危害尤為必要。

目前，大豆凝集素滅活主要采用膨化技術(shù)及發(fā)酵酶解技術(shù)^［9］。而檢測(cè)技術(shù)方面，到目前為止，科研工作者建立了多種SBA的檢測(cè)方法，包括紅細(xì)胞血凝試驗(yàn)法^［10］、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法^［11］、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）^［12］、火箭電泳^［13］、電化學(xué)發(fā)光生物傳感器^［14］及酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）檢測(cè)法^［15-16］、拉曼光譜檢測(cè)法^［17］等方法。在上述這些方法中，ELISA檢測(cè)方法操作相對(duì)比較簡(jiǎn)單，耗時(shí)較短，而且該方法特異性強(qiáng)，靈敏度高。SBA分子質(zhì)量約120 ku，屬于大分子蛋白質(zhì)物質(zhì)，其抗原決定簇不是單一的，因此與間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)模式^［15］相比雙抗體夾心ELISA檢測(cè)模式效果更好。盡管張海全^［16］利用紅細(xì)胞膜對(duì)SBA的吸附作用，建立了近似于雙抗體夾心模式ELISA檢測(cè)方法，但其使用的紅細(xì)胞膜易受紅細(xì)胞來(lái)源及純凈度影響，影響到所建立ELISA方法的穩(wěn)定性及重復(fù)性。

為建立簡(jiǎn)便、靈敏、穩(wěn)定的SBA檢測(cè)方法，本研究基于已制備的SBA兔源多克隆抗血清及鼠源單克隆抗體，通過(guò)ELISA條件的優(yōu)化，建立SBA雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法，以期進(jìn)一步補(bǔ)充完善SBA的免疫學(xué)快速檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

SBA、大豆中Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子（BBI）、大豆中Kunitz胰蛋白酶抑制因子（KTI）、大豆致敏蛋白Glycinin、大豆致敏蛋白 β-conglycinin（純度均≥90%，購(gòu)自Sigma公司；羊抗兔酶標(biāo)二抗（GaRIgG-HRP），購(gòu)自索萊寶北京生物科技有限公司；ELISA試驗(yàn)所用的包被液（CBS）、稀釋液（PBS）、洗滌液（PBST）、封閉液、顯色液及終止液等，均由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室配制；SBA 鼠源單克隆抗體（mAb）及SBA兔源多克隆抗血清（pAb），均為河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備。

1.2 主要儀器

酶標(biāo)儀（型號(hào)為550），購(gòu)自Bio-Rad公司；多功能冷凍離心機(jī)（型號(hào)為2-6），購(gòu)自Sigma公司；二氧化碳培養(yǎng)箱（型號(hào)為371），購(gòu)自賽默飛世爾科技公司。多功能高速粉碎機(jī)（型號(hào)為拉扣型），購(gòu)自紅太陽(yáng)機(jī)電有限公司。

1.3 雙抗體夾心間接ELISA

雙抗體夾心ELISA具體步驟，參照文獻(xiàn)［18］的描述并稍作修改。

用CBS溶液將SBA鼠源單抗稀釋到試驗(yàn)所需的濃度，包被聚苯乙烯酶標(biāo)板，4℃條件下保存，備用；將樣品液或SBA標(biāo)準(zhǔn)溶液加入酶標(biāo)板孔中，37℃孵育30 min，PBST洗板；加入SBA兔源多克隆抗血清，37℃孵育30 min，PBST洗板；加入GaRIgG-HRP，37℃孵育30 min，PBST洗板；加入顯色液室溫顯色10 min，然后加入終止液終止顯色，在450 nm波長(zhǎng)下，測(cè)定吸光度值，即OD_450nm值。

1.4 雙抗體夾心間接ELISA條件優(yōu)化

1.4.1 抗體最佳工作濃度確定 采用方陣棋盤法確定捕獲抗體（鼠源單克隆抗體）與檢測(cè)抗體（兔源多克隆抗血清）最佳工作質(zhì)量濃度。用包被液CBS將SBA鼠源單抗稀釋成不同的質(zhì)量濃度，分別以1∶2 000、1∶4 000、1∶6 000、1∶8 000、1∶10 000、1∶12 000的稀釋度包被酶標(biāo)板，各稀釋度設(shè)置為兩行（陰性和陽(yáng)性各1行）。在酶標(biāo)板中包被相同濃度抗體的兩行中，分別加入已知濃度的SBA標(biāo)準(zhǔn)溶液和PBS溶液，37℃孵育30 min，洗板拍干。將SBA兔源多克隆抗血清，分別以1∶2 000、1∶4 000、1∶6 000、1∶8 000、1∶10 000、1∶12 000的稀釋度加入每列酶標(biāo)板，按稀釋度由小到大順序加入，37℃孵育30 min，洗板拍干。其余操作步驟同“1.3”，顯色終止后，用酶標(biāo)儀讀值，計(jì)算P/N值，P/N最大值對(duì)應(yīng)的單抗及多抗?jié)舛燃礊榭贵w最佳工作質(zhì)量濃度。

1.4.2 捕獲抗體最佳反應(yīng)時(shí)間的確定 依據(jù)優(yōu)化好的抗體工作質(zhì)量濃度包被酶標(biāo)板，將確定質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)品加入之后，捕獲抗體與樣品液反應(yīng)時(shí)間設(shè)為20、30、40、50、60、70 min，其余試驗(yàn)步驟按照“1.3”進(jìn)行，選擇P/N值最大且N值較小時(shí)所對(duì)應(yīng)的時(shí)間為最佳反應(yīng)時(shí)間。

1.5 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

用PBS配制確定濃度的樣品液，設(shè)置SBA質(zhì)量濃度梯度為5 000、2 500、1 250、625、312.5、156.25、78.13、39.06、19.53、9.77、4.88 ng/mL，按“1.3”步驟進(jìn)行檢測(cè)，分別將SBA質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值和OD_450nm值設(shè)為橫、縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其格式為y=ax+b，其中y為不同濃度SBA對(duì)應(yīng)的OD_450nm值，x為SBA質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)值。

1.6 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法性能的鑒定

1.6.1 檢出限鑒定 雙抗體夾心間接ELISA方法的檢出限測(cè)定采用李燕虹^［18］報(bào)道的方法，即用建立的ELISA檢測(cè)方法重復(fù)測(cè)定空白樣品20次，得到空白樣品OD_450nm平均值（x^-）和標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD），將X^--2SD值代入該方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，計(jì)算得到對(duì)應(yīng)濃度即為檢出限，檢出限越低則靈敏度越高。

1.6.2 準(zhǔn)確度鑒定 通過(guò)添加回收試驗(yàn)驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度。用PBS將SBA分別稀釋成不同質(zhì)量濃度，用建立的ELISA檢測(cè)方法檢測(cè)樣品中的SBA含量（重復(fù)檢測(cè)4次），計(jì)算測(cè)定值與實(shí)際添加量的比值，計(jì)算添加回收率來(lái)鑒定方法的準(zhǔn)確度。

1.6.3 特異性鑒定 用建立ELISA檢測(cè)方法測(cè)定質(zhì)量濃度為10 μg/mL BBI、KTI、Glycinin、β-conglycinin的標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)置空白對(duì)照，酶標(biāo)儀讀值，計(jì)算P/N值，若P/Nlt;2.1，表明方法特異性良好。

1.7 樣品檢測(cè)

把從不同飼料公司得到的大豆（粗蛋白 35.4%）、酶解大豆粕1（粗蛋白51.2%）、酶解大豆粕2（粗蛋白50.7%）、大豆粕（粗蛋白 46.8%）、膨化大豆粕（粗蛋白43.4%）進(jìn)行粉碎混勻，各準(zhǔn)確稱取約1 g，分別加入到15 mL離心管，每管加入10 mL PBS振蕩混勻提取10 min，靜置5 min，取上清，按“1.3”步驟進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)樣品測(cè)定3次。

1.8 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，數(shù)值表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，采用Compare Means 模塊下One-way ANOVA進(jìn)行分析，Plt;0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法抗體最佳工作濃度的確定

方陣棋盤試驗(yàn)結(jié)果顯示（表1），鼠源單抗和兔源多克隆抗血清稀釋倍數(shù)均為1∶8 000時(shí)，P/N值最大且此時(shí)N值較小，因此把1∶8 000稀釋設(shè)定為SBA鼠源單抗及兔源多抗血清的最佳工作質(zhì)量濃度。

2.2 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法捕獲抗體最佳反應(yīng)時(shí)間的確定

將工作濃度的鼠源單抗包被酶標(biāo)板，用800 ng/mL的SBA標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性樣品分別進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如表2所示，俘獲抗體與SBA最佳反應(yīng)時(shí)間為30 min。

2.3 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

由圖1-A可以看出，由5 000、2 500、1 250、625、312.5、156.25、78.13、39.06、19.53、9.77、4.88 ng/mL的SBA標(biāo)準(zhǔn)溶液，夾心ELISA測(cè)定OD_450nm建立的曲線，按線性方程計(jì)算時(shí)，其方程式為y=0.567 9x-0.264 5，線性關(guān)系為R²= 0.963 3。而由圖1-B可以看出，由1 250、625、312.5、156.25、78.13、39.06 ng/mL的SBA標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定OD_450nm值建立的曲線，按線性方程計(jì)算時(shí)，其方程式為y=0.568 2x-0.184 5，線性關(guān)系為R²=0.985 3。因此，確定圖1-B為線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性檢測(cè)范圍為39.06～1 250 ng/mL。

2.4 雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法的性能 鑒定

2.4.1 檢出限確定 用制備的夾心ELISA試劑盒測(cè)定20個(gè)空白樣品，計(jì)算20個(gè)空白樣品的OD_450nm平均值為0.1001，標(biāo)準(zhǔn)差SD為0.015 1，-2SD為0.069 7，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸方程，計(jì)算方法檢出限為2.80 ng/mL，考慮試驗(yàn)操作可能存在的誤差，將檢出限設(shè)定為3.00 ng/mL。

2.4.2 準(zhǔn)確度鑒定 用SBA濃度分別為500 ng/mL、50 ng/mL、20 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)建立的夾心間接ELISA方法檢測(cè)后，將測(cè)定的OD_450nm讀值代入到標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出樣品中SBA含量，計(jì)算回收率，如表3所示，樣品回收率為77.96%～116.15%，表明方法準(zhǔn)確度較高。

2.4.3 特異性鑒定 以10 μg/mL的BBI、KTI、Glycinin、β-conglycinin標(biāo)準(zhǔn)溶液作為檢測(cè)樣品，采用雙抗體夾心間接ELISA檢測(cè)方法測(cè)定P、N值，計(jì)算P/N值。結(jié)果見表4，P/N值均小于2.1接近于1，說(shuō)明10 μg/mL的BBI、KTI、Glycinin、β-conglycinin溶液對(duì)建立的夾心ELISA方法來(lái)說(shuō)幾乎可以認(rèn)為是陰性樣品，證明建立的ELISA檢測(cè)方法特異性良好，與大豆中其他抗?fàn)I養(yǎng)因子均無(wú)交叉反應(yīng)，說(shuō)明建立的SBA檢測(cè)方法只選擇性地與SBA反應(yīng)，而與其他物質(zhì)沒有 反應(yīng)。

2.5 樣品檢測(cè)

采用建立的夾心ELISA檢測(cè)大豆、豆粕等樣品，結(jié)果見表5，由于不同的樣品蛋白質(zhì)含量不同，為了便于比較，把SBA含量表示為每克蛋白質(zhì)中的含量。由表5可以看出，大豆、大豆粕、膨化大豆粕、酶解大豆粕1、酶解大豆粕2中SBA含量分別為779 087.41、1 542.48、1 335.85、349.94和332.06 ng/g蛋白。大豆中SBA含量顯著高于大豆粕、膨化大豆粕、酶解大豆粕（Plt; 0.05）。大豆粕中SBA含量顯著高于膨化大豆粕、酶解大豆粕（Plt;0.05）；膨化大豆粕中SBA含量顯著高于酶解大豆粕（Plt;0.05）；而兩種酶解大豆粕中SBA含量差異不顯著（P≥0.05）。

3 討論與結(jié)論

免疫學(xué)檢測(cè)方法中，ELISA檢測(cè)方法由于操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)耗時(shí)短，檢測(cè)結(jié)果靈敏性好，特異性強(qiáng)，因此在食品飼料農(nóng)藥殘留檢測(cè)^［19-20］、獸藥殘留檢測(cè)^［21-22］、違禁添加物檢測(cè)^［23-25］、過(guò)敏原及抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)檢測(cè)^{［5，18］}、霉菌毒素檢測(cè)^［26-27］、環(huán)境污染物監(jiān)測(cè)^［28-29］、人及動(dòng)物疫病診斷檢測(cè)^［30-31］等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

本研究建立的SBA雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，線性范圍為39.06～1 250 ng/mL，張海全^［16］建立大豆凝集素ELISA檢測(cè)方法的檢測(cè)范圍為10～10 000 ng/mL，比本研究的檢測(cè)范圍寬，這可能與兩種方法不同的包被抗體及檢測(cè)抗體有關(guān)，本研究建立的雙抗夾心ELISA中包被抗體為SBA鼠源單抗，檢測(cè)抗體為兔源多抗，而張海全^［16］建立的相似方法中，包被的是兔紅細(xì)胞（兔紅細(xì)胞對(duì)大豆凝集素具有良好的凝集活性），檢測(cè)抗體為SBA單克隆抗體，盡管其檢測(cè)范圍比本研究建立的夾心ELISA檢測(cè)范圍寬，但紅細(xì)胞來(lái)源不同及紅細(xì)胞制備時(shí)的純凈度并不確定，這些因素均影響所建立的類似夾心ELISA方法的穩(wěn)定性與準(zhǔn)確度，因此采用紅細(xì)胞結(jié)合單抗建立類似夾心ELISA檢測(cè)方法的報(bào)道并不多，而采用雙抗體夾心模式的ELISA檢測(cè)方法比較常見。李振田等^［15］建立的大豆凝集素ELISA檢測(cè)方法的檢測(cè)范圍為5.2～5 728.5 ng/mL，檢測(cè)范圍也比本研究的檢測(cè)范圍寬，可能是因?yàn)槠浣⒌氖情g接抑制ELISA，而本研究為雙抗夾心ELISA法；且其在研究中并沒有給出線性相關(guān)系數(shù)，而本研究中建立的雙抗夾心ELISA法檢測(cè)范圍的線性相關(guān)系數(shù)為0.985 3，線性相關(guān)性比較高。

本研究建立的檢測(cè)方法中檢出限為3.00 ng/mL，而李振田等^［15］及張海全^［16］建立的ELISA檢測(cè)方法檢出限均為10 ng/mL，是本研究檢出限的3.3倍，本研究建立的ELISA方法靈敏度更高，說(shuō)明SBA的雙抗體夾心ELISA模式檢測(cè)方法比間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA模式檢測(cè)方法更靈敏，這可能是因?yàn)镾BA屬于大分子物質(zhì)，不止一個(gè)抗原表位，因此更適合采用雙抗體夾心模式的ELISA檢測(cè)方法。

本研究建立的方法中樣品回收率為 77.96%～116.15%，而張海全^［16］建立的ELISA檢測(cè)方法添加回收率均在96%以下，這可能與ELISA包被物質(zhì)及檢測(cè)抗體的來(lái)源不同有一定的關(guān)系。

用本研究建立夾心ELISA方法對(duì)大豆及大豆粕樣品檢測(cè)結(jié)果表明，大豆中SBA含量顯著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量；而大豆粕顯著高于膨化大豆及酶解大豆粕；膨化大豆粕顯著高于酶解大豆粕。這可能是因?yàn)榇蠖拐ビ偷那疤幚泶胧┦筍BA的抗原決定簇結(jié)構(gòu)改變，因此用建立夾心ELISA檢測(cè)時(shí)，大豆粕中SBA檢測(cè)值極低，不到大豆中SBA含量的 0.2%；而大豆粕的膨化處理又使大豆粕中剩余的SBA中的一部分抗原決定簇結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，因此膨化大豆粕中SBA的檢測(cè)值低于大豆粕。酶解使得大豆粕中蛋白質(zhì)分解，更容易破壞SBA的抗原決定簇結(jié)構(gòu)，因此兩個(gè)酶解大豆粕中SBA含量均不到大豆粕中SBA含量的23%，說(shuō)明大豆粕酶解更利于SBA的消除。

綜上，本研究采用SBA的鼠源單克隆抗體作為俘獲抗體，兔源多克隆抗血清作為檢測(cè)抗體，通過(guò)條件優(yōu)化成功建立了SBA的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法靈敏度高，檢出限達(dá)到3.00 ng/mL，線性范圍為39.06～1 250 ng/mL，樣品添加回收率為77.96%～116.15%，特異性強(qiáng)，與大豆中其他抗?fàn)I養(yǎng)因子BBI、KTI及大豆致敏蛋白Glycinin、β-conglycinin均無(wú)交叉反應(yīng)。所建立的SBA雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法為監(jiān)測(cè)食品飼料中大豆凝集素提供了技術(shù) 支持。

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Establishment of a Sandwich ELISA for Detecting Soybean Agglutinin as an Anti-nutritional Factor

HU Xiaofei¹，YANG Jifei¹，XING Yunrui¹，PANG Xinghao¹，SUN Yaning¹ and WEI Fengxian²

（1.Key Laboratory for Animal Immunology，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China; 2. Institute of Husbandry，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China）

Abstract To establish a sensitive and specific enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） for the detection of soybean agglutinin（SBA）. Mouse-derived monoclonal antibody was used as the capturing antibody and rabbit-derived polyclonal antibody as the detecting antibody，with a sheep anti-rabbit enzymic conjugate antibody as the secondary antibody.This sandwich method for SBA detection was optimized in terms of antibody concentration and reaction time.This method was applied to detect SBA levels in differenet soybean products，including soybean，soybean meal，extruded soybean and enzyme hydrolyzed soybean meal. The results showed that the detection range of the developed sandwich ELISA was 39.06-1 250 ng/mL，the detection limit was 3.00 ng/mL，the fortified recovery was 77.96%-116.15%，the coefficient of variation was 6.11%-18.34%.There was no cross-reaction with other anti-nutritional factors such as trypsin inhibitors BBI，KTI，glycinin and β-conglycinin in soybean. The concentration of SBA in soybean was higher than that in soybean meal，extruded soybean meal and enzyme hydrolyzed soybean meal，respectively（Plt;0.05）. SBA in soybean meal was higher than in extruded soybean meal and enzyme hydrolyzed soybean meal，respectively（Plt;0.05） and in extruded soybean meal was higher than in enzyme hydrolyzed soybean meal（Plt;0.05）. These findings indicate that the established SBA sandwich ELISA detection method is both sensitive and specific and can be used for monitoring and detecting soybean agglutinin in feed.

Key words Soybean agglutinin; Anti-nutritional factor; Polyclonal antibody; Monoclonal antibody; Sandwich ELISA

Received 2023-11-22

Returned 2023-12-25

Foundation item The National Key Research and Development Program（No. 2018YFC1602903）; Modern Agriculture Industry Technology System of Henan Province（No. HARS-SS-12-S）.

First author HU Xiaofei，male，research fellow. Research area：immunological assay techniques for food and feed quality and safety.E-mail： huxf1972@126.com

Corresponding author WEI Fengxian，female，research fellow.Research area：animal nutrition，feed quality，and environmental control technology.E-mail： wei.fx@163.com

（責(zé)任編輯：史亞歌 Responsible editor：SHI Yage）