摘 要：目的：對草莓中多種農(nóng)藥殘留檢測能力驗證過程及結(jié)果進(jìn)行分析，為其他實驗室精準(zhǔn)測定多種農(nóng)藥殘留提供參考。方法：樣品經(jīng)QuEChERS前處理，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和高效液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用法定量分析。結(jié)果：能力驗證采用的方法重復(fù)性好，質(zhì)控方式有效，結(jié)果穩(wěn)定可靠。能力驗證結(jié)果|Z|值在0～0.6，結(jié)果令人滿意。結(jié)論：農(nóng)藥殘留檢測能力驗證過程中，應(yīng)注重質(zhì)量控制，確保獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。

關(guān)鍵詞：農(nóng)藥殘留；檢驗檢測；能力驗證；結(jié)果分析

Proficiency Testing Results and Analysis of Multiple Pesticide Residues in Strawberries

MO Qiuan1， LIN Aiqin1， TANG Shuai2*， CHANG Hong3

（1.Danzhou Branch of Hainan Provincial Inspection and Testing Research Institute， Danzhou 571737， China;

2.Haikou Xiuying District Maternal and Child Health Station， Haikou 570311， China;

3.Hainan Provincial Inspection and Testing Research Institute， Haikou 570311， China）

Abstract： Objective： To analyze the validation process and results of the ability to detect multiple pesticide residues in strawberries， and provide reference for other laboratories to accurately determine multiple pesticide residues. Method： The sample was pretreated with QuEChERS and quantitatively analyzed using gas chromatography-mass spectrometry and high-performance liquid chromatography-mass spectrometry. Result： The method used for proficiency testing has good repeatability， effective quality control methods， and stable and reliable results. The results of the ability verification show that the |Z| value ranges from 0 to 0.6， which is satisfactory. Conclusion： During the verification process of pesticide residue detection capability， quality control should be emphasized to ensure accurate detection results are obtained.

Keywords： pesticide residues; inspection and testing; proficiency testing; result analysis

為控制害蟲數(shù)量，保障農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量和質(zhì)量，提高經(jīng)濟(jì)效益，在農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中農(nóng)藥的使用不可避免。世界上使用的農(nóng)藥可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑等多種類型，數(shù)量多達(dá)1 800種[1]。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，經(jīng)常混合使用各類農(nóng)藥防治病蟲害，提高產(chǎn)量和品質(zhì)，因此可能會有不同種類的農(nóng)藥在農(nóng)產(chǎn)品中同時出現(xiàn)。農(nóng)藥使用不當(dāng)可能導(dǎo)致農(nóng)藥殘留超標(biāo)，引發(fā)環(huán)境污染、食品安全事件，對消費(fèi)者健康造成潛在威脅[2]。農(nóng)藥殘留檢測是食品安全監(jiān)管的重要環(huán)節(jié)之一，要求盡可能多地測定種農(nóng)藥的種類，對農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全進(jìn)行有效監(jiān)管，從而保障食品安全，保障消費(fèi)者的健康[3]。

我國部分農(nóng)藥殘留檢測方法前處理操作復(fù)雜，檢測工作耗時過長、準(zhǔn)確性低，不利于批量高精度檢測[4]。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）、高效液相色譜法-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）在多組分農(nóng)藥的快速篩查、定性定量分析方面表現(xiàn)優(yōu)異，具有靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)[5]。本文就筆者參加的草莓中多種農(nóng)藥殘留檢測能力驗證過程及結(jié)果進(jìn)行分析，討論檢測過程中質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)，總結(jié)高效精準(zhǔn)進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測的經(jīng)驗，以期為其他實驗室進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢驗檢測和提升檢測質(zhì)量提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

GCMS/MS-TQ8040氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：日本島津公司；Agilent 1290-6495C液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國安捷倫公司；多功能混勻儀：深圳逗點(diǎn)生物；冷凍離心機(jī)：SiGMA；Arium611VF超純水系統(tǒng)：廣州東銳科技有限公司；AutoVap S60氮吹儀：力德生物科技有限公司；Sartorius BT 125D天平：d=0.01 mg（41 g），德國賽多利斯集團(tuán)。

乙腈：色譜純，安徽天地高純?nèi)軇┯邢薰?；甲醇：色譜純，天津是彪仕奇科技發(fā)展有限公司；甲酸：色譜純，上海麥克林生化科技有限公司；甲酸銨：色譜純；QuEChERS分散SPE凈化管：15 mL（150 g PSA，15 mg GCB，885 mg MgSO4），5982-5256，5982-0650，美國安捷倫公司；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：氟蟲腈砜、噁唑菌酮、毒死蜱、吡丙醚、甲基嘧啶磷、抑霉唑、地蟲硫磷、抗蚜威、綠谷隆、溴螨酯、氯菊酯和環(huán)氧七氯B，均購自壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司。

1.2 樣品來源

樣品由英國FAPAS分析實驗室提供，為草莓中的農(nóng)藥殘留，編號19380。向FAPAS購買空白樣品，確?？瞻讟悠泛痛郎y樣品同源，同時用于添加回收率試驗和配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品工作溶液。

1.3 實驗方法

1.3.1 篩選目標(biāo)化合物

按照樣品前處理要求分別對空白樣品與能力驗證樣品進(jìn)行處理后，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀方法庫及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀現(xiàn)有的農(nóng)藥測定參數(shù)，通過對比空白基質(zhì)與能力驗證樣品的響應(yīng)值，按照出峰保留時間和離子豐度比，初步對農(nóng)藥進(jìn)行定性確證，并與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對比，進(jìn)行初步定量?？瞻讟悠放c能力驗證樣品總離子流色譜圖見圖1、圖2。

1.3.2 樣品前處理

將能力驗證樣品解凍至常溫，充分搖勻。稱取10 g試樣于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，渦旋30 s后放入冰箱冷凍30 min后取出；每個樣品加入陶瓷均質(zhì)子后，加入QuEChERS提取鹽包（5982-0650），用力振搖1 min，渦旋5 min，10 000 r·min-1離心5 min；移取上清液6 mL至分散SPE凈化管，渦旋30 s，10 000 r·min-1離心3 min，取上清液備用。添加鹽包時要控制好樣品的溫度，在加入提取液后，需將樣品放在冷凍冰箱中30 min，再添加鹽包。

（1）分取上清液2 mL至15 mL離心管，在45 ℃氮吹干，加入20 μL濃度為5 μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液，加入1 mL乙酸乙酯復(fù)溶殘渣，過0.22 μm有機(jī)微孔濾膜，用于GC-MS/MS測定。

（2）分取上清液1 mL，過0.22 μm有機(jī)微孔濾膜，用于HPLC-MS/MS測定。

1.3.3 基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

噁唑菌酮、吡丙醚、氟蟲腈砜、地蟲硫磷混合中間溶液配制：分別吸取單標(biāo)經(jīng)氮?dú)獯蹈珊?，用乙酸乙酯稀釋定容?0 μg·mL-1的混合中間溶液1。甲基嘧啶磷、溴螨酯、抗蚜威、抑霉唑、綠谷隆、氯菊酯和毒死蜱混合中間液配制：分別吸取各單標(biāo)，用乙酸乙酯稀釋定容成10 μg·mL-1的混合中間溶液2。環(huán)氧七氯B標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙酸乙酯稀釋成5 μg·mL-1的使用液。

根據(jù)初步定量的目標(biāo)化合物及其濃度，確定系列標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，覆蓋到各目標(biāo)化合物的濃度，盡量使多數(shù)目標(biāo)化合物濃度在系列標(biāo)準(zhǔn)曲線中間點(diǎn)附近。稱取空白基質(zhì)樣品，按照樣品前處理要求進(jìn)行前處理獲得空白基質(zhì)提取液，分別制得用于GC-MS/MS與HPLC-MS/MS測定的空白樣品基質(zhì)溶液。其中，在GC-MS/MS系列標(biāo)曲中分別加入濃度為5 μg·mL-1的環(huán)氧7氯B使用液20 μL。

1.3.4 過程質(zhì)控

（1）采用標(biāo)準(zhǔn)添加方法，進(jìn)行加標(biāo)回收實驗。分別稱取2份空白基質(zhì)樣品，加入篩選出來的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，使農(nóng)藥含量盡量與初篩定量含量接近。按照樣品前處理方法同樣品一同前處理，上機(jī)測定，計算回收率，若回收率在70%～120%，可上報結(jié)果。

（2）儀器方法比對。分別使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測，進(jìn)行儀器方法比對，不同儀器測定結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以內(nèi)即可上報結(jié)果。

（3）人員比對。分別由檢驗員A、B按照上述過程單獨(dú)處理樣品進(jìn)行測定，對不同檢驗員的測定結(jié)果進(jìn)行分析比對，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以內(nèi)即可上報結(jié)果。

1.4 儀器條件

1.4.1 GC-MS條件

（1）氣相條件。色譜柱：Rxi?-5Sil MS（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；進(jìn)樣體積：1 μL，不分流進(jìn)樣；載氣：氦氣；流速：1.69 mL·min-1；升溫程序：50 ℃保持1 min，然后以25 ℃·min-1程序升溫至125 ℃，再以10 ℃·min-1升溫至300 ℃，保持15 min。

（2）質(zhì)譜條件：離子源為電子轟擊源（EI+）；多反應(yīng)監(jiān)測模式；碰撞氣：氮?dú)猓浑x子源溫度：200 ℃；各化合物監(jiān)測離子對、碰撞能量見表1。

1.4.2 HPLC-MS/MS條件

（1）液相條件。色譜柱：Agilent Poroshell 120 EC-C18（150 mm×3.0 mm，2.7 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣體積：2 μL；流速：0.3 mL·min-1；流動相：A為2 mmol·L-1甲酸銨-0.01%甲酸水溶液，B為2 mmol·L-1甲酸銨-0.01%甲酸甲醇溶液；梯度洗脫程序見表2。

（2）質(zhì)譜條件。噴射流離子聚焦離子源，電噴霧正離子模式（ESI+）；多反應(yīng)監(jiān)測模式；氣簾氣：溫度為150 ℃，流速為11 mL·min-1；霧化氣壓力：30 psi；鞘氣：溫度為325 ℃，流量為11 mL·min-1；毛細(xì)管電壓：3 000 V；其他質(zhì)譜參數(shù)見表3。

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)

分別配制溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，農(nóng)藥含量（X）為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，用以評價方法的基質(zhì)效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)η=（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率-溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率）／溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率×100%。當(dāng)|η|＜10%時，表明無明顯基質(zhì)效應(yīng)；否則有明顯的基質(zhì)增強(qiáng)或減弱效應(yīng)。由表4可知，溴螨酯、氯菊酯、綠谷隆的基質(zhì)效應(yīng)系數(shù)分別為60.00%、-26.24%、33.33%，有明顯的基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)采用基質(zhì)匹配標(biāo)曲進(jìn)行定量分析。

2.2 加標(biāo)回收率

樣品中各農(nóng)藥的初檢結(jié)果見表5。分別稱取3份空白樣品，分別加入混標(biāo)溶液，按照樣品處理方法處理空白樣，獲得加標(biāo)待測液，上機(jī)測定，結(jié)果見表6。低、中、高3個水平加標(biāo)回收率在86.9%～111.5%，滿足回收率質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（70%～120%）要求，RSD在0.6%～9.2%，小于10%，本試驗的重現(xiàn)性較好。

2.3 人員與儀器方法比對

分別由檢驗員A、B按照樣品處理方法處理能力驗證樣品，分別進(jìn)行GC-MS與HPLC-MS/MS測定，人員比對相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在5.7%～9.7%；不同儀器方法測定結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.37%～4.43%，均滿足相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在10%以內(nèi)的質(zhì)控要求。詳情見表6。

2.4 能力驗證考核結(jié)果

11種農(nóng)藥含量測定考核結(jié)果的|Z|值均小于2，這表明本次測定上報的結(jié)果與所有上報結(jié)果的中位值相對接近，且與指定值的偏差較小，說明測定結(jié)果具有良好的準(zhǔn)確性，本實驗室農(nóng)藥殘留檢測能力驗證結(jié)果合格。

3 結(jié)論與討論

本實驗室參加了英國FAPAS組織的草莓中多種農(nóng)藥殘留檢測能力驗證項目，所有目標(biāo)物均取得滿意的結(jié)果，并且|Z|≤0.6，比標(biāo)準(zhǔn)要求的|Z|≤2更加優(yōu)異。這得益于本實驗室嚴(yán)苛的質(zhì)量管理體系，另外本實驗室的一些經(jīng)驗和質(zhì)控手段也是能力驗證取得滿意結(jié)果的關(guān)鍵?；诖?，總結(jié)了此次能力驗證檢測過程中質(zhì)量控制的關(guān)鍵點(diǎn)。

（1）做好前期策劃和準(zhǔn)備。本實驗室一接收到樣品，質(zhì)量負(fù)責(zé)人迅速召集實驗室人員進(jìn)行能力驗證的分析和策劃，包括人員安排、儀器設(shè)備選擇、方法選擇、樣品基質(zhì)分析、標(biāo)準(zhǔn)品的選擇和確定。

（2）優(yōu)化樣品前處理方法。本次能力驗證樣品采用QuEChERS前處理技術(shù)，大大簡化了前處理過程，縮短了前處理時間，提高了國標(biāo)方法的適用性和檢測效率。

（3）利用譜庫迅速定性。對樣品進(jìn)行直接分析，結(jié)合譜庫信息實現(xiàn)對未知樣品的快速初篩，基于樣品出峰保留時間和離子豐度比與譜庫參數(shù)的匹配程度，實現(xiàn)對目標(biāo)化合物的初步定性。實驗室應(yīng)該不斷豐富譜庫參數(shù)信息，確保譜庫的完整性和準(zhǔn)確性，保證篩選目標(biāo)化合物的全面性。

（4）實施嚴(yán)格的質(zhì)控措施。本實驗室采用雙人平行測定，同時使用GC/MS與HPLC/MS/MS進(jìn)行方法確證。根據(jù)檢測方法定量限及分析樣品預(yù)估濃度，確定系列標(biāo)曲的線性范圍。

（5）確保檢驗過程中所使用量器和儀器的準(zhǔn)確度和精密度是保證檢驗結(jié)果可靠性的重要環(huán)節(jié)。根據(jù)檢驗要求，選擇適合的量器和通過檢定校準(zhǔn)的儀器，確保測量結(jié)果在誤差范圍內(nèi)（樣品添加回收率在80%～120%）。確保實驗的重現(xiàn)性良好，如果重現(xiàn)性不好，則查找原因進(jìn)行改正，確保方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。

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作者簡介：莫秋岸（1988—），女，海南文昌人，本科，工程師。研究方向：食品中農(nóng)獸藥殘留檢測。

通信作者：唐帥（1986—），男，海南澄邁人，本科，工程師。研究方向：食用農(nóng)產(chǎn)品檢測和食品營養(yǎng)與衛(wèi)生、實驗室質(zhì)量管理。E-mail： 527474481@qq.com。