【摘要】 目的：探討外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、B細(xì)胞及白細(xì)胞介素-6（IL-6）在不同分期慢性腎臟?。╟hronic kidney disease，CKD）患者中的表達(dá)及臨床意義。方法：選取鹽城市中醫(yī)院腎內(nèi)科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者設(shè)為CKD組，另外選擇同期21例健康體檢者設(shè)為對(duì)照組，其中CKD組患者根據(jù)腎小球?yàn)V過率水平分為CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組。用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群（CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞）、NK細(xì)胞、B細(xì)胞，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測IL-6水平。比較以上指標(biāo)在不同分期CKD患者中的表達(dá)，并采用Spearman相關(guān)性分析以上指標(biāo)與CKD嚴(yán)重程度的相關(guān)性。結(jié)果：CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞均明顯低于對(duì)照組，且CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞隨CKD嚴(yán)重程度加重逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組IL-6水平明顯高于對(duì)照組，且IL-6水平隨CKD嚴(yán)重程度加重逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；IL-6水平與CKD分期呈負(fù)相關(guān)，CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞與CKD分期呈正相關(guān)（Plt;0.05）。結(jié)論：隨著CKD進(jìn)展，患者的免疫功能受到顯著影響，外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6在評(píng)估CKD患者疾病進(jìn)展中有重要臨床意義。

【關(guān)鍵詞】 慢性腎臟病 T淋巴細(xì)胞亞群 白細(xì)胞介素-6

Expression and Clinical Significance of T Lymphocyte Subsets， NK Cell， B Cell and IL-6 in Peripheral Blood in Patients with Different Stages of Chronic Kidney Disease/SHI Hongjuan， MENG Xianjie， QIN Songlin. //Medical Innovation of China， 2024， 21（16）： 099-102

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinical significance of T lymphocyte subsets， natural killer cell （NK cell）， B cell and interleukin-6 （IL-6） in peripheral blood in patients with different stages of chronic kidney disease （CKD）. Method： A total of 80 patients with CKD stage 3-5 admitted to the Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital from October 2022 to June 2023 were selected as the CKD group， and 21 healthy subjects in the same period were selected as the control group. Patients in the CKD group were divided into CKD stage 3 group， CKD stage 4 group and CKD stage 5 group according to the glomerular filtration rate level. T lymphocyte subsets （CD4+ T cell， CD8+ T cell）， NK cell and B cell in peripheral blood were detected by flow cytometry， and IL-6 levels were detected by enzyme linked immunosorbent assay. The expression of the above indexes in patients with different stages of CKD were compared， and Spearman correlation was used to analyze the correlation between the above indexes and the severity of CKD. Result： CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly lower than those in control group， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell gradually decreased with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. The levels of IL-6 in CKD stage 3 group， CKD stage 4 group， CKD stage 5 group were significantly higher than that in control group， and the levels of IL-6 increased gradually with the severity of CKD， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. IL-6 level was negatively correlated with CKD stage， and CD4+ T cell， CD8+ T cell， NK cell and B cell were positively correlated with CKD stage （Plt;0.05）. Conclusion： With the progression of CKD， the immune function of patients is significantly affected， and peripheral blood T lymphocyte subsets， NK cell， B cell and IL-6 have important clinical significance in evaluating the disease progression of patients with CKD.

[Key words] Chronic kidney disease T lymphocyte subsets Interleukin-6

First-author's address： Department of Nephrology， Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital， Yancheng 224001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.16.021

慢性腎臟?。–KD）是一種長期且逐漸進(jìn)展的疾病，它對(duì)全球的健康和經(jīng)濟(jì)體系都帶來了沉重的負(fù)擔(dān)，該疾病與高血壓、糖尿病、心血管疾病及遺傳因素關(guān)系密切[1-2]，其診斷和分期多通過腎小球?yàn)V過率（GFR）等判斷[3]。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的數(shù)據(jù)，全球約有10%的人口受到CKD的困擾[4]，CKD對(duì)患者的生活質(zhì)量和生活預(yù)期造成了嚴(yán)重的負(fù)面影響。在早期階段CKD不會(huì)引起明顯的癥狀，CKD根據(jù)eGFR的范圍分為5期，第5期也稱為終末期腎?。‥SKD），此時(shí)患者的腎臟功能幾乎完全喪失，需要透析或腎移植來維持生命[5]。近年來，研究表明CKD的發(fā)病機(jī)制與免疫因素有密切的關(guān)系。T淋巴細(xì)胞、B細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）是免疫系統(tǒng)中的重要細(xì)胞，它們?cè)诰S護(hù)機(jī)體免疫功能和抵御感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用[6-7]。白細(xì)胞介素-6（IL-6）是一種重要的細(xì)胞因子，IL-6的表達(dá)增加與炎癥、免疫功能下降和心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)[8]。然而外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6在CKD病程中的表達(dá)及其與不同分期的關(guān)系尚未明確。本研究旨在探討外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6在不同分期CKD患者中的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取鹽城市中醫(yī)院腎內(nèi)科2022年10月—2023年6月收治的80例CKD 3～5期患者設(shè)為CKD組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）確診為CKD 3～5期；（2）未接受任何激素或免疫抑制劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）過敏體質(zhì)；（2）近期存在急性感染、外傷或其他急性疾?。唬?）合并心、肝、肺、腦等臟器功能障礙。同期另選擇21例健康體檢者設(shè)為對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：體檢結(jié)果顯示所有主要健康指標(biāo)（如血壓、膽固醇、血糖等）均在正常范圍。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）有精神健康問題；（2）有重度飲酒或藥物濫用史。CKD組根據(jù)文獻(xiàn)[9]《KDIGO慢性腎臟病評(píng)價(jià)及管理臨床實(shí)踐指南》進(jìn)行分期：患者GFR 30～59 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 3期組（n=27），患者GFR 15～29 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 4期組（n=29），患者GFRlt;15 mL/（min·1.73 m2）納入CKD 5期組（n=24）。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)?；颊呒敖】刁w檢者明確表示愿意參與研究，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞通過流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry）進(jìn)行檢測 （1）樣本準(zhǔn)備：采取2～4 mL外周血，離心。（2）細(xì)胞染色：將特定的熒光標(biāo)記的抗體與血樣中的細(xì)胞孵育，這些抗體能特異性結(jié)合到細(xì)胞表面的抗原上。例如，CD4抗體用于標(biāo)記輔助性T細(xì)胞（CD4+ T細(xì)胞），CD8抗體用于標(biāo)記細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CD8+ T細(xì)胞），CD56抗體用于標(biāo)記NK細(xì)胞，CD19抗體用于標(biāo)記B細(xì)胞。（3）流式細(xì)胞檢測：經(jīng)過染色的樣本單個(gè)細(xì)胞通過激光進(jìn)行照射，這些細(xì)胞上的熒光標(biāo)記抗體被光激活，從而發(fā)射出特定波長的熒光，流式細(xì)胞儀隨后捕獲這些熒光信號(hào)，并將信息傳遞給計(jì)算機(jī)系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和解讀。（4）數(shù)據(jù)分析：通過專用軟件，根據(jù)熒光強(qiáng)度來鑒定和計(jì)數(shù)T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞和B細(xì)胞。

1.2.2 IL-6通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）進(jìn)行檢測 （1）樣本準(zhǔn)備：采集患者靜脈血，經(jīng)離心后取上清血漿。（2）抗體包被：將特異性抗IL-6抗體加入ELISA試劑盤的孔內(nèi)，孵育后洗滌去除未結(jié)合的抗體。（3）樣本孵育：將血漿樣本加入包被抗體的孔中，孵育后洗滌去除未結(jié)合的成分。（4）酶標(biāo)抗體孵育：加入與IL-6特異性結(jié)合的熒光標(biāo)記的酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌去除未結(jié)合的抗體。（5）底物加入：加入底物，與酶標(biāo)抗體發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生顏色。（6）光度檢測：使用酶標(biāo)儀測量每個(gè)孔的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-6的濃度。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）比較不同分期CKD患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、IL-6的表達(dá)變化。（2）評(píng)估外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、IL-6與CKD分期的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行試驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較行F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間采用字2檢驗(yàn)。兩個(gè)變量之間關(guān)系使用雙變量相關(guān)分析，數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，用Spearman相關(guān)系數(shù)描述。Plt;0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基線資料

四組基線資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），具有可比性，見表1。

2.2 外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6表達(dá)情況

CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞均明顯低于對(duì)照組，且CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞隨CKD嚴(yán)重程度加重逐漸降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；CKD 3期組、CKD 4期組、CKD 5期組IL-6水平明顯高于對(duì)照組，且IL-6水平隨CKD嚴(yán)重程度加重逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。見表2。

2.3 外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6與CKD分期的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析顯示，IL-6水平與CKD分期呈正相關(guān)，CD4+ T、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞與CKD分期呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05），見表3。

3 討論

CKD臨床表現(xiàn)多樣，包括蛋白尿、水腫、疲勞、肌肉痙攣等，對(duì)患者的生活質(zhì)量產(chǎn)生重要影響，同時(shí)也會(huì)增加患者的心血管病風(fēng)險(xiǎn)[10-11]。在CKD患者中，免疫系統(tǒng)紊亂是一個(gè)常見的現(xiàn)象。T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞是免疫系統(tǒng)中的重要組成部分，它們?cè)诿庖邞?yīng)答、感染防御和炎癥調(diào)控中起著關(guān)鍵作用，CD4+ T細(xì)胞和B細(xì)胞主要參與免疫應(yīng)答的啟動(dòng)和調(diào)控；CD8+ T細(xì)胞和NK細(xì)胞則主要負(fù)責(zé)直接攻擊病原體和腫瘤細(xì)胞[12-15]。IL-6是一種參與炎癥和免疫反應(yīng)的細(xì)胞因子。

在本研究中，隨著CKD的進(jìn)展，CD4+ T細(xì)胞、CD8+ T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞在外周血中的表達(dá)明顯降低，結(jié)果表明隨著CKD的加重，患者可能出現(xiàn)免疫功能低下或免疫抑制，導(dǎo)致輔助性T細(xì)胞和B細(xì)胞的數(shù)目降低。由于這幾種細(xì)胞在啟動(dòng)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中起著關(guān)鍵作用，其數(shù)量的減少可能導(dǎo)致體內(nèi)對(duì)外來病原體的免疫應(yīng)答減弱，彭琪彥[16]和王漢敏等[17]的研究也證實(shí)了這一點(diǎn)。在王麗瓊等[18]和龔云等[19]的研究中，IL-6的表達(dá)隨著CKD的加重而增加，這與細(xì)胞毒性和炎癥反應(yīng)有關(guān)。外周血T淋巴細(xì)胞亞群的減少影響患者的抗感染能力，加劇感染性并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)，NK細(xì)胞和B細(xì)胞的減少同樣指示了CKD患者特有的免疫抑制狀態(tài)，這是由于慢性炎癥環(huán)境對(duì)這些免疫細(xì)胞的直接影響。

綜上所述，深入研究外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞及IL-6的表達(dá)，能夠更好地了解CKD在不同分期的病理機(jī)制，為制訂更精確的治療策略和預(yù)測疾病的進(jìn)展提供重要的依據(jù)。

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（收稿日期：2024-01-02） （本文編輯：陳韻）

*基金項(xiàng)目：鹽城市醫(yī)學(xué)科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（YK2021040）

①鹽城市中醫(yī)院腎內(nèi)科 江蘇 鹽城 224001

通信作者：秦松林