［摘要］目的探究NLRP1、NLRP3、Caspase-1在不同嚴重程度子宮內(nèi)膜異位癥（EMS）中的表達及其對預(yù)后的影響。方法選擇2017年2月至2020年2月在臨沂市人民醫(yī)院行腹腔鏡手術(shù)治療的244例EMS患者為研究組；按臨床分期，將患者分為Ⅰ～Ⅱ期162例，Ⅲ～Ⅳ期82例；另選同期因良性卵巢囊腫行腹腔鏡手術(shù)的77例患者為對照組，對比不同嚴重程度EMS患者異位內(nèi)膜組織中NLRP1、NLRP3和Caspase-1的表達情況。將244例EMS患者分為復(fù)發(fā)組37例與未復(fù)發(fā)組207例，通過單因素分析，初步篩選EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的影響因素，且采用多因素Logistic回歸分析，進一步篩選獨立危險因素。應(yīng)用Logistic回歸模型結(jié)合限制性立方樣條模型（RCS），分析EMS患者異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與預(yù)后復(fù)發(fā)的劑量-反應(yīng)關(guān)系。依據(jù)獨立危險因素構(gòu)建并驗證列線圖預(yù)測模型。結(jié)果EMS患者嚴重程度分期NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為9.827、4.916、4.258，P＜0.05）；生殖道感染NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為6.746、13.166、11.643，P＜0.05）。研究組不同嚴重程度異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為18.546、22.582、19.361，P＜0.05）。NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均在研究組Ⅳ期達到最高值，分別為4.30±0.62、5.59±0.77和2.66±0.68。復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組的EMS嚴重程度分期、生殖道感染、術(shù)前痛經(jīng)史的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為22.544、18.153、8.882，P＜0.05）；復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組的C反應(yīng)蛋白（CRP）、白細胞計數(shù)（WBC），以及異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t值分別為3.727、5.486、13.935、28.167、23.003，P＜0.05）。多因素Logistic回歸分析顯示，EMS嚴重程度分期（OR=1.476，95%CI：1.149～1.826）、生殖道感染（OR=1.256，95%CI：1.028～1.403），以及NLRP1 mRNA（OR=3.076，95%CI：1.363～4.371）、NLRP3 mRNA（OR=1.965，95%CI：1.685～2.354）、Caspase-1 mRNA（OR=2.245，95%CI：1.232～3.152）表達量均是EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（P＜0.05）。RCS模型分析顯示，在NLRP1 mRNA表達量為2.525（OR=3.076，95%CI：1.363～4.371）、NLRP3 mRNA表達量為3.402（OR=1.965，95%CI：1.685～2.354）、Caspase-1 mRNA表達量為1.877（OR=2.245，95%CI：1.232～3.152）處，發(fā)生預(yù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險最大。利用危險因素建立列線圖模型，模型具有良好的區(qū)分度、準確性。結(jié)論隨著NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA 及Caspase-1 mRNA表達量的升高，子宮內(nèi)膜異位癥預(yù)后復(fù)發(fā)的危險性隨之升高。嚴重程度分級、生殖道感染，以及NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA表達量均是子宮內(nèi)膜異位癥患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。

［關(guān)鍵詞］NOD樣受體蛋白1；NOD樣受體蛋白3；半胱氨酸蛋白酶1；子宮內(nèi)膜異位癥；預(yù)后

Doi：10.3969/j.issn.1673-5293.2024.11.007

［中圖分類號］R173［文獻標識碼］A

［文章編號］1673-5293（2024）11-0050-11

Expression of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 in endometriosis and

their impact on prognosis and recurrence

XIE Beibei CHENG Renying WANG Yongsheng YANG Gaoyuan ZHANG Jing ZHANG Yuanxia

（1.First Department of Gynecology，Linyi Peoples Hospital，Shandong Linyi 276000，China;

2.Department of Obstetrics，Linyi Peoples Hospital，Shandong Linyi 276000，China;3.Department of

Gynecology，Linyi Peoples Hospital，Shandong Linyi 276000，China）

［Abstract］ Objective To investigate the expression of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 in endometriosis （EMS） of different severity and their influence on prognosis. Methods A total of 244 patients with endometriosis who underwent laparoscopic surgery in our hospital from January 2017 to January 2020 were selected as the study group，including 162 patients in stage Ⅰ to Ⅱ group，82 patients in stage Ⅲ to Ⅳ group;the control group consisted of 77 patients with benign ovarian cysts undergoing laparoscopic surgery during the same period.The expressions of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 in three groups were compared.244 patients with EMS were divided into two groups：recurrence group （n=37） and non-recurrence group （n=207）.The factors influencing prognosis of EMS patients were preliminarily screened through univariate analysis，and then multivariate Logistic regression analysis was used to further screen independent risk factors.Logistic regression model combined with restricted cubic spline model （RCS） was used to analyze the dose-response relationship between the expressions of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 and prognosis of EMS patients.The nomogram prediction model was constructed and verified according to independent factors. Results There were significant differences in the expression distribution of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 in EMS patients with different severity stages （χ2 values were 9.827，4.916 and 4.258，respectively，P＜0.05）.There were significant differences in the distribution of NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 expression in EMS patients with and without reproductive tract infection （χ2 values were 6.746，

13.166 and 11.643，respectively，P＜0.05）.The expressions of NLRP1 mRNA，NLRP3 mRNA and Caspase-1 mRNA in endometrial tissues of different severity of ectopic in the study group were statistically significant compared with those in the control group （F values were 18.546，22.582 and 19.361，respectively，P＜0.05）.The expression levels of NLRP1 mRNA，NLRP3 mRNA，and Caspase-1 mRNA reached their highest values in stage IV of the study group，with values of 4.30±0.62，5.59±0.77，and 2.66±0.68，respectively.The distribution of EMS severity staging，reproductive tract infection，and preoperative history of dysmenorrhea was significantly different between the recurrence group and the non-recurrence group （χ2 values were 22.544，18.153 and 8.882，respectively，P＜0.05）;the levels of CRP，WBC，and the expression of NLRP1 mRNA，NLRP3 mRNA，and Caspase-1 mRNA in ectopic endometrial tissues were significantly different between the recurrence group and the non-recurrence group （t values were 3.727，5.486，13.935，28.167 and 23.003，respectively，P＜0.05）.Multivariate logistic regression analysis revealed that EMS severity staging （OR=1.476，95%CI：1.149-1.826），reproductive tract infection （OR=1.256，95%CI：1.028-1.403），and the expression levels of NLRP1 mRNA （OR=3.076，95%CI：1.363-4.371），NLRP3 mRNA （OR=1.965，95%CI：1.685-2.354），and Caspase-1 mRNA （OR=2.245，95%CI：1.232-3.152） were all independent risk factors for recurrence in EMS patients （P＜0.05）.RCS model analysis indicated that the highest risk of recurrence occurred at NLRP1 mRNA expression level of 2.525 （OR=3.076，95%CI：1.363-4.371），NLRP3 mRNA expression level of 3.402 （OR=1.965，95%CI：1.685-2.354），and Caspase-1 mRNA expression level of 1.877 （OR=2.245，95%CI：1.232-3.152）.The nomogram model was established by using the risk factors.The model has good discrimination and accuracy. Conclusion With the increase of NLRP1 mRNA，NLRP3 mRNA and Caspase-1 mRNA expression levels，the risk of prognosis recurrence of endometriosis increased.The severity grade，reproductive tract infection，NLRP1，NLRP3 and Caspase-1 expression levels are all independent risk factors for the prognosis and recurrence in EMS patients.

［Key words］ NLRP1;NLRP3;Caspase-1;endometriosis;prognosis

子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMS）常發(fā)于育齡期女性，是臨床中常見的婦科疾病，常伴隨痛經(jīng)、性交痛甚至導(dǎo)致不孕，嚴重影響患者的身心健康。腹腔鏡手術(shù)為治療EMS的主要方式，該方法有較好的治療效果，還可保留患者的生育功能，但也有患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)甚至病情加重的情況［1］，導(dǎo)致無法達到理想的治療效果。因此，探究EMS復(fù)發(fā)的危險因素至關(guān)重要。

炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致EMS異位病灶產(chǎn)生侵襲、增殖和分化［2］。炎癥小體核苷酸結(jié)合寡聚化域樣受體蛋白1（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 1，NLRP1）由感受器、凋亡相關(guān)斑點樣蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）和效應(yīng)蛋白半胱氨酸蛋白酶1（Caspase-1）所構(gòu)成的大分子多蛋白復(fù)合體組成，NLRP1特有的CARD結(jié)構(gòu)域能通過CARD-CARD相互作用直接結(jié)合Caspase-1，完成炎癥小體NLRP1的裝配［3］。相關(guān)研究顯示，人體的炎性小體NOD樣受體蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）也是炎癥反應(yīng)的重要組成部分，NLRP1和NLRP3作為炎癥反應(yīng)上游，激活Caspase-1，進而引起白細胞介素（IL）-1β和IL-18的成熟和分泌，并誘導(dǎo)細胞焦亡，引起炎癥反應(yīng)的放大［4］。目前NLRP1、NLRP3和Caspase-1在不同嚴重程度異位內(nèi)膜組織中的表達鮮有報道。因此，本研究將探討炎癥小體NLRP1、NLRP3及Caspase-1在不同嚴重程度EMS中的表達及對預(yù)后的影響，以期為EMS的臨床治療提供相應(yīng)的參考。

1研究對象與方法

1.1研究對象

回顧性分析2017年2月至2020年2月期間于臨沂市人民醫(yī)院行腹腔鏡手術(shù)治療的EMS患者244例為研究組；患者年齡為22～39歲，平均年齡（31.30±2.47）歲。根據(jù)美國生育協(xié)會（American Fertility Society，AFS）制定的EMS分期標準，對患者病變累及的部位、大小及粘連程度等進行評分，其中1～5分為Ⅰ期、6～15分為Ⅱ期、16～40分為Ⅲ期、＞40分為Ⅳ期；Ⅰ～Ⅱ期患者162例，Ⅲ～Ⅳ期患者82例。按照3∶1的比例，選取同期因良性卵巢囊腫行腹腔鏡手術(shù)的患者81例為對照組，其中失訪或中途退出的患者4例，對照組實際納入77例。

1.2納入與排除標準

納入標準：①明確診斷為EMS；②未接受過放、化療；③首次行腹腔鏡手術(shù)；④年齡≥18歲。排除標準：①合并免疫性疾?。虎趷盒阅[瘤患者；③入組前的3個月內(nèi)未服用過任何抗炎、激素或免疫調(diào)節(jié)類藥物；④月經(jīng)不規(guī)律。

本研究已經(jīng)通過臨沂市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批（2017020035）。

1.3研究方法

1.3.1臨床資料的收集

收集患者的年齡、體質(zhì)量指數(shù)（body mass index，BMI）、孕次、產(chǎn)次、吸煙史、飲酒史、流產(chǎn)史、陰道出血（除正常月經(jīng)以外的生殖系統(tǒng)出血）、生殖道感染（包括細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、霉菌性陰道炎）及術(shù)前痛經(jīng)史等一般臨床資料。

采集患者治療前清晨空腹（禁食8～12h）外周血5mL，離心（3 000rpm，15min）分離血清，檢測并記錄空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)PG）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）、白細胞計數(shù)（white blood cell count，WBC）、血小板計數(shù)（platelet count，PLT）、促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）、促卵泡激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）及抗苗勒氏管激素（anti-mullerian hormone，AMH）水平。

1.3.2手術(shù)方法

患者月經(jīng)干凈3～7天后進行手術(shù)。常規(guī)消毒鋪巾，氣管插管全身麻醉。患者取仰臥位，取臍輪緣橫切口，建立CO2氣腹，在腹腔鏡下將手術(shù)操作管套置入體內(nèi)，探查盆腹腔，鈍性分離粘連，合并卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫行剝除術(shù)及卵巢縫合成形，合并深部子宮內(nèi)膜病灶（deep infiltrating endometriosis，DIE）行切除術(shù)；同時行輸卵管通液術(shù)，檢查輸卵管的通暢度，電凝止血后，使用生理鹽水沖洗盆腔至沖洗液清亮后，常規(guī)縫合。術(shù)后根據(jù)患者具體情況，采用醋酸曲普瑞林（國藥準字：H20054351）治療，皮下注射3.75mg，每月1次，連用6個月。

1.3.3免疫組化及評估方法

腹腔鏡術(shù)后，用10%甲醛溶液固定異位內(nèi)膜組織，常規(guī)石蠟包埋后，4μm連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，用3%過氧化物酶阻斷劑去除內(nèi)源性過氧化物酶，微波下修復(fù)抗原；洗滌、封閉后，加入均以1∶200稀釋的NLRP1、NLRP3和Caspase-1抗體，于4℃過夜。次日，洗滌后加入生物素標記的二抗（1∶1 000），室溫下反應(yīng)1h，二氨基聯(lián)苯胺顯色、脫水、封片。

根據(jù)陽性細胞百分率和染色強度對NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達進行判定，陽性細胞分級包括：0級（0%，0分）、1級（≤10%，1分）、2級（11%～50%，2分）、3級（51%～80%，3分）和4級（＞80%，4分），染色強度評分包括：陰性（0分）、弱陽性（1分）、中等陽性（2分）和強陽性（3分）。以陽性細胞分級和染色強度評分乘積作為NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的最終評分，0～6分為低表達，7～12分為高表達。

1.3.4異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA和NLRP3 mRNA 及Caspase-1mRNA表達量

采用Trizol法提取異位內(nèi)膜組織總RNA，取2μg RNA采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA；以cDNA為模板進行實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)。擴增反應(yīng)的擴增參數(shù)為：95℃、5min，然后95℃、10s，60℃、20s，72℃、15s，40個循環(huán)，所得PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳，采用2-ΔΔCT法計算目的基因NLRP1 mRNA和NLRP3 mRNA及Caspase-1mRNA表達量。

1.3.5隨訪及預(yù)后的評估

對244例EMS患者術(shù)后隨訪3年，隨訪截止時間為2023年3月，多數(shù)患者的臨床癥狀有所緩解；其中37例患者接受治療6個月后病情復(fù)發(fā)甚至加重，將其納入復(fù)發(fā)組；另外207例未復(fù)發(fā)者納入未復(fù)發(fā)組。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差（x-±s）表示，計數(shù)資料以例數(shù)（百分率）［n（%）］表示，單因素分析采用χ2檢驗、t檢驗和F檢驗，將單因素分析中差異有統(tǒng)計學(xué)意義的因素（連續(xù)變量以中位數(shù)為取界值進行二分類）納入多因素Logistic回歸分析，以差異有統(tǒng)計學(xué)意義的變量為獨立危險因素。采用獨立危險因素構(gòu)建EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險的列線圖模型。采用限制性立方樣條模型（restricted cubic spline，RCS）分析NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與EMS預(yù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，對EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險列線圖模型的區(qū)分度進行檢驗。采用Bootstrap法對列線圖模型進行重復(fù)抽樣1 000次進行內(nèi)部驗證，采用一致性指數(shù)（consistency index，C-index）評價模型的區(qū)分度，C-index≥0.700表示模型區(qū)分度較好。以雙側(cè)P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 EMS患者臨床病理特征的免疫組化指標表達分布的對比

以各項免疫組化指標陽性細胞分級和染色強度評分，將其分為低表達與高表達。EMS患者嚴重程度分期NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為9.827、4.916、4.258，P＜0.05）；生殖道感染NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為6.746、13.166、11.643，P＜0.05）；而流產(chǎn)史、陰道出血、術(shù)前痛經(jīng)史、吸煙史、飲酒史的NLRP1、NLRP3及Caspase-1表達的分布比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2研究組不同嚴重程度異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA和NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與對照組的對比

2.2.1研究組與對照組的比較

研究組不同嚴重程度異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F值分別為18.546、22.582、19.361，P＜0.05）；NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均在研究組Ⅳ期達到最高值，分別為4.30±0.62、5.59±0.77和2.66±0.68，見表2。

2.2.2研究組各期的比較

研究組內(nèi)兩兩比較，結(jié)果顯示，研究組各分期患者異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA（t=2.258～22.473，P＜0.05）、NLRP3 mRNA（t=3.782～19.233，P＜0.05）及Caspase-1 mRNA（t=3.089～16.410，P＜0.05）表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。

2.2.3研究組各期與對照組的比較

研究組Ⅰ和Ⅱ期異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量與對照組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（研究組Ⅰ期與對照組：t值分別為1.393、1.398、1.652，P＞0.05；研究組Ⅱ期與對照組：t值分別為1.289、1.671、1.384，P＞0.05）；研究組Ⅲ期和Ⅳ期異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均明顯高于對照組，經(jīng)比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（研究組Ⅲ期與對照組：t值分別為25.710、25.836、12.604，P＜0.05；研究組Ⅳ期與對照組：t值分別為29.796、34.344、18.068，P＜0.05），見表2。

2.3 EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的單因素分析

復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組的EMS嚴重程度分期、生殖道感染、術(shù)前痛經(jīng)史的分布比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2值分別為22.544、18.153、8.882，P＜0.05）；復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組的CRP、WBC，以及異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t值分別為3.727、5.486、13.935、28.167、23.003，P＜0.05）；復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組的年齡、BMI、孕次、產(chǎn)次、FSH、LH、AMH、FPG、PLT，以及流產(chǎn)史、吸煙史、飲酒史、陰道出血的分布比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.4影響EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的多因素Logistic回歸分析

將篩選出的因素作為自變量并進行賦值，見表4；其中連續(xù)變量以中位數(shù)為取界值進行二分類，以EMS預(yù)后是否復(fù)發(fā)（是=1，否=0）為因變量進行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，EMS嚴重程度分期、生殖道感染、NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達量均是EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（P＜0.05），見表5。

2.5 EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)與NLRP1 mRNA和NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量的關(guān)系

采用4個節(jié)點的RCS模型分析NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達量連續(xù)變化與EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系；在NLRP1 mRNA表達量為2.525（OR=3.076，95%CI：1.363～4.371）、NLRP3 mRNA表達量為3.402（OR=1.965，95%CI：1.685～2.354）、Caspase-1 mRNA表達量為1.877（OR=2.245，95%CI：1.232～3.152）處，發(fā)生預(yù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險最大，見圖1。

2.6 EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險列線圖模型

將多因素Logistic回歸分析中引起EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的5個獨立危險因素作為預(yù)測因子構(gòu)建列線圖模型，預(yù)測EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險率，結(jié)果顯示，EMS嚴重程度分期為Ⅲ～Ⅳ期賦分57.07分，有生殖道感染賦分53.17分，NLRP1 mRNA表達量為4.26賦分29.29分，NLRP3 mRNA表達量為3.39賦分27.50分，Caspase-1 mRNA表達量為2.22賦分33.17分，所得總分為200.20分，對應(yīng)的列線圖模型預(yù)測EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險率為71.13%，見圖2。

2.7模型的驗證

繪制ROC曲線，對EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險列線圖模型的區(qū)分度進行檢驗，結(jié)果顯示，模型的實際C-index值為0.826，區(qū)分度良好，見圖3。采用Bootstrap重復(fù)抽樣方法對模型進行內(nèi)部驗證，結(jié)果顯示，EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險列線圖模型與實際發(fā)生風(fēng)險的平均誤差為0.012，準確度良好，校準曲線見圖4。

2.8不同NLRP1和NLRP3及Caspase-1表達情況對EMS患者術(shù)后復(fù)發(fā)的影響分析

采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，分析NLRP1、NLRP3和Caspase-1表達對患者術(shù)后復(fù)發(fā)的影響情況，結(jié)果顯示，免疫組化3項指標表達均會明顯影響EMS的復(fù)發(fā)，NLRP1、NLRP3和Caspase-1高表達的患者復(fù)發(fā)風(fēng)險更高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（高NLRP1與低NLRP1患者EMS比較，χ2=6.254，P＜0.05；高NLRP3與低NLRP3患者比較，χ2=7.024，P＜0.05；高Caspase-1與低Caspase-1患者EMS比較，χ2=5.717，P＜0.05），見圖5。

3討論

3.1 EMS中NLRP1和NLRP3及Caspase-1的表達

EMS的發(fā)病原因涉及到遺傳、內(nèi)分泌、免疫、炎癥及環(huán)境等多方面的因素，但目前尚不確定EMS發(fā)病的具體原因。炎癥小體可以對病原體和損傷相關(guān)分子模式的不同刺激信號進行識別，參與細胞焦亡及多種炎癥反應(yīng)［5-6］。炎癥小體包括NLRP1、NLRP3和NLRP7等，其中炎癥小體NLRP3參與多種疾病相關(guān)的炎癥反應(yīng)［7］，可以檢測各種有害刺激，如細菌、病毒等病原體，以及組織損傷信號，修復(fù)受損組織［8］。炎癥小體NLRP3可被多種信號激活，隨經(jīng)血逆流至腹腔的異位內(nèi)膜組織過表達β雌激素受體（estrogen receptor β，ERβ），ERβ與NLRP3炎癥小體結(jié)合并激活Caspase-1，引起Caspase-1活化，釋放IL-1β、IL-18［9］，炎性小體NLRP1與NLRP3作用類似，其活化后可促進IL-1β、IL-18、IL-33等炎癥因子的成熟和釋放，誘發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致組織損傷［10-11］。IL-1β可以擴大局部炎癥反應(yīng)的信號傳導(dǎo)，進一步介導(dǎo)子宮內(nèi)膜細胞的黏附、增殖與侵襲，最終導(dǎo)致EMS在宮腔外的發(fā)生及發(fā)展［12-14］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同嚴重程度患者異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，研究組Ⅲ期和Ⅳ期的NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均明顯高于對照組。NLRP1和NLRP3能夠感知細胞內(nèi)的危險信號并激活炎癥小體，進而觸發(fā)炎癥反應(yīng)。持續(xù)的炎癥反應(yīng)是EMS發(fā)生和發(fā)展的重要機制之一。因此，隨著病情的加重，NLRP1 mRNA和NLRP3 mRNA表達量增加，以響應(yīng)和調(diào)控炎癥反應(yīng)。Caspase-1作為炎癥小體激活后的下游效應(yīng)分子，在炎癥反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用，其能夠切割并激活多種促炎因子，如IL-1β和IL-18等，從而放大炎癥反應(yīng)。劉敏等［15］的研究也有類似發(fā)現(xiàn)，EMS中重度患者組血清半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶顯著高于輕度患者組和對照組。

3.2 EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)與NLRP1、NLRP3及Caspase-1的關(guān)系

腹腔鏡手術(shù)是EMS的首選治療方法，手術(shù)治療僅能清除肉眼可見的病灶，對于肉眼無法辨認的微小病灶難以徹底清除，導(dǎo)致手術(shù)后可能會出現(xiàn)復(fù)發(fā)、加重的情況［16］；其嚴重影響了患者的健康和生活質(zhì)量，同時進一步增加了治療的難度［17-18］。因此，尋找與EMS患者腹腔鏡手術(shù)治療預(yù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的指標尤為必要。本研究顯示，復(fù)發(fā)組患者異位內(nèi)膜組織中NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均明顯高于未復(fù)發(fā)組，其均為EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。王詩瑤等［2］關(guān)于炎性小體與EMS關(guān)系的研究中也有類似發(fā)現(xiàn)。本研究中采用RCS模型分析NLRP1mRNA、NLRP3mRNA 及Caspase-1 mRNA表達量與EMS預(yù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，隨著NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量的增高，EMS預(yù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險也逐漸升高，同時還發(fā)現(xiàn)EMS嚴重程度分期為Ⅲ～Ⅳ期也會明顯影響EMS預(yù)后復(fù)發(fā)。這與Kor等［19］的研究結(jié)果基本一致。EMS嚴重程度分期是其預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素，其中Ⅲ～Ⅳ期的患者預(yù)后復(fù)發(fā)率更高。

綜上所述，EMS嚴重程度分期為Ⅲ～Ⅳ期EMS患者異位內(nèi)膜組織中的NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量均明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，這可能是EMS嚴重程度的可靠指標。隨著NLRP1 mRNA、NLRP3 mRNA及Caspase-1 mRNA表達量升高，EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的危險性隨之升高。EMS嚴重程度分期、生殖道感染、NLRP3 mRNA、NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA表達量均是EMS患者預(yù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。本研究的樣本數(shù)量具有一定的局限性，未來的研究中將擴大樣本量，盡可能補足欠缺之處，以期為臨床提供更加精準的數(shù)據(jù)支持。

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［專業(yè)責(zé)任編輯：薛艷］

［中文編輯：王懿；英文編輯：劉昕田］