摘要：為掌握信宜市粵西卷羽雞與貴妃雞保種場禽白血病的感染情況，本試驗于2023年8—11月份，采用ELISA檢測方法對采自保種場的粵西卷羽雞2 223份蛋清，191份全血與貴妃雞3 284份蛋清，225份全血進行檢測，結(jié)果顯示，粵西卷羽雞的禽白血病陽性率為8.4%，貴妃雞的陽性率為2.7%。從檢測數(shù)據(jù)可知，粵西卷羽雞與貴妃雞保種場的禽白血病陽性率較高，要及時剔除陽性個體，進一步加強該病的淘汰凈化根除工作，有效控制疫病蔓延[1]。

關(guān)鍵詞：信宜地區(qū)；粵西卷羽雞；貴妃雞；酶聯(lián)免疫吸附；淘汰凈化；防疫建議

禽白血?。╝vian leukosis）是由禽 C 型反轉(zhuǎn)錄病毒群中的病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，在自然情況下以淋巴白血病最為常見，是致雞腫瘤的主要疾病，對養(yǎng)雞業(yè)危害巨大。根據(jù)病毒囊膜糖蛋白抗原差異[2]，禽白血病病毒（ALV）被分為 A、B、C、D、E、和 J等亞群。禽白血病病毒可通過垂直傳播又可水平傳播，它可引起患病雞生長受阻、免疫抑制[3]，或混合感染其他病毒性或細(xì)菌性疾病而導(dǎo)致大批禽只死亡，給養(yǎng)殖戶帶來較大的經(jīng)濟損失。

由于禽白血病病毒的復(fù)雜性、亞群多樣性及病毒基因組的高變異性，禽白血病造成機體免疫抑制或免疫耐受的分子機制仍未明確，至今也沒有控制其感染的有效藥物及疫苗，目前主要依靠種群凈化加以控制[4]。

為了解信宜地區(qū)卷羽雞及貴妃雞帶毒情況，本試驗采用北京明日達科技有限公司生產(chǎn)的禽白血病病毒雙抗夾心ELISA抗原檢測試劑盒和禽白血病病毒抗體檢測試劑盒（ALV－Ab）對雞群進行檢測調(diào)查，以期為粵西卷羽雞與貴妃雞保種場禽白血病的凈化防控提供參考[5]。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

樣品采集于粵西卷羽雞和貴妃雞保種場，其中貴妃雞蛋清3 284份，貴妃雞公雞全血225份，卷羽雞蛋清2 223份，卷羽雞公雞全血191份。

1.2 檢測試劑盒及方法

采用北京明日達科技有限責(zé)任公司生產(chǎn)的禽白血病病毒雙抗夾心ELISA抗原檢測試劑盒和禽白血病病毒A/B亞型、J亞型、K亞型抗體檢測試劑盒，按照說明書進行檢測[6]。

全血進行病毒分離培養(yǎng)后進行禽白血病病毒抗體檢測（公雞全血檢測結(jié)果由北京明日達科技有限公司檢測技術(shù)人員提供）。

1.3 檢測方法

1.3.1 樣本的采集與處理

在病毒分離前，需要采集公雞的血液樣本。采集的雞抗凝血樣品應(yīng)保存在 4℃環(huán)境下，采集的雞血液樣品應(yīng)盡快處理并接種DF-1細(xì)胞，保存期限最長不超過6 h，否則應(yīng)重新采樣。將雞抗凝血樣品轉(zhuǎn)移至滅菌離心管中，2 000 r/min離心2 min，備用。

1.3.2 接種細(xì)胞的準(zhǔn)備

取生長狀態(tài)良好的DF-1細(xì)胞，常規(guī)傳代消化，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個細(xì)胞/mL，接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔接種1 mL。待細(xì)胞生長至占細(xì)胞貼壁面70%時，棄去孔中的培養(yǎng)基，并用磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗細(xì)胞面三次后，可用于樣品的

接種。

1.3.3 雞血漿樣品的接種

將離心處理后的血液樣品用移液器吸頭輕輕旋轉(zhuǎn)上層血漿，使處于中層的白細(xì)胞懸浮于血漿中，吸取 100μL 血漿接種到DF-1細(xì)胞培養(yǎng)孔中，另設(shè)陰陽性對照孔，樣品孔做好標(biāo)記，并在每個細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入40μL 肝素鈉溶液，防止血漿凝固。

1.3.4 細(xì)胞的維持培養(yǎng)

將接種樣品后的細(xì)胞板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育3h后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)孔中液體，用200μL滅菌PBS潤洗細(xì)胞孔1 次，加入細(xì)胞維持培養(yǎng)液1 mL，繼續(xù)培養(yǎng)

7-9 d，在細(xì)胞狀態(tài)允許的條件下應(yīng)盡可能延長細(xì)胞維持培養(yǎng)的時間，以利于 ALV 在細(xì)胞上的增殖。在24孔培養(yǎng)板靠邊的樣品孔中多加入0.3 mL細(xì)胞維持培養(yǎng)液，以補償樣品孔的水分蒸發(fā)。

1.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）方法檢測 ALVp27抗原

應(yīng)按照NY/T680中規(guī)定的方法執(zhí)行或采用符合NY/T680 要求的商品化試劑盒進行檢測，并按照試劑盒說明書執(zhí)行。

1.4.1 間接免疫熒光抗體反應(yīng)（IFA）方法檢測ALV抗原

按照 GB/T 26436 中規(guī)定的方法執(zhí)行。

1.4.2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）方法檢測ALV核酸

應(yīng)按照GB/T 26436中規(guī)定的方法執(zhí)行。

2 檢測結(jié)果及分析

2.1 檢測結(jié)果（見表1）

2.2 檢測情況分析

通過檢測數(shù)據(jù)可知：卷羽雞總陽性率為8.4%，貴妃雞總陽性率2.7%。其中卷羽雞白血病的感染率最高。從感染禽白血病病毒的亞群看，貴妃（公）雞J和K型陽性率均為3.56%，卷羽（公）雞A、J和K亞型陽性率為3.14%、14.14%和20.94%。其中K型的陽性率相對較高，表明K型是該場的主要感染型，需要進一步監(jiān)測和凈化[7]。

此外，該養(yǎng)殖場白血病感染率高于國家1%的凈化標(biāo)準(zhǔn)，從陽性數(shù)和陽性率來看，該場的禽白血病感染情況較為嚴(yán)重，需要加強防控措施，包括對禽類和動物的健康監(jiān)測以及減少污染等措施[8]，以確定是否存在其他潛在問題。

3 快速檢測的優(yōu)點

3.1 準(zhǔn)確性和可靠性是關(guān)鍵

禽白血病檢測技術(shù)的準(zhǔn)確性是防控疾病的關(guān)鍵。只有準(zhǔn)確的檢測才能為防控措施提供有力的依據(jù)。同時可靠性也至關(guān)重要，因為任何誤診或漏診都可能給家禽產(chǎn)業(yè)帶來不可估量的損失。因此，我們需要不斷優(yōu)化檢測技術(shù)，提高檢測準(zhǔn)確性和可

靠性[9]。

3.2 快速簡便的檢測方法

在面對大規(guī)模家禽養(yǎng)殖時，快速簡便的檢測方法顯得尤為重要?？焖贉?zhǔn)確地檢測疫病有助于防控部門及時采取科學(xué)合理的防控措施，給養(yǎng)殖戶減少損失。同時，簡便的操作方法也便于基層工作人員掌握和使用。因此，我們需要不斷探索和開發(fā)快速簡便的檢測方法。

3.3 多種方法聯(lián)合使用更具優(yōu)勢

由于每種檢測方法都有其優(yōu)缺點，因此采用多種方法聯(lián)合使用較單一檢測更具優(yōu)勢，提高檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。例如，可以將病原學(xué)檢測和血清學(xué)檢測結(jié)合起來，或者將血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測結(jié)合起來，提高檢測的準(zhǔn)確率，以實現(xiàn)更全面的檢

測效果[10]。

4 防控建議

禽白血病在地方品種雞群中流行較廣，及時接種疫苗，減少感染率和建立禽白血病凈化種雞群是防治本病最有效的措施。建議做好以下幾點：

（1）定期監(jiān)測是初步診斷手段。定期進行禽類和動物健康狀態(tài)監(jiān)測，包括血液檢查、組織病理學(xué)檢查等，以便及時發(fā)現(xiàn)和診斷禽白血病的手段之一。

（2）防止水平傳播。種蛋及雛雞必須來自無無疫病的雞場；為避免交叉感染，不同月齡的雛雞和成雞實行分群飼養(yǎng)，雛雞與成雞分群，采用全進全出的飼養(yǎng)管理制度；飼料、用具分開，實行嚴(yán)格的消毒制度，經(jīng)常進行噴霧消毒，及時處理糞便，切斷禽白血病傳播途徑。

（3）嚴(yán)防垂直傳播。對于禽類和動物繁殖場要加強檢測淘汰措施，制定禽白血病凈化方案，定期對種雞和種蛋檢測，及時淘汰陽性種雞，逐步建立禽白血病凈化種雞群，防止禽白血病病毒通過免疫、受精或種蛋傳播給下一代。

（4）嚴(yán)格生物安全措施。定期評估養(yǎng)殖場生物安全防護水平，確保各項防疫措施、制度有效執(zhí)行。嚴(yán)禁混養(yǎng)不同動物。養(yǎng)殖場嚴(yán)格人員、車輛、物品的進出管理以及動物流動。供應(yīng)優(yōu)質(zhì)全價飼料，為種雞免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育創(chuàng)造良好的飼料品質(zhì)和衛(wèi)生條件。同時引入無針頭注射器，盡量減少免疫過程中的應(yīng)激反應(yīng)，增強家禽抵抗力。

（5）做好其他病種的免疫工作。如：馬立克氏病、傳染性法氏囊等疫病，這能引起免疫抑制，降低機體對禽白血病病毒的抵抗力，誘發(fā)禽白血病。

（6）在預(yù)防和控制禽白血病的過程中，應(yīng)注重地區(qū)合作和信息共享。及時了解國內(nèi)外禽白血病的流行趨勢和防控策略，有助于提高養(yǎng)禽業(yè)的防控。

（7）在未來研究中，應(yīng)關(guān)注ALV基因序列變異與禽白血病發(fā)病機制之間的關(guān)系，為開發(fā)新型防控藥物和治療方案提供理論支持。同時加強跨學(xué)科合作，推動禽白血病研究領(lǐng)域的不斷發(fā)展。

5 結(jié)論

本次調(diào)查采用商品化 ELISA 試劑盒對粵西卷羽雞和貴妃雞保種場的血清和蛋清樣品進行了ALV-A、ALV-J和ALV-K血清抗體和P27抗原的個體陽性率檢測分析，結(jié)果表明卷羽雞和貴妃雞雞群 ALV 感染普遍存在，感染的亞群及其陽性率各不相同，調(diào)查結(jié)果為信宜市開展禽白血病防控、凈化提供一定的理論依據(jù)。鑒于目前對禽白血病無相關(guān)的疫苗進行免疫及特效的治療藥物，對 ALV 定期監(jiān)測、淘汰陽性雞是凈化養(yǎng)殖場控制 ALV 傳播的重要途徑，建立凈化的雞場，以防止該病的傳播。

參考文獻

[1] 李乃賓，楊芬霞，杜炳旺，等.麒麟雞（卷羽雞）體尺性狀與屠宰性能的測定及相關(guān)性分析[J].中國畜牧獸醫(yī)，2014，41（8）：193-197.

[2] 王萍，陶林，陳潔波，等.麒麟雞（卷羽雞）16周齡體尺與屠宰性能測定及相關(guān)性分析[A].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家禽學(xué)分會第九次代表會議暨第十六次全國家禽學(xué)術(shù)討論會[C].2024：67-68.

[3] 李昕鍵，李廣偉，嚴(yán)一銘，等.2014～2015年廣東省

5個黃羽肉種雞場禽白血病感染情況調(diào)查[J].中國家禽，2015，37（22）：72-74.

[4] 李乃賓，杜炳旺，楊芬霞，等.麒麟雞（卷羽雞）12周齡血液生理生化指標(biāo)的測定與分析[A].第四屆（2014）中國黃羽肉雞行業(yè)發(fā)展大會[C].2024：99-100.

[5] 冷畢丹，吳元俊，秦麗莉，等.廣西主要地方優(yōu)良品種雞禽白血病的感染情況調(diào)查[J].廣西畜牧獸醫(yī)，2013（3）：148-149.

[6] 陳光榮，方鑫.雞場禽白血病感染的情況調(diào)查[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘，2016（5）：117.

[7] 趙勝杰，冉曉龍，盛敏.河南省規(guī)模雞場禽白血病感染情況調(diào)查[J].中國畜禽種業(yè)，2023，19（1）：95-96.

[8] 姬向波，楊朋坤，陳中衛(wèi)，等.河南地方品種雞禽白血病病毒感染狀況的調(diào)查[J].中國獸醫(yī)雜志，2018，54（8）：25-27+32.

[9] 鄭麥青，李鵬，劉澤，等.廣東地區(qū)規(guī)模化雞場地方雞種禽白血病凈化的初步研究[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2018，38（12）：2301-2305+2310.

[10] 沈海玉，許明，李尚民，等.地方特色蛋雞配套系中禽白血病感染調(diào)查及病原的分離與鑒定[A].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家禽分會[C].2015：111-113.