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        溴氰菊酯酶聯(lián)免疫吸附分析和膠體金免疫層析分析方法的建立

        2024-09-05 00:00:00崔盼盼王貴繡吳艷玲張召賢丁園華修德
        分析化學(xué) 2024年6期
        關(guān)鍵詞:單克隆抗體溴氰菊酯

        摘要 制備了9 株分泌溴氰菊酯單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,選取靈敏度最高的單克隆抗體4D4E11 建立了間接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析方法(ic-ELISA)和膠體金免疫層析分析方法(LFIA)用于檢測溴氰菊酯。ic-ELISA 的最優(yōu)工作溶液為0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖溶液(PB, NaH2PO4/Na2HPO4, pH 7.4),含20%甲醇和0.2 mol/L NaCl;LFIA 的最優(yōu)工作溶液為0.01 mol/L PB 緩沖溶液(pH 7.4),含5‰ Tween-20、10%甲醇和1 mol/L NaCl。在最優(yōu)條件下, ic-ELISA 對溴氰菊酯的半數(shù)抑制濃度(IC50)為10.60 ng/mL,檢出限(IC10)為1.43 ng/mL;LFIA 對溴氰菊酯的可視檢出限為0.5 μg/mL。特異性評價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, ic-ELISA 和LFIA 對溴氰菊酯的8 種結(jié)構(gòu)類似物無明顯交叉反應(yīng),特異性強(qiáng)。采用Ic-ELISA 檢測番茄、結(jié)球甘藍(lán)和油麥菜添加樣品的平均回收率為79.8%~92.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%~5.5%;采用LFIA 檢測番茄、油麥菜和結(jié)球甘藍(lán)添加樣品的結(jié)果與添加濃度相符。此外, ic-ELISA 和LFIA 對油麥菜盲樣中溴氰菊酯的檢測結(jié)果與高效液相色譜的檢測結(jié)果一致。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,建立的ic-ELISA 和LFIA 靈敏度高、準(zhǔn)確性好,為農(nóng)產(chǎn)品中溴氰菊酯殘留的快速檢測提供了新方法。

        關(guān)鍵詞 溴氰菊酯;單克隆抗體;間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法;膠體金免疫層析法

        溴氰菊酯(Deltamethrin)屬于Ⅱ型擬除蟲菊酯類殺蟲劑,被廣泛用于防治蔬菜、棉花和果樹上的甜菜夜蛾、棉鈴蟲和食心蟲等。由于有機(jī)磷等高毒農(nóng)藥逐漸被禁用或限用,溴氰菊酯在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的用量逐年增長[1],在農(nóng)產(chǎn)品中常被檢出[2-4],膳食暴露風(fēng)險(xiǎn)大。研究表明,溴氰菊酯對鵪鶉、哥倫比亞搖蚊和斑馬魚等非靶標(biāo)生物具有發(fā)育毒性[5]、免疫毒性[6]、神經(jīng)毒性[7]、氧化毒性[8]和臟器毒性[9]。我國國標(biāo)《食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2763—2021)規(guī)定了溴氰菊酯在不同食品中的最大殘留限量(Maximum residue limit, MRL)為0.01~10 mg/kg[10]。因此,需加強(qiáng)對溴氰菊酯殘留的檢測,保障食品安全。

        目前,檢測溴氰菊酯殘留的常用儀器分析方法包括氣相色譜-質(zhì)譜法[11-12]、高效液相色譜(HPLC)-紫外檢測法[13-14]和HPLC-質(zhì)譜法[15]等。雖然這些方法具有靈敏度高、重復(fù)性好的優(yōu)勢,但設(shè)備昂貴、樣品前處理時(shí)間長且需要專業(yè)操作人員,不能用于高通量的現(xiàn)場檢測,無法滿足農(nóng)殘現(xiàn)場快速檢測的實(shí)際需求。

        基于抗原抗體識(shí)別的免疫檢測,如酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和側(cè)流免疫層析法(Lateral flow immunoassay, LFIA)等,具有快速、簡便和經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于小分子農(nóng)藥殘留的檢測??贵w作為免疫檢測的核心試劑,其性能影響分析方法的特異性和靈敏度。基于溴氰菊酯多克隆抗體的免疫檢測方法已有報(bào)道[16],如Lee 等[17]制備了溴氰菊酯的多克隆抗體,并建立了ELISA 方法,其半數(shù)抑制濃度(IC50)為17.5 ng/mL, 但該方法與氯氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯和苯醚菊酯有較高的交叉反應(yīng)率(Cross-reactivity, CR),分別為37.3%、9.5%、8.5%和6.8%。與多克隆抗體相比,可針對特定表位進(jìn)行設(shè)計(jì)且來源于單個(gè)B 細(xì)胞的單克隆抗體通常具有較高的特異性[18-19],同時(shí)具有可持續(xù)制備的優(yōu)勢。Queffelec 等[20]在溴氰菊酯芳香環(huán)上引入含有羧基的連接臂,合成了半抗原,制備出溴氰菊酯單克隆抗體,建立的間接競爭ELISA(ic-ELISA)方法的IC50 為500 ng/mL,與擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的CRlt;1%。ELISA 可同時(shí)定量檢測多個(gè)樣品,并能提供定量檢測結(jié)果。相比于ELISA, LFIA 通常只能提供半定量或定性的檢測結(jié)果,但其操作更簡單(一步法)、檢測時(shí)間更短(5~10 min),適合現(xiàn)場快速篩查[21]。目前,基于溴氰菊酯單克隆抗體的LFIA 尚未見報(bào)道。

        本研究制備了溴氰菊酯的單克隆抗體,并建立了ic-ELISA 和LFIA 方法,優(yōu)化了兩種方法的檢測條件,并對其靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性進(jìn)行了評價(jià)。此外,使用HPLC 對ic-ELISA 和LFIA 的可靠性進(jìn)行了驗(yàn)證。

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