張微 侯曉強 楊娜 楊秀平張微 侯曉強 楊娜 楊秀平

摘要目的：探討急性腦梗死（ACI）病人血清環(huán)狀RNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）表達情況，分析circ_HECTD1與病情嚴重程度的關系。方法：選取2020年9月—2021年11月開灤總醫(yī)院收治的ACI病人122例為ACI組，另選同期于本院體檢的健康志愿者122名為對照組。收集基本臨床資料，采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRTPCR）法檢測血清circ_HECTD1水平。Pearson法分析ACI病人血清circ_HECTD1水平與臨床資料及美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）評分的相關性；多因素Logistic回歸分析ACI嚴重程度的影響因素。結果：ACI組高血壓比例、空腹血糖、白介素（IL）6、IL1β、C反應蛋白（CRP）、白細胞計數(shù)（WBC）及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）；中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）；多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度神經缺損的危險因素（P＜0.05）；血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關（P＜0.05）。結論：ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重而增加，是中重度神經缺損的危險因素。

關鍵詞急性腦梗死；環(huán)狀RNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1；病情嚴重程度；白細胞介素；超敏C反應蛋白

doi：10.12102/j.issn.16721349.2024.06.035

急性腦梗死（ACI）為常見的腦血管疾病，又稱為缺血性腦卒中，嚴重影響病人的生活質量，給家庭和社會帶來沉重的負擔［1］。ACI是由于腦供血障礙、缺血、缺氧導致局部腦組織缺血壞死或軟化所致，占所有腦卒中病例的80%，具有高殘疾率和死亡率［23］。目前，盡管在溶栓和神經保護劑等治療策略方面取得了較大進展，但嚴重ACI病人的治療效果仍不理想，且盡早評估ACI病人的病情嚴重程度對疾病的治療及預后非常重要［4］。環(huán)狀RNA（circRNA）代表一組獨特的非編碼轉錄物，其形成共價閉合環(huán)，不具有5′端帽子和3′端多聚腺苷酸尾結構［5］，circRNA在細胞質中含量豐富，進化上保守且相對穩(wěn)定，這賦予了circRNA許多潛在功能［6］，事實上，許多circRNAs表達改變與各種腦血管疾病如缺血性腦卒中有著千絲萬縷的聯(lián)系［7］。Wu等［8］研究表明，高表達的circRNATLK1在ACI后的神經元損傷和神經功能缺損中發(fā)揮作用。早期研究表明，circRNAHECT結構域E3泛素蛋白連接酶1（circ_HECTD1）已被確定為高度特異性的circRNA，預測急性缺血性卒中復發(fā)風險的價值較高［9］。此外，敲低circ_HECTD1被證實可減輕腦缺血中的神經元損傷［10］，提示circ_HECTD1在ACI中具有重要作用。然而，circ_HECTD1在ACI中的表達變化及與ACI病情進展的關系尚未完全闡明。因此，本研究通過測定ACI病人血清circ_HECTD1的相對表達水平，并分析其與ACI病情嚴重程度的關系。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2020年9月—2021年11月我院收治的ACI病人，根據納入與排除標準篩選出122例作為ACI組，其中，男68例，女54例。另選同期122名于本院體檢的健康志愿者作為對照組，其中，男65名，女57名。ACI組納入標準：1）符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》［11］中ACI診斷標準；2）首次發(fā)病，發(fā)病至入院時間＜24h；3）臨床資料完整；4）病人或家屬知情同意。排除標準：1）合并惡性腫瘤或其他血液疾病者；2）肝腎功能嚴重不全者；3）精神疾病病人；4）不能配合研究者；5）有近期手術、感染史者。

1.2方法

1.2.1臨床資料收集

收集ACI病人及健康志愿者性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙、飲酒、白細胞介素（IL）6、IL1β、空腹血糖、三酰甘油（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDLC）、C反應蛋白（CRP）、高密度脂蛋白膽固醇（HDLC）及白細胞計數(shù)（WBC）等資料。

1.2.2circ_HECTD1指標檢測

采集病人（入院翌日清晨）及健康者（體檢當日）空腹靜脈血5mL，于室溫下靜置15min，置于離心機中以3000r/min速率離心15min，取離心后上清液于無菌管，分為兩份，置于－80℃冰箱中保存待測。取一份血清樣本，室溫解凍，依據Trizol試劑（北京索萊寶科技有限公司提供）說明提取血清總RNA；測定總RNA純度及濃度，按照逆轉錄試劑盒（易錦生物提供）步驟逆轉錄，合成cDNA；采用ABI7500型實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qRTPCR）儀（美國ABI公司）檢測血清中circ_HECTD1表達水平。以甘油醛3磷酸脫氫酶（GAPDH）為內參，引物序列：circ_HECTD1正向引物為5′CACGTGTTATCAGGGGCCT3′，反向引物為5′CGCCACCCTTGCTTTTCAT3′；GAPDH正向引物為5′GCACCACCAACTGCTTA3′，反向引物為5′GCCATCCACAGTCTTCT3′。各樣品重復3次，減小實驗誤差，2－△△Ct法（Ct為循環(huán)閾值）計算circ_HECTD1表達。

1.2.3IL6、IL1β、CRP檢測

另一份血清樣本用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測IL6、IL1β、CRP。各步操作均遵照試劑盒（上海哈靈生物科技有限公司）說明書進行。

1.2.4分組

ACI組48h內依據美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（NIHSS）進行評分，以評估病人神經功能缺損程度。根據NIHSS評分，分為輕度組（NIHSS評分＜4分，54例）、中度組（NIHSS評分4～15分，56例）、重度組（NIHSS評分＞15分，12例）。

1.3統(tǒng)計學處理

采用SPSS25.0軟件包進行統(tǒng)計學處理。定性資料采用χ2檢驗；符合正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；多組間比較采用單因素方差分析，兩組間進一步比較采用SNKq檢驗；相關性分析采用Pearson法；采用多因素Logistic回歸分析ACI嚴重程度的影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1ACI組與對照組一般資料比較

ACI組高血壓比例、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于對照組（P＜0.05）。詳見表1。

2.2不同病情嚴重程度ACI病人一般資料比較

中度組、重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組（P＜0.05）。詳見表2。

2.3多因素Logistic回歸分析

以ACI病人神經功能缺損程度為因變量（輕度＝0，中重度＝1），將單因素分析中差異有統(tǒng)計學意義的指標作為自變量［年齡、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC及circ_HECTD1以實測值輸入，糖尿病（否＝0，是＝1）、吸煙（否＝0，是＝1）］，納入多因素Logistic回歸分析，結果顯示，糖尿病、IL6、IL1β及circ_HECTD1均是ACI病人中重度功能缺損的危險因素（P＜0.05）。詳見表3。

2.4血清circ_HECTD1水平與部分臨床資料及NIHSS評分的相關性

血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關（r值分別為0.311，0.330，0.401，0.541，0.473，0.579，P均＜0.05）。詳見表4。

3討論

ACI發(fā)病率極高［2］，尤其近年來隨著老齡化的加劇和生活水平的提高，腦血管、糖尿病、高血壓等疾病的發(fā)病率逐步提升，腦血管疾病發(fā)病率及致殘率、致死率隨之增高［3，12］。因此，對于ACI嚴重程度的評估非常重要，可以給予相應治療，降低ACI的殘疾率和死亡率。

本研究顯示，ACI組高血壓比例及空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC水平均高于對照組，說明高血壓、空腹血糖、IL6、IL1β、CRP、WBC可能與ACI的發(fā)病有關。高血壓負調節(jié)血管功能，動脈粥樣硬化與高血壓有關，而脂質代謝紊亂又與高血糖緊密相關，二者均可引起和加重腦梗死，導致腦組織損傷［13］。CRP、WBC、IL6、IL1β是炎癥反應的重要指標，其水平升高是造成神經元損傷的重要原因，參與ACI發(fā)病過程［14］。由于基因表達的調節(jié)效力和分子結構的特異性，circRNA已被證實是人類疾病中有前景的生物標志物［15］。相關研究證實circRNAs的失調可能參與腦梗死過程［1617］。本研究發(fā)現(xiàn)，ACI組血清circ_HECTD1水平高于對照組，與相關研究結果［12］具有一致性，說明circ_HECTD1與ACI的發(fā)生有關，circ_HECTD1高表達與腦梗死過程中不可逆的神經元損傷有關［18］，具體機制仍待進一步研究。

本研究分析不同ACI嚴重程度病人血清circ_HECTD1水平發(fā)現(xiàn)，病情越嚴重血清circ_HECTD1水平越高，提示circ_HECTD1與ACI疾病嚴重程度密切相關，且是ACI中度、重度神經功能缺損的危險因素，提示circ_HECTD1可能參與ACI的發(fā)展。Zhang等［18］研究表明，敲低circ_HECTD1可以改善氧葡萄糖剝奪/再灌注誘導的神經細胞損傷，推測circ_HECTD1可能通過調節(jié)神經細胞損傷參與ACI發(fā)展。ACI病人發(fā)病時，腦組織血氧嚴重不足，持續(xù)釋放大量氧自由基，神經細胞損失和凋亡嚴重［19］。本研究中，中重度組年齡、IL6、IL1β、空腹血糖、CRP、WBC及circ_HECTD1水平均高于輕度組。多因素Logistic回歸分析顯示，糖尿病、IL6、IL1β、circ_HECTD1均是中重度神經缺損的危險因素。其可能原因：糖尿病病人空腹血糖水平升高，可加劇ACI病人腦組織缺氧缺血程度，導致病情進一步惡化［20］。另外，炎性因子IL6、IL1β也會加重ACI病人的腦組織血管內皮損傷，破壞血腦屏障平衡，造成梗死區(qū)水腫，進一步壓迫正常腦組織，加劇神經缺損，導致ACI病情惡化［21］。相關性分析結果表明，血清circ_HECTD1水平與空腹血糖、WBC、IL6、IL1β、CRP及NIHSS評分均呈正相關，提示circ_HECTD1可能通過間接調控血糖、炎癥等影響ACI的病情嚴重程度。

綜上所述，ACI病人血清circ_HECTD1水平升高，且隨病情加重呈增高趨勢，是中重度神經缺損的危險因素。但本研究納入樣本量較少，且集中監(jiān)測某一時段問診病人，可能受環(huán)境條件影響，關于circ_HECTD1參與ACI病情進展的具體機制仍需進一步研究。

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（收稿日期：20220824）

（本文編輯郭懷?。?/p>

作者單位開灤總醫(yī)院（河北唐山063000）

通訊作者侯曉強，Email：pqmqh39@163.com

引用信息張微，侯曉強，楊娜，等.急性腦梗死病人血清circ_HECTD1表達與病情嚴重程度的關系［J］.中西醫(yī)結合心腦血管病雜志，2024，22（6）：11391142.