張正達(dá),王蘋蘋,胡龍飛,陳 靜,劉 佳,郭 莉,張 娜,郝智慧*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830052;2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京 100193;3.保定冀中藥業(yè)有限公司,河北保定 071000)

雞肺熱咳喘病證在臨床上以發(fā)熱、伸頸張口呼吸、甩鼻、喘鳴、咳嗽、咽喉腫脹等癥為特征[1]。感染此病后,雛雞生長緩慢或停滯,蛋雞產(chǎn)蛋量大幅度下降,導(dǎo)致較大經(jīng)濟(jì)損失[2-3]。 其致病機(jī)理是由于熱毒入侵肺經(jīng)所致,肺氣不宣,則呼吸不暢導(dǎo)致咳喘,肺氣清肅,肺失肅降,肺氣則會上逆,同樣造成咳喘,從而導(dǎo)致脾運(yùn)化受阻,肝腎氣血不足,最終咳喘加重[4-5]。由麻黃、炒苦杏仁、石膏、甘草、黃芩、板藍(lán)根、北豆根多種中藥組成的麻芩清熱止咳合劑,其在麻杏石甘口服液的基礎(chǔ)上加入了黃芩力助麻黃、石膏清肺熱,同時加入板藍(lán)根主清上呼吸道熱邪,北豆根清咽利喉,增強(qiáng)清熱、解毒之功,并助平喘、利咽之效,用于治療雞肺熱咳喘。本試驗參照《獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》(農(nóng)業(yè)部公告第 1596號)[6]與《畜禽用藥物靶動物安全性試驗指導(dǎo)原則》(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第 326 號)[7],以麻芩清熱止咳合劑推薦劑量(0.36 g/kg·bw)的1倍、3倍、5倍給試驗雞,以評價麻芩清熱止咳合劑應(yīng)用于肉雞的安全性,為其臨床安全用藥提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 120只雌雄各半的平均17日齡體重相近的健康愛拔益加肉雞(AA肉雞)。

1.1.2 藥品 麻芩清熱止咳合劑(批號:202004002),保定冀中藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 主要試劑 全血稀釋液(CELLPACK DCL),日本SYSMES公司產(chǎn)品。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(ALTL)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒(ASTL)、葡萄糖檢測試劑盒(GLUC3)、尿素/尿素氮檢測試劑盒(UREAL)、肌酐檢測試劑盒(CREJ2)、甘油三酯檢測試劑盒(TRIGL)、膽固醇檢測試劑盒(CHOL2),上海羅氏制藥有限公司產(chǎn)品。

1.1.4 主要儀器 高速冷凍離心機(jī)(Centrifuge 5920R),德國Eppendorf公司產(chǎn)品;全自動生化分析儀(Cobas 6000),瑞士Roche公司產(chǎn)品;全自動模塊式血液體液分析儀(Sysmex XN-1000),日本SYSMES公司產(chǎn)品;立式壓力滅菌器(SX-500),日本TOMY公司產(chǎn)品;生物顯微鏡(CX23),日本OLYMPUS公司產(chǎn)品;輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(YD-315)、全自動生物組織冷凍包埋機(jī)(YD-6L)、生物組織全自動脫水機(jī)(YD-12P)、生物組織攤烘烤一體機(jī)(YD-AB3)、全自動生物組織染色機(jī)(YD-700),均為浙江金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物分組與處理 選取120只雌雄各半、平均17日齡、體重相近的健康愛拔益加肉雞。在試驗開展前,對各組雞稱重,以體重為主要指標(biāo)用隨機(jī)數(shù)字法將試驗雞隨機(jī)分配到4個組,分別是1倍劑量組、3倍劑量組、5倍劑量組、空白對照組,每組30只。各組試驗雞以腳標(biāo)編號?？瞻讓φ战M正常飼養(yǎng),不給藥;試驗組按照麻芩清熱止咳合劑1倍、3倍、5倍的推薦劑量進(jìn)行混飲給藥,即0.36 g/kg·bw、1.08 g/kg·bw、1.80 g/kg·bw。自18日齡開始給藥,每天1次,連用10 d。用藥結(jié)束后連續(xù)觀察10 d。

1.2.2 臨床癥狀觀察 每天上午、下午逐只觀察并記錄試驗雞的臨床表現(xiàn),包括精神狀態(tài)、采食、飲水、糞便等,據(jù)實記錄。如有異常,詳細(xì)記錄異常情況表現(xiàn)和死亡雞數(shù),及時對死亡動物或臨床表現(xiàn)明顯異常的動物進(jìn)行剖檢確定死亡或異常原因。

1.2.3 血常規(guī)指標(biāo)測定 分別于給藥前、給藥結(jié)束后采集各組試驗雞翅下靜脈血,用EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝采血管采血1 mL,進(jìn)行血液常規(guī)檢測,主要包括血紅蛋白、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板。

1.2.4 血液生化指標(biāo)測定 分別于給藥前、給藥結(jié)束后采集各組試驗雞翅下靜脈血,用促凝采血管采血1 mL,進(jìn)行血液生化檢測,主要包括總蛋白、血清白蛋白、血糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總膽固醇、肌酐、尿素、總膽紅素、甘油三酯。

1.2.5 剖檢及病理組織學(xué)觀察 在給藥結(jié)束時和試驗結(jié)束時對5倍劑量組和空白對照組中各選取15只試驗雞處死,詳細(xì)檢查心、肝、脾、肺、腎等器官有無異常。每組選取6只雞進(jìn)行臟器采樣,并保存至10%的福爾馬林固定。常規(guī)方法制備病理切片,蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin,HE)后鏡檢。

2 結(jié)果

2.1 體重

各組試驗雞的體重變化見表1。麻芩清熱止咳合劑1倍、3倍、5倍劑量組給藥期和觀察期試驗雞的日均體重增長和空白對照組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

表1 體重測定結(jié)果

2.2 臨床觀察

給藥期間以及觀察期間各組試驗雞的采食、飲水、糞便、精神狀態(tài)等亦均未見異常,且無試驗雞出現(xiàn)死亡。

2.3 耗料量與料重比

試驗期間每天記錄各試驗組雞的耗料量,計算各組試驗雞在試驗期間料重比,詳見表2。在給藥期麻芩清熱止咳合劑1倍、5倍劑量組料重比略高于空白對照組,3倍劑量組料重比略低于空白對照組,在觀察期間麻芩清熱止咳合劑1倍、3倍、5倍劑量組料重比略低于空白對照組,均無明顯差異,且未顯示出劑量相關(guān)性,說明麻芩清熱止咳合劑基本不會影響試驗雞的正常生長。

表2 耗料量和料重比結(jié)果

2.4 血常規(guī)測定結(jié)果

各組試驗雞血常規(guī)測定結(jié)果見表3。血常規(guī)測定結(jié)果顯示:給藥后麻芩清熱止咳合劑5倍劑量組紅細(xì)胞數(shù)目顯著高于對照組紅細(xì)胞數(shù)目,推斷麻芩清熱止咳合劑高劑量可能有促進(jìn)紅細(xì)胞增多的功效,但需要進(jìn)一步試驗驗證;其他指標(biāo)(淋巴細(xì)胞百分比、血小板數(shù)量)升高或者降低雖然具有顯著性差異(P<0.05),但無明顯的規(guī)律性以及劑量相關(guān)性,且指標(biāo)數(shù)值均在雞正常指標(biāo)的參考范圍內(nèi)[8-9]。

表3 血常規(guī)測定結(jié)果

2.5 血液生化相關(guān)指標(biāo)

各組試驗雞的血液生化相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果見表4。血液生化相關(guān)指標(biāo)檢測顯示,試驗各組指標(biāo)升高或者降低雖具有顯著性差異(P<0.05),但無明顯的規(guī)律性以及劑量相關(guān)性?？梢哉J(rèn)為是試驗雞生長過程中血液指標(biāo)的正常波動[10-12]。

表4 血液生化指標(biāo)檢測結(jié)果

2.6 剖檢及病理切片觀察

給藥結(jié)束后和觀察期結(jié)束后分別取空白對照組和麻芩清熱止咳合劑5倍劑量組試驗雞進(jìn)行剖檢,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等臟器,均未發(fā)現(xiàn)明顯病變。對其心、肝、脾、肺、腎進(jìn)行病理組織學(xué)觀察(圖1至4)。5倍劑量組與空白對照組相比,脾臟細(xì)胞清晰無病變組織,肝細(xì)胞無腫大壞死等異常情況,腎結(jié)構(gòu)和腎小球形態(tài)正常,心肌細(xì)胞輪廓清晰,無異常情況,肺結(jié)構(gòu)完整,肺泡清晰可見。說明連續(xù)10 d混飲5倍推薦劑量的麻芩清熱止咳合劑對雞的主要臟器不會產(chǎn)生毒性作用及病理性損傷。

1.心臟;2.肝臟;3.脾臟;4.肺臟;5.腎臟1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心臟;2.肝臟;3.脾臟;4.肺臟;5.腎臟1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心臟;2.肝臟;3.脾臟;4.肺臟;5.腎臟1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

1.心臟;2.肝臟;3.脾臟;4.肺臟;5.腎臟1.Heart; 2.Liver; 3.Spleen; 4.Lung; 5.Kidney

3 討論

在治療雞肺熱咳喘病證上,麻杏石甘口服液應(yīng)用范圍較廣,具有一定的療效,但同時也發(fā)現(xiàn)其平喘效果顯著,但清熱解毒作用較弱,而治療雞肺熱咳喘主要方法是清熱解毒,宣肺平喘。在此基礎(chǔ)上,為適應(yīng)市場需求,研發(fā)麻芩清熱止咳合劑具有重要意義。本試驗以1倍、3倍、5倍的臨床推薦劑量給試驗雞混飲給藥,從受試雞的臨床反應(yīng)、組織病理學(xué)和生理生化指標(biāo)變化的特征等方面進(jìn)行安全性評價和評估。其中雞的臨床反應(yīng)可以直接反應(yīng)雞的生長狀況,血常規(guī)指標(biāo)與血液生化指標(biāo)是衡量機(jī)體生理及代謝狀況和重要器官功能狀態(tài)的重要依據(jù),也是疾病診斷和檢測的指標(biāo)之一[13-14]。結(jié)果顯示麻芩清熱止咳合劑按照每0.36 g/kg·bw、1.08 g/kg·bw、1.80 g/kg·bw飲水給藥,連用10 d,未引起試驗雞中毒或死亡;各組試驗雞的臨床表現(xiàn)、采食和飲水、血常規(guī)指標(biāo)、血液生化指標(biāo)、臟器觀察和組織切片均未見異常,說明1倍、3倍、5倍劑量的麻芩清熱止咳合劑不會影響機(jī)體的內(nèi)臟健康以及正常功能和代謝。綜上所述,麻芩清熱止咳合劑按1倍、3倍、5倍推薦劑量給藥對雞體無明顯毒副作用,臨床用藥安全可靠。