高 靜,周 峰 ,彭 程*,胥元鵬,王子堅,聶龍祁,張建春,熱孜婉,南金魚,陳學生,王新強

(1.甘肅省動物疫病預防控制中心,甘肅蘭州 730046;2.阿克塞縣畜牧獸醫(yī)技術服務中心,甘肅阿克塞 736400;3.酒泉市畜牧獸醫(yī)總站,甘肅酒泉 735000)

甘肅省阿克塞縣為駱駝養(yǎng)殖區(qū),因放牧中與布魯氏菌病牛、羊及其污染物接觸導致部分駱駝感染布病。疫苗免疫是控制布魯氏菌在駱駝之間傳播的有效方法[1]。研究表明,用流產(chǎn)布魯氏菌株S19(150)和羊布魯氏菌Ⅰ型接種單峰駱駝,幼齡(3個月)單峰駱駝接受全劑量疫苗,成年單峰駝(10歲)減少劑量。接種疫苗2到4周后,2組都產(chǎn)生了滴度在1∶25到1∶200之間的布魯氏菌抗體[2]。用于奶牛防控最有效的疫苗就是S19[3]。S19疫苗對人有致病力[4],不適用于懷孕動物和種公畜,免疫后抗體可持續(xù)10～11個月,干擾正常血清學檢測[5]。我國目前使用的A19疫苗就是從俄羅斯引入的S19[6],并且是早期使用的S19[7]。為了有效預防駱駝布病流行與發(fā)生,論文選用布魯氏菌活疫苗(A19株)開展駱駝的免疫試驗,試驗的劑量參照牛的免疫劑量用于駱駝免疫試驗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 阿克塞縣紅柳灣鎮(zhèn)大壩圖村2個養(yǎng)殖場1～3歲駱駝40頭,3～12月齡駱駝20頭,無布魯氏菌感染史,免疫前間隔2周連續(xù)采血,經(jīng)虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗檢測陰性。

1.1.2 主要試劑 布魯氏菌A19疫苗(批號2020009)、疫苗稀釋液(批號2020047),天康生物股份有限公司產(chǎn)品;虎紅平板凝集試驗抗原(批號010012011)、試管凝集試驗抗原(批號010042003)、陽性血清(批號010061901)、陰性血清(批號010051904),青島立見診斷技術發(fā)展中心產(chǎn)品。

1.1.3 主要儀器 恒溫培養(yǎng)箱,德國3M公司產(chǎn)品;生物安全柜,Heal force公司產(chǎn)品;高速離心機,德國Hevaeus公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 疫苗使用

(1)用法與用量:皮下注射。標準劑量每頭份含活菌數(shù)至少6.0×1010CFU(標準劑量)、減低劑量為1.0×109CFU(標準劑量的1/60)。

(2)標準劑量稀釋:稀釋標準劑量時吸取疫苗稀釋液對干粉疫苗進行對等稀釋,每毫升含一個標準劑量,蓋好瓶蓋。使用疫苗時,要使其充分混勻。

(3)減低劑量稀釋:0.2 mL標準劑量疫苗加入11.8 mL稀釋液即配成減低劑量(標準劑量的1/60)。

1.2.2 試驗分組

(1)選取3月齡至3歲以內(nèi)健康駱駝12峰,分4組(表1)做疫苗免疫安全試驗,按照標準劑量和減低劑量分四組進行頸部內(nèi)側皮下注射免疫,詳細觀察并做好免疫前后有關信息的記錄,包括精神狀態(tài)、飲食欲、體溫、呼吸、脈搏等變化情況,以及免疫后是否出現(xiàn)過敏反應及其他異常情況等。

表1 布魯氏菌A19株活疫苗免疫安全試驗分組

(2)根據(jù)不同年齡和疫苗免疫劑量分4個試驗組(表2),開展A19疫苗免疫試驗,在駱駝頸部內(nèi)側皮下注射免疫后23 d開始分多次進行免疫抗體效價測定。

表2 布魯氏菌活疫苗A19株免疫試驗分組

1.2.3 免疫抗體效價檢測 在免疫前、免疫后的23 d(1～3歲組)/38 d(3～12月齡組)、90、180、270和360 d,頸靜脈采集3 mL血液樣品,分離血清,以備檢測。檢測方法為虎紅平板凝集試驗(RBPT) (GB/T 18646-2018)用于血清樣品初篩;試管凝集試驗(SAT)(GB/T 18646-2018)用于陽性樣本復核[8]。

2 結果

2.1 安全性試驗

A19疫苗免疫后觀察并記錄駱駝發(fā)熱、呼吸、食欲等狀況,未出現(xiàn)過敏反應及其他異常情況。

2.2 抗體檢測

2.2.1 1～3歲駱駝標準劑量 按照標準劑量注射免疫A19疫苗的1～3歲試驗組,免疫后23 d,陽性率100%,凝集率100%(凝集∶抗體滴度≥1∶50,以下同);免疫后90 d,陽性率64.3%,凝集率78.6%;免疫后180 d,陽性率9.1%,凝集率36.4%;免疫后270 d,陽性率9.1%,凝集率18.2%;免疫后360 d,陽性率為0,凝集率10%(表3)。

表3 1～3歲駱駝標準劑量免疫抗體消長情況

2.2.2 1～3歲駱駝減低劑量 按照減低劑量注射免疫A19疫苗的1～3歲駱駝群,免疫后23 d,陽性率94.12%,凝集率94.10%;免疫后90 d,陽性率7.7%,凝集率15.4%;免疫后180 d,免疫抗體陽性率和凝集率均為0(表4)。

表4 1～3歲駱駝減低劑量免疫抗體消長情況

2.2.3 3～12月駱駝標準劑量 按照標準劑量注射免疫A19疫苗的3～12月齡駱駝群,免疫后38 d,陽性率50%,凝集率100%;免疫后90 d,陽性率為0,凝集率為33.3%;免疫后180 d,免疫抗體陽性率和凝集率均為0(表5)。

表5 3～12月齡駱駝標準劑量抗體消長情況

2.2.4 3～12月齡駱駝減低劑量 按照減低劑量注射免疫A19疫苗的3～12月齡駱駝群,免疫后38 d,陽性率16.7%,凝集率達100%;免疫后90 d,陽性率為0,凝集率16.7%;免疫后180 d,免疫抗體陽性率和凝集率均為0(表6)。

表6 3～12月齡駱駝減低劑量免疫抗體消長情況

3 討論

因布魯氏菌活疫苗(A19株)不能用于孕畜,本試驗選擇2月齡到3歲之間駱駝進行免疫試驗(阿克塞雙峰駝4歲開始配種),重點研究駱駝免疫布魯氏菌活疫苗A19株后安全性和抗體消長規(guī)律,從而選擇出適宜的免疫方案,為駱駝布病免疫防疫提供技術支撐,為實現(xiàn)駱駝健康養(yǎng)殖和駱駝產(chǎn)業(yè)良好發(fā)展保駕護航。駱駝感染布魯氏菌在埃及、蘇丹等國家也有流行病學研究,但臨床反應和抗體滴度效價明顯低于牛布魯氏菌病臨床反應[9]。本次疫苗免疫駱駝短期內(nèi)能產(chǎn)生很高的抗體滴度(1∶3 200),且免疫后轉(zhuǎn)陽率較高,證明駱駝對布魯氏菌活疫苗(A19株)相當敏感。本試驗表明,1～3歲組駱駝用標準劑量(6×1010CFU /頭)皮下注射布魯氏菌活疫苗(A19株)免疫效果最好。此外,免疫效果受動物年齡影響較大,對1歲以內(nèi)的幼齡駱駝免疫,轉(zhuǎn)陽率很低。