羅 蘭 張 鏢 曹穎男 鐘志勇 張素中*

糖尿病是一種由胰島素分泌不足或外周組織對(duì)胰島素不敏感而引起的以慢性高血糖為主要特征，蛋白質(zhì)、脂肪和電解質(zhì)等紊亂的終身性代謝性疾病。近年來(lái)，糖尿病的發(fā)病率顯著上升，已成為危害人類健康的“第三大殺手”，嚴(yán)重影響著患者的生命質(zhì)量[1]。因此對(duì)糖尿病的防治是醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題之一。交泰丸是一首治療心腎不交的著名中藥方劑，組方源自《韓氏醫(yī)通》，全方由黃連、肉桂（10∶1）兩味中藥組成。因其寒熱并用，療效突出，成為臨床常用的方劑之一，在治療失眠、抑郁和降低血糖、血脂方面取得了良好的效果[2-4]。但近年來(lái)有研究表明，黃連在臨床應(yīng)用中有較高的不良事件發(fā)生率與不良反應(yīng)發(fā)生率[5-6]?？梢?jiàn)，久服黃連降糖極有可能會(huì)對(duì)治療效果產(chǎn)生不可忽視的影響?？喙显谛晕丁w經(jīng)及成分類別方面與黃連相似，有研究顯示從苦瓜中分離出的苦瓜多肽-P（又稱植物胰島素），有顯著的降糖降脂作用[7-8]。此外，苦瓜屬于藥食同源的中藥，安全性方面比黃連高。本研究基于交泰丸的組方原則及其較好的臨床療效，采用苦瓜與肉桂配伍制備新交泰飲，探討其對(duì)2型糖尿病大鼠的降糖降脂作用，也為糖尿病高血脂患者的日常飲食提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)SD大鼠48只，體重120～150 g，雄性，由珠海百試通生物科技有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（粵）2020-0051，合格證號(hào)：44822700000115。飼養(yǎng)溫度維持在20～26 ℃，相對(duì)濕度：40%～70%，采用12 h∶12 h晝夜間斷照明。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物處置均符合動(dòng)物倫理標(biāo)準(zhǔn)（審批號(hào)：IAC202103030）。

1.1.2藥品新交泰飲組成藥物苦瓜（產(chǎn)地廣東，批號(hào)：2009001）、肉桂（產(chǎn)地廣西，批號(hào)：2010001）均購(gòu)于嶺南中藥飲片有限公司；鹽酸二甲雙胍片（中美上海施貴寶制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20023370，批號(hào)：AA88543，規(guī)格：0.5 g/片）；高脂高糖飼料（70.0%普通飼料+15.0%蔗糖+15.0%豬油）和普通飼料均由江蘇美迪森生物醫(yī)藥有限公司提供。

1.1.3試劑鏈脲佐菌素（streptozotocin, STZ）（批號(hào)：X17O10L100226）由上海源葉生物科技有限公司提供；強(qiáng)生穩(wěn)捷型血糖試紙（批號(hào)：3788423）由美國(guó)強(qiáng)生醫(yī)療器械有限公司提供；總膽固醇（total cholesterol, TC）測(cè)試盒（批號(hào)：20201011）、三酰甘油（triglyceride, TG）測(cè)試盒（批號(hào)：20201007）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）測(cè)試盒（批號(hào)：20201021）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C）測(cè)試盒（批號(hào)：20201021）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase, AST）測(cè)試盒（批號(hào)：20201015）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase, ALT）測(cè)試盒（批號(hào)：20201027），由南京建成生物工程研究所提供；大鼠腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factoralpha, TNF-α）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20201103）、白細(xì)胞介素6（interleukin 6, IL6）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20210122）和α-葡萄糖苷酶（a-glucosidase, α-GC）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20201228）由北京百奧萊博科技有限公司提供；胰島素放射免疫分析試劑盒（批號(hào)：111220）由北京北方生物技術(shù)研究所提供；葡萄糖（分析純）、檸檬酸（分析純）等試劑由廣州化學(xué)試劑廠提供。

1.1.4主要儀器分析天平（ME104E，瑞士梅特勒-托利多國(guó)際有限公司）；血糖測(cè)量?jī)x（OneTouch UltraEasy，美國(guó)強(qiáng)生醫(yī)療器械有限公司）；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（SpectraMax iD3，美國(guó)Molecular Devices公司）；高速離心機(jī)（Sigma 3-30k，德國(guó)Sigma有限公司）；恒溫培養(yǎng)箱（CO2，上海幕斯實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2 方法

1.2.1新交泰飲的制備按組方比例取苦瓜500 g，肉桂50 g，置于圓底燒瓶，加10倍量體積水浸泡30 min后，水煎煮約1 h，過(guò)濾，濾渣加8倍量體積水煎煮約0.5 h，過(guò)濾，合并2次濾液，煎煮過(guò)程中采用揮發(fā)油提取器提取揮發(fā)油。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮濾液，將揮發(fā)油加入所得濃縮液中，在70 ℃水浴中攪拌均勻，使得藥液最終濃度約為1.4 g/ml，4 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2糖尿病大鼠的造模檢疫結(jié)束后，所有大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為正常組8只，繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)；其他大鼠為造模組，給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)2個(gè)月，造成肥胖模型。禁食12 h后，造模組一次性腹腔注射50 mg/kg STZ，注射后第5 天尾部采血，測(cè)定造模組大鼠在空腹?fàn)顟B(tài)下（禁食不禁水12 h）的血糖值，篩選血糖值＞11.0 mmol/L者為糖尿病模型大鼠。

1.2.3分組與給藥將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組、新交泰飲組（低、中、高劑量組），每組8只。具體分組及給藥如下：正常組和模型組給予0.9%氯化鈉注射液灌胃；二甲雙胍組予以100 mg/（kg·d）二甲雙胍溶液灌胃，該劑量以大鼠6倍于成人劑量（以60 kg成人1 g/d量）換算；新交泰飲低、中、高劑量組以5.94 g/（kg·d）、11.88 g/（kg·d）、17.82 g/（kg·d）灌服新交泰飲，分別相當(dāng)于成人等效劑量的4倍、8倍和12倍（以60 kg成人計(jì)算）。各給藥組每日定時(shí)以15 ml/kg劑量灌胃治療，連續(xù)用藥4周。實(shí)驗(yàn)期間每天觀察大鼠體毛色澤、精神狀態(tài)、行為狀態(tài)、飲食飲水量、大便及尿量等指標(biāo)，于每周末測(cè)量體重1次。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.4.1空腹血糖（fasting blood glucose,FGB）每周給藥后，大鼠禁食不禁水12 h，尾靜脈取血，用血糖測(cè)量?jī)x檢測(cè)各組大鼠FGB水平。

1.2.4.2葡萄糖耐量（glucose tolerance,OGTT）末次給藥后，各組動(dòng)物禁食不禁水12 h，灌胃給予2.0 g/kg葡萄糖，于灌胃后0、0.5、2 h尾靜脈取血檢測(cè)血糖值及計(jì)算血糖曲線下面積的變化。

血糖曲線下面積=[（0 h血糖＋0.5 h血糖）×0.5+（2 h血糖＋0.5 h血糖）×1.5]×0.5

1.2.4.3血清胰島素（serum insulin,INS）、細(xì)胞因子及生化指標(biāo)糖耐量實(shí)驗(yàn)結(jié)束，各組動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后，禁食不禁水12 h，麻醉后腹主動(dòng)脈采血，以3 000 r/min速度離心15 min取血清。采用放射免疫法檢測(cè)INS、TNF-α、IL6，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)TC、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST和α-GC活性，操作嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以±s表示，多組比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況與體重

正常組大鼠毛色潤(rùn)澤，精神良好，行為活躍，生活正常；模型組大鼠毛色枯黃，精神狀態(tài)差，喜扎堆，反應(yīng)遲鈍，飲食飲水量均增多，尿量也增多；各給藥組大鼠毛色、精神狀況、行為狀態(tài)與模型組比較無(wú)明顯差異，飲食飲水量、尿量較模型組有所減少，隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠的一般狀態(tài)有所改善。

造模前，與正常組比較，模型組大鼠體重顯著增加（P＜0.05）；造模后，模型組和各給藥組大鼠體重明顯降低（P＜0.05）；給藥期間，各給藥組大鼠體重與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。見(jiàn)圖1。

圖1 各組大鼠體重變化(±s)

2.2 FGB

給藥前，模型組大鼠FGB水平高于正常組（P＜0.01），各給藥組與模型組FGB水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；給藥4周內(nèi)，二甲雙胍組、新交泰飲組（低、中、高劑量組）FGB水平與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；給藥1周后，新交泰飲中劑量組FGB水平明顯低于二甲雙胍組（P＜0.05）；給藥2～3周，新交泰飲高劑量組FGB明顯低于二甲雙胍組（P＜0.05）；給藥4周，二甲雙胍組FGB水平低于新交泰飲組（低、中、高劑量組）（P＜0.05）。見(jiàn)圖2。

圖2 各組大鼠FGB比較(±s)

2.3 OGTT

模型組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血糖值及其血糖曲線下面積較正常組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；二甲雙胍組、新交泰飲組（低、中、高劑量組）各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的血糖值及其血糖曲線下面積與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；比較各時(shí)間點(diǎn)的血糖值和血糖曲線下面積發(fā)現(xiàn)，各給藥組的療效表現(xiàn)為二甲雙胍組＞新交泰飲中劑量組＞新交泰飲低劑量組＞新交泰飲高劑量組。見(jiàn)圖3～4。

圖3 各組大鼠OGTT比較(±s)

圖4 各組大鼠血糖曲線下面積比較(±s)

2.4 IL6、TNF-α、INS和α-GC

模型組大鼠血清INS水平較正常組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；二甲雙胍組、新交泰飲組（低、中、高劑量組）大鼠血清INS水平高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在增加胰島素分泌方面，各給藥組的療效表現(xiàn)為：新交泰飲中劑量組＞二甲雙胍組＞新交泰飲高劑量組＞新交泰飲低劑量組；各組大鼠血清IL6、TNF-α和α-GC水平與正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖5。

圖5 各組大鼠血清IL6、TNF-α、INS和α-GC比較(±s)

2.5 對(duì)肝功能的影響

模型組大鼠血清ALT、AST水平較正常組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各給藥組ALT與AST水平與模型組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)圖6。

圖6 各組大鼠血清ALT和AST水平比較(±s)

2.6 對(duì)血脂的影響

模型組TG、TC和LDL-C水平較正常組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；二甲雙胍組、新交泰飲組（低、中、高劑量組）TG、TC和LDL-C水平與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各組HDL-C水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在降低TG、TC水平方面，各給藥組的療效表現(xiàn)為：新交泰飲組中劑量組＞新交泰飲低劑量組＞二甲雙胍組＞新交泰飲高劑量組；在降低LDL-C水平方面，二甲雙胍組＞新交泰飲組中劑量組＞新交泰飲低劑量組＞新交泰飲高劑量組。見(jiàn)圖7。

圖7 各組大鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C水平比較(±s)

3 討論

糖尿病隸屬于中醫(yī)消渴范疇。中醫(yī)認(rèn)為，消渴病的基本病機(jī)是陰津虧損，燥熱偏盛，而以陰虛為本，燥熱為標(biāo)。經(jīng)典名方—交泰丸方中黃連苦寒，能瀉心火；肉桂辛熱，能補(bǔ)火助陽(yáng)，同時(shí)又有引火歸源之功[9]。兩藥相伍，一寒一熱一清一補(bǔ)，使心腎相交、水火相濟(jì)，正好符合糖尿病患者多久病及腎、陰損及陽(yáng)、虛實(shí)夾雜、寒熱交錯(cuò)的證候特點(diǎn)[10-11]。但黃連的大苦大寒之性使得其在糖尿病中廣泛運(yùn)用受到限制，長(zhǎng)時(shí)間或大劑量服用會(huì)損傷脾胃，造成脾胃虛寒而出現(xiàn)一系列證候；此外，黃連為多基源品種，不同基源的黃連生物堿含量差異較大[12]，極有可能會(huì)對(duì)治療作用產(chǎn)生不可忽視的影響?？喙鲜俏覈?guó)傳統(tǒng)的藥用植物?！侗静菥V目》記載：苦瓜“苦、寒、無(wú)毒”，具有“清邪熱、解勞乏”之功?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，苦瓜中含有的甾體皂苷類、生物堿類和多肽類化學(xué)成分，均具有明顯的降糖降脂作用[11]。肉桂為嶺南道地藥材，是臨床常用的溫里藥，同時(shí)也是辛香食用調(diào)料的來(lái)源之一，其復(fù)方和單味藥在預(yù)防和改善2型糖尿病及其并發(fā)癥方面也具有一定的應(yīng)用價(jià)值[12-13]。基于交泰丸寒熱并用，配伍精當(dāng)，比例懸殊及較好療效的特點(diǎn)，選用藥食同源的苦瓜和肉桂以10∶1配伍制備新交泰飲，并探討其治療2型糖尿病大鼠的降糖降脂作用機(jī)制，以期為開(kāi)發(fā)降糖降脂保健食品提供理論依據(jù)。

二甲雙胍能夠提高患者機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性，緩解胰島素抵抗癥狀，同時(shí)還能提高患者的血糖耐受程度，是治療2型糖尿病的一線藥物。本課題根據(jù)鹽酸二甲雙胍片的成人給藥劑量1 g/d，以成人60 kg和大鼠千克體重劑量折算系數(shù)Kw=6.2計(jì)，大鼠的二甲雙胍給藥劑量約為100 mg/（kg·d）。有文獻(xiàn)[14]報(bào)道，2型糖尿病大鼠服用人等效劑量的交泰丸藥液時(shí)，降糖作用不明顯，在服用人等效劑量4倍時(shí)有明顯降糖作用，考慮到苦瓜的藥性較黃連緩，因此本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的最低給藥劑量為人等效劑量的4倍。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，復(fù)方中單味藥物劑量的應(yīng)用至關(guān)重要，其可能改變方劑的君臣佐使關(guān)系，從而影響方劑的治療方向。因此，新交泰飲組方的不同配比與治療效果的關(guān)系尚需進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，新交泰飲組中劑量組在降低FGB和OGTT水平方面較二甲雙胍組弱，但在增加胰島素分泌和調(diào)控脂代謝方面較二甲雙胍組強(qiáng)。

綜上所述，新交泰飲可以降低2型糖尿病大鼠的血糖水平，其調(diào)控作用可能與維護(hù)糖耐量、促進(jìn)胰島素分泌和改善血脂代謝有關(guān)。對(duì)于交泰飲的具體作用機(jī)制及作用靶點(diǎn)還有待進(jìn)一步探討。