關(guān)鍵詞：元寶楓；外植體；組織培養(yǎng)；快速繁殖

中圖分類號：S722.8+9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1673-923X（2024）01-0119-09

元寶楓Acer truncatum 為槭樹科槭屬落葉喬木，是我國特有的木本油料樹種。元寶楓具有結(jié)果量大、抗性強、適生范圍廣等優(yōu)點，開發(fā)潛力巨大[1]。其生長效率高，適應(yīng)性強，無需苛刻的生長環(huán)境，其材質(zhì)不易燃燒，適合作為用材林和防護林，是荒山造林的理想樹種[2]。在外形觀賞方面，元寶楓樹形美觀，可作為行道樹、庭院和風(fēng)景區(qū)綠化觀賞樹種。在工業(yè)價值方面，樹干材質(zhì)堅硬，可作為良好的建筑、家具材料[3]。在食品保健方面，元寶楓果殼富含凝縮類單寧[4]，葉中還含有黃酮、綠原酸、強心苷等多種活性物質(zhì)[5]，種子與種仁分別含有豐富的食用油和蛋白質(zhì)，油中含有較高的特殊功能性脂肪酸—神經(jīng)酸[6]。

木本植物含有較多的多酚類物質(zhì)，會阻礙細(xì)胞分裂，離體培養(yǎng)成功率與草本植物相比要低很多[7]。但是槭樹科的組培苗由于出苗整齊，適用于難生根的槭樹品種，受到了眾多科研工作人員的重視[8]。關(guān)于元寶楓組織培養(yǎng)方面的研究起步較晚且尚不成熟，還未有一套完整的理論體系，最適宜的培育條件還在摸索當(dāng)中。目前元寶楓的傳統(tǒng)栽培技術(shù)主要是通過育苗、嫁接、扦插等方法進(jìn)行，而有關(guān)培育技術(shù)方面的研究卻很少，只能通過對槭樹科其他樹種進(jìn)行分析并設(shè)計試驗。

開發(fā)和應(yīng)用一種新型和可持續(xù)的能源作物對于實現(xiàn)高效和經(jīng)濟可行的生物能源生產(chǎn)技術(shù)至關(guān)重要，其中植物組織培養(yǎng)也被稱為體外培養(yǎng)，被認(rèn)為是最有前途、最環(huán)保的生物燃料可持續(xù)供應(yīng)方法之一[9]。于震宇[10] 對元寶楓愈傷組織進(jìn)行了誘導(dǎo)和培育，李艷菊[4] 對元寶楓組織培養(yǎng)3 個方面均有所開發(fā)，馬秋月等[11] 于2021 年對腋芽誘導(dǎo)和生根培養(yǎng)基進(jìn)行了研究，但是并沒有一套效率較高且較完整的體系。傳統(tǒng)的育苗、嫁接、扦插技術(shù)中，由于育苗原料的因素，造成了種子品質(zhì)下降、病蟲害累積等問題，而種子的繁育又受季節(jié)因素的影響，使得優(yōu)良的遺傳特性難以維持，從而使良種的推廣和栽培受到很大的制約。組織培養(yǎng)具有繁殖速度快、不受季節(jié)限制及可培養(yǎng)脫毒苗等優(yōu)點，是快速繁殖優(yōu)良植物品種的一條重要途徑，具有廣闊的商業(yè)化前景[12]。為此，本研究汲取前人的經(jīng)驗，開展了元寶楓組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)研究，為建立元寶楓組織培養(yǎng)與快繁系統(tǒng)、選育元寶楓良種、種質(zhì)資源保存、擴大栽培與推廣等提供研究基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗地點與材料

試驗地點為山東省林業(yè)科學(xué)研究院實驗樓的組培室。試驗材料為栽培于山東省濟南市歷下區(qū)燕子山實驗林場、長清區(qū)濟南千木奇農(nóng)業(yè)生態(tài)園有限公司和山東警察學(xué)院的不同優(yōu)樹的種子和1年生帶芽莖段，種子為2021 年10 月中旬采集的飽滿（百粒質(zhì)量＞15 g）無病蟲害種子，帶芽莖段為1 年生4—6 月枝條，分別在2022 年4、5、6月采集無病害、健壯的優(yōu)良植株[13]。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的消毒

1.2.1.1 種子消毒

2021 年10 月采集的優(yōu)樹種子放于常溫干燥處保存。無菌播種前，把干燥種子去掉果皮后置于純凈水中，分別浸泡4、8、12、16、20 h，研究浸泡時間長短對種子剝皮的影響，且泡水可以二次篩選中空的種子。浸泡完畢后將種子置于超凈工作臺進(jìn)行滅菌處理，先用75% 的酒精滅菌30 s，無菌水沖洗3 次，再用0.1% 的升汞和1%NaClO分別消毒10、15 和20 min，共6 個處理，每個處理接種5 瓶，每瓶接種4 粒種子，重復(fù)3 次，接種后每隔3 d 觀察1 次，10 d 后統(tǒng)計污染率、成活率。

1.2.1.2 帶芽莖段消毒

采集1 年生4—6 月新鮮帶芽莖段后立馬進(jìn)行低溫保濕處理，試驗前先用毛刷蘸取洗衣粉溶液輕刷表面，然后用流水沖洗半小時；置于無菌操作臺后用75% 酒精消毒30 s，無菌水沖洗3 次，用0.1% 升汞分別消毒10、15 和20 min，無菌水沖3 次，取出莖段，用無菌修枝剪將與升汞接觸的莖段前后端剪去一部分，用無菌濾紙吸去表面水分，共3 個處理，每個處理接種10 瓶，每瓶接種2 個，重復(fù)3 次，接種后每隔3 d 觀察1 次，30 d 后統(tǒng)計污染率、成活率。

1.2.2 無菌苗的獲取

將最適消毒時間消毒完成的種子剝掉種皮，分別接種到MS、1/2MS、NN69 基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，每3 d 觀察1 次，20 d 后觀察最終結(jié)果。

1.2.3 腋芽誘導(dǎo)啟動培養(yǎng)

幼嫩的1 年生帶芽莖段消毒完成后，將莖段接種到含有不同質(zhì)量濃度分裂素和生長素的培養(yǎng)基中，研究不同質(zhì)量濃度的激素對元寶楓腋芽誘導(dǎo)的影響。本研究進(jìn)行3 因素3 水平設(shè)計L9（3⁴）正交試驗，以MS、1/2MS 和NN69 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的萘乙酸（NAA：0.02、0.06 和0.1 mg·L^-1）和6- 芐基氨基嘌呤（6-BA：0.02、0.06和0.10 mg·L^-1）2 種激素，共9 個處理，每個處理試驗5 瓶，每瓶接種2 個莖段，重復(fù)3 次，每隔3 d 觀察1 次，30 d 后統(tǒng)計誘導(dǎo)率和生長狀況。

1.2.4 繼代增殖培養(yǎng)

將腋芽誘導(dǎo)啟動培養(yǎng)基中獲得的長勢良好且健壯的無菌元寶楓芽苗，接種到增殖分化培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基以MS、1/2MS 和NN69為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加不同質(zhì)量濃度的萘乙酸（NAA：0、0.05 和0.1 mg·L^-1）和噻苯?。═DZ： 0.05、0.10 和0.15 mg·L^-1），探究不同種類基礎(chǔ)培養(yǎng)基和不同質(zhì)量濃度的細(xì)胞分裂素和生長素配比對繼代增殖的影響，篩選出增殖培養(yǎng)中最適合的培養(yǎng)基配方。試驗采用3 因素3 水平L9（3⁴）正交設(shè)計，共9 個處理，每個處理接種5 瓶，重復(fù)3 次。接種后每隔3 d 觀察并記錄幼苗生長狀況，30 d 左右統(tǒng)計增殖系數(shù)和生長狀況。

1.2.5 生根培養(yǎng)

將增殖培養(yǎng)獲得的生長狀態(tài)良好、有明顯嫩芽的1 ～ 2 cm 元寶楓健壯幼苗接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基以MS、1/2MS 和NN69為基本培養(yǎng)基，采用單因素設(shè)計，分別添加0、0.1、0.2、0.3 mg·L^-1 IBA。試驗共12 個處理，每個處理接種5 瓶，每瓶3 個，重復(fù)3 次，每隔3 d 觀察并記錄幼苗生長狀況，20 d 左右統(tǒng)計生根速度、生根數(shù)、生根率和生長狀況。

1.2.6 基本培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基均為青島高科技工業(yè)園海博生物技術(shù)有限公司提供，培養(yǎng)基均附加30 g·L-1蔗糖、7 g·L^-1 瓊脂和0.5 g·L^-1 的PVP；在定容后用1 mol/L 的NaOH 調(diào)節(jié)pH 值至（5.7±0.1）；121 ℃高壓滅菌20 min，冷卻凝固待用；培養(yǎng)室溫度（25+2）℃；光照強度1 500 ～ 2 000 lx；光照時間12 h/d。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理及分析

污染率=（污染的外植體數(shù)/ 接種的總外植體數(shù)）×100%；

死亡率=（褐化死亡但未污染的莖段數(shù)/ 接入的莖段總數(shù)）×100%；

成活率=（未污染且成活的外植體數(shù)/ 接種的總外植體數(shù)）×100%；

誘導(dǎo)率= 腋芽萌發(fā)數(shù)目/ 接種數(shù)目（去除污染數(shù)）×100%；

增殖系數(shù)= ＞ 1.0 cm 有效芽的個數(shù)/ 接種莖段總數(shù)；

生根率=（生根苗數(shù)/ 接種苗數(shù)）×100%；

平均根數(shù)= 總根數(shù)/ 生根苗數(shù)。

用Excel 軟件對測定數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，用SPSS統(tǒng)計分析軟件對污染率、死亡率、成活率、誘導(dǎo)率、增殖系數(shù)、生根率、平均根數(shù)、平均根長、成活率進(jìn)行方差分析，如差異性顯著（P ＜ 0.05），用Duncan 方法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方法對外植體的影響

2.1.1 不同消毒方法對種子的影響

不同的消毒方法和消毒時間直接影響種子和帶芽莖段的污染率和成活率。研究結(jié)果（表1）表明，0.1%HgCl₂ 對元寶楓種子消毒的效果明顯好于1%NaClO，1%NaClO 消毒的種子基本都已染菌。0.1%HgCl₂ 種子最短消毒時間的染菌率最高，達(dá)62%，消毒時間15 min 為最適消毒時間，染菌率為20%，種子消毒時間20 min 的染菌率與15 min 相差不大，但成活率較低。由此可推斷，升汞消毒時間過長會對植物產(chǎn)生毒害作用，從而影響其正常生長，甚至死亡。因此綜合考慮外植體的污染率和成功率，最適合的消毒方法為0.1%HgCl₂ 消毒15 min。

由表2 可知，泡水12 min 為元寶楓種子最適剝種階段，泡水時間過短，種皮與種仁接觸過度貼合，泡水時間過長種皮黏度變大，會對操作造成影響，降低工作效率，更易長菌。

2.1.2 不同消毒方法對帶芽莖段的影響

研究結(jié)果（ 表3） 表明，1%NaClO 消毒處理的帶芽莖段污染率極高，成活率為0%，故不適合用1%NaClO 來處理元寶楓的帶芽莖段。在0.1%HgCl₂ 的消毒處理中，處理5 消毒時間最短，污染率最高，達(dá)100%，成活率最低，為0%。隨著消毒時間的增加，污染率逐漸降低，成活率增高，處理8 中0.1%HgCl₂ 消毒時間8 min，污染率最低，為33.33%，但成活率不是最高，為53.33%；處理7 成活率最高，達(dá)70%。由此可以推知，HgCl₂ 的消毒時間過長會對外植體造成毒害作用，從而引起植株的非正常生長，甚至死亡。綜合考慮，最適合元寶楓外植體的消毒方法為洗衣粉溶液輕刷表面加流水沖洗30 min、75% 的乙醇消毒30 s、0.1%HgCl₂ 消毒6 min。

用此消毒方法對4、5、6 月中旬采集的外植體進(jìn)行消毒，4 月污染率最低，隨著月份的增長，污染率逐漸增加，到6 月份之后就不太適合再去室外采集元寶楓外植體，最適合采集月份為4 月中旬。

2.2 不同基本培養(yǎng)基對無菌苗生長的影響

為加快試驗進(jìn)程，多步驟同時進(jìn)行，就需要對無菌苗進(jìn)行培養(yǎng)，將消毒完畢的種子放入不同的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。由表4 可知，MS 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的出苗率最高，生長高度、基徑和NN69 基礎(chǔ)培養(yǎng)基相差不大，1/2MS 基礎(chǔ)培養(yǎng)基各項數(shù)據(jù)均為最低，綜合所得，最適合無菌苗生長培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。圖1 為無菌苗在MS 培養(yǎng)基中的生長情況。

2.3 不同激素培養(yǎng)基對腋芽誘導(dǎo)的影響

不同質(zhì)量濃度的6-BA 和NAA 對腋芽誘導(dǎo)有不同的影響。由表5 可知，A3 處理的誘導(dǎo)率最高，達(dá)73.33%，芽生長狀況最好，A7 處理誘導(dǎo)率最低，為23.33%。對其正交設(shè)計進(jìn)行分析，由極差結(jié)果可知，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中對腋芽誘導(dǎo)影響最大的為MS 培養(yǎng)基，激素6-BA 對腋芽誘導(dǎo)影響最大的質(zhì)量濃度是0.06 mg·L^-1，激素NAA 對腋芽誘導(dǎo)影響最大的質(zhì)量濃度是0.06 mg·L^-1，其中，極差R 影響最大的因素為激素6-BA 的質(zhì)量濃度，隨著6-BA 質(zhì)量濃度的增加，誘導(dǎo)率呈現(xiàn)先增長后降低的趨勢，3 個因素對苗高影響的主次關(guān)系為：6-BA ＞基礎(chǔ)培養(yǎng)基＞NAA。綜合得出，元寶楓腋芽誘導(dǎo)最適合的處理為MS 培養(yǎng)基+0.06 mg·L^-1 6-BA+0.06 mg·L^-1 NAA。

2.4 不同激素培養(yǎng)基對繼代增殖的影響

不同激素配比及質(zhì)量濃度對促進(jìn)元寶楓增殖的效果有一定的影響。由表6 可知，B2 處理增殖系數(shù)最高，達(dá)4.31，且不定芽生長狀況良好，該處理與其他處理的增殖系數(shù)差異性顯著（P ＜ 0.05）。B7 處理增殖系數(shù)最低，僅為1.1，且生長狀況較差。通過對正交設(shè)計進(jìn)行極差分析得出，TDZ 對增殖系數(shù)影響最顯著，其次是NAA，最后是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，當(dāng)TDZ 質(zhì)量濃度達(dá)到0.3 mg·L^-1 時，增殖系數(shù)達(dá)到最大。質(zhì)量濃度增加則增殖系數(shù)下降，TDZ 質(zhì)量濃度過高會增加愈傷組織的生長，使愈傷組織過大，不定芽不增殖，雖然看著愈傷組織上冒出的綠葉較多，但并未有芽的生長。故綜合得出，元寶楓增殖最適的培養(yǎng)基為MS+0.3 mg·L^-1 TDZ+0.05 mg·L^-1 NAA。圖2為元寶楓不定芽在最適增殖培養(yǎng)基中的生長情況。

2.5 不同激素培養(yǎng)基對生根的影響

不同激素配比及質(zhì)量濃度對促進(jìn)元寶楓生根的效果有一定的影響。由表7 可知，不添加生長素的培養(yǎng)基不能誘導(dǎo)生根，而添加生長素的培養(yǎng)基均能不同程度地誘導(dǎo)元寶楓生根。MS 培養(yǎng)基的生根率明顯高于1/2MS 和NN69 培養(yǎng)基的生根率。添加0.2 mg·L^-1 的IBA 在不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生根率均為最高，達(dá)到93.33%，且平均生根條數(shù)最高，達(dá)到4.3 條，但只有MS 培養(yǎng)基中添加0.2 mg·L^-1 的IBA與其他處理有顯著差異，1/2MS 和NN69 培養(yǎng)基中添加0.2 mg·L^-1 IBA 和0.3 mg·L^-1 IBA 的生根率沒有顯著差異，但平均根數(shù)具有顯著差異，說明高質(zhì)量濃度IBA 對元寶楓生根培養(yǎng)具有一定的副作用。MS 培養(yǎng)基中開始生根時間最早，僅為9 d，從根系長出到無菌苗生長，大約20 d，總生根培養(yǎng)階段為45 d 左右。綜合分析得出，最適合元寶楓的生根培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基+0.2 mg·L^-1 IBA。圖3 為元寶楓無菌苗在最適生根培養(yǎng)基中的生長情況。

3 討論

元寶楓作為我國特有的樹種，不僅在園林綠化中具有廣闊的應(yīng)用前景，近些年還作為豐富的木本油料樹種被逐步地開發(fā)利用，市場需求量日漸增大，需要短時間內(nèi)生產(chǎn)大量的優(yōu)質(zhì)種苗，縮短元寶楓的培育速度。植物組織培養(yǎng)是獲得優(yōu)良品種和植物擴繁的一種重要途徑，可以解決元寶楓種苗的快速繁殖問題。目前關(guān)于元寶楓組織培養(yǎng)的研究還沒有完整的報道，本試驗是以當(dāng)年生元寶楓帶芽莖段、輔以種子無菌苗建立元寶楓組織培養(yǎng)與快繁體系。

外植體的消毒是組織培養(yǎng)中非常關(guān)鍵的一步，且不同植物不同部位的外植體對消毒試劑的敏感程度也不同[11]。對于外植體消毒這一步驟，消毒試劑和消毒時間的選擇至關(guān)重要，首先是種子消毒，將平均百粒質(zhì)量15 g 以上的種子進(jìn)行消毒，75%的酒精沖洗30 s，無菌水沖洗3 次，然后用0.1%的HgCl2 溶液搖晃浸泡15 min 為種子最優(yōu)消毒方法，但消毒后必須將種皮剝掉播種，帶著種皮發(fā)芽率幾乎為0%。然后是當(dāng)年生元寶楓帶芽莖段，不同月份采集的腋芽莖段污染率不同，4 月為污染率最低的月份。先將采回的植株莖段用洗衣粉溶液輕刷表面，流水沖洗30 min 左右，將植株莖段分成長度一致的莖段進(jìn)入無菌操作臺，用75% 的酒精沖洗30 s，無菌水沖洗3 次，然后用0.1% 的HgCl₂ 溶液搖晃浸泡6 min。當(dāng)消毒時間過長時，污染率可能會更低，但成活率也在下降。這是由于HgCl₂ 消毒時間過長會對植株造成毒害效果。

獲取無菌苗是為了加速試驗進(jìn)程，能夠在有限的時間內(nèi)同時進(jìn)行不同的步驟，將播種到不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的種子進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)在溫度（25+2）℃、光照強度1 500 ～ 2 000 lx、光照時間12h /d 的條件下MS 基礎(chǔ)培養(yǎng)基最適合且最高效培養(yǎng)無菌苗，但是長出的無菌苗有一部分褐化很嚴(yán)重，極大地影響植株生長，為以后避免褐化情況的發(fā)生，參考李艷菊[4] 的做法，在元寶楓組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中均加入0.5 g·L^-1 PVP，可以極大地抑制褐化的發(fā)生。

不同植物由于遺傳背景及生物學(xué)特性有一定的差異，因此對基本培養(yǎng)基各類營養(yǎng)成分的需求也有很大差別，同時外源生長調(diào)節(jié)劑的合理配比對腋芽的誘導(dǎo)以及不定芽的增殖、生根等尤為重要[15]。

李源等[16] 研究發(fā)現(xiàn)，IBA 對美國紅楓“白蘭地”的腋芽誘導(dǎo)影響最顯著；馬秋月等[11] 也研究出元寶楓最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為NN69+0.2 mg·L^-1 IBA。除了添加激素IBA 外，還有其他槭樹科添加了不同品種不同質(zhì)量濃度的激素，馬建華等[17] 研究雞爪槭“赤楓”的過程中發(fā)現(xiàn)，最適合其腋芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L^-1 IAA；張煥玲[18] 研究表明金葉復(fù)葉槭腋芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS 基礎(chǔ)培養(yǎng)基；馬亞男[19] 證明茶條槭腋芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基為MS+0.3 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA。對不同槭樹加以分析，對元寶楓正交設(shè)計腋芽誘導(dǎo)試驗，試驗結(jié)果表明以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基并加入0.06 mg·L^-1 6-BA 和0.06 mg·L^-1 NAA 為元寶楓腋芽誘導(dǎo)最適培養(yǎng)基。

馬建華等[17] 通過對雞爪槭“赤楓”的研究發(fā)現(xiàn)最適合的增殖培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L^-1 6-BA+0.5 mg·L^-1 IAA；胡佳卉[20] 發(fā)現(xiàn)羊角槭最適增殖培養(yǎng)基為WPM+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA；李源等[16] 研究發(fā)現(xiàn)美國紅楓“白蘭地”最適合的增殖培養(yǎng)基為WPM+0.002 mg·L^-1 TDZ+0.4 mg·L^-1NAA； 張煥玲[18] 通過對金葉復(fù)葉槭的研究發(fā)現(xiàn)其最適的增殖培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L^-1 6-BA+0.01 mg·L^-1 TDZ+0.06 mg·L^-1 NAA； 王子嵐等[21]研究表明，紫葉挪威槭最適增殖培養(yǎng)基為MS+0.05 mg·L^-1 NAA+0.4 mg·L^-1 IBA+0.3 g·L^-1CH（ 水解酪蛋白）。對于槭屬植物，雖然誘導(dǎo)增殖的激素各不相同，但都以細(xì)胞分裂素為主導(dǎo)，本試驗結(jié)果也是以細(xì)胞分裂素影響最顯著，研究發(fā)現(xiàn)以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基并加入0.3 mg·L^-1 TDZ 和0.05 mg·L^-1 NAA 為元寶楓繼代增殖最適培養(yǎng)基。

王子嵐等[21] 發(fā)現(xiàn)紫葉挪威槭最適生根培養(yǎng)基為MS+0.005 mg·L^-1 NAA+0.4 mg·L^-1 IBA+0.3 mg·L^-1CH；李源等[16] 發(fā)現(xiàn)美國紅楓“白蘭地”的最適生根培養(yǎng)基為MS+2.0 mg·L^-1 IBA+1.0 mg·L^-1 GA3；馬建華等[17] 的研究表明雞爪槭“赤楓”的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.3 mg·L^-1 NAA；馬秋月等[11] 通過對元寶楓的研究，發(fā)現(xiàn)把1/2NN69+0.4 mg·L^-1 IBA 作為生根培養(yǎng)基，其生根率能達(dá)到87.8%。本試驗發(fā)現(xiàn)，以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基并加入0.2 mg·L^-1 IBA，其生根率達(dá)到了93.33%，故MS+0.2 mg·L^-1 IBA 為元寶楓生根最適培養(yǎng)基。

本次試驗從組織培養(yǎng)不同步驟常用培養(yǎng)基和不同生物調(diào)節(jié)劑入手，分析其污染率、成活率、誘導(dǎo)率、增殖率、生根率等。試驗內(nèi)容僅限于常規(guī)培養(yǎng)基與生物調(diào)節(jié)劑，還可從不常用生物調(diào)節(jié)劑方面入手，繼續(xù)加深對元寶楓組織培養(yǎng)的探討與研究，對結(jié)實后的元寶楓進(jìn)行分析、化驗，形成完備的元寶楓利用體系。

4 結(jié)論

以元寶楓當(dāng)年生帶芽莖段和種子為試材，通過正交設(shè)計篩選法和單因素篩選法對其滅菌方式及腋芽誘導(dǎo)、繼代增殖、生根培養(yǎng)基進(jìn)行設(shè)計篩選，建立了元寶楓組織培養(yǎng)的體系。在MS、1/2MS和NN69 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA 和TDZ 激素，通過不同配比找出元寶楓各階段的最適培養(yǎng)基。全年中4 月份為帶芽莖段最佳采集時間，經(jīng)洗衣粉溶液輕刷表面并沖洗半小時后，以75% 酒精30 s+0.1% HgCl₂ 10 min浸泡處理的滅菌效果最佳。再生體系各階段最適培養(yǎng)基均為MS 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在其基礎(chǔ)上再添加不同質(zhì)量濃度激素可以誘導(dǎo)嫩芽分化成不同器官。啟動培養(yǎng)階段，6-BA 對腋芽誘導(dǎo)影響最大，最適培養(yǎng)基誘導(dǎo)率可達(dá)73.33%；繼代增殖階段，TDZ 對不定芽分化影響最大，增殖系數(shù)最高可達(dá)4.31；生根階段采用單因素篩選法，發(fā)現(xiàn)添加0.2 mg/L IBA元寶楓的生根率和生根條數(shù)均為最高，達(dá)93.33% 和4.3。元寶楓最適培養(yǎng)基為：1）啟動培養(yǎng)：MS+0.06 mg/L 6-BA 和0.06 mg/L NAA，誘導(dǎo)率為73.33%。2） 增殖培養(yǎng)：MS+0.3 mg/LTDZ 和0.05 mg/L NAA，增殖系數(shù)為4.31。3）生根培養(yǎng)：MS+0.2 mg/L IBA，生根率為93.33%。

[ 本文編校：謝榮秀]