摘要：目的" 應(yīng)用Meta分析評(píng)價(jià)宏基因組二代測(cè)序技術(shù)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法" 檢索PubMed MEDLINE、Ovid MEDLINE、Web of Science、Cochrane Library、EMbase、Scopus、中國知網(wǎng)、萬方、維普數(shù)據(jù)庫中有關(guān)宏基因組二代測(cè)序技術(shù)應(yīng)用于診斷結(jié)核病的相關(guān)文獻(xiàn)，檢索時(shí)限為建庫至2021年10月31日，由2名研究者獨(dú)立進(jìn)行文獻(xiàn)檢索、篩選、數(shù)據(jù)提取、質(zhì)量評(píng)價(jià)。使用MetaDISc 1.4軟件進(jìn)行閾值效應(yīng)和異質(zhì)性檢驗(yàn)、數(shù)據(jù)的合并分析，使用StataMP 16軟件繪制Deek’s漏斗圖評(píng)估發(fā)表偏倚。結(jié)果" 共檢索出623篇文獻(xiàn)，依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)最終納入14項(xiàng)研究，涉及2159個(gè)樣本，其中結(jié)核病樣本964個(gè)。Meta分析結(jié)果顯示，宏基因組二代測(cè)序技術(shù)診斷結(jié)核病的合并敏感度為0.600（95%CI：0.568～0.631），合并特異度為0.985（95%CI：0.976～0.991），合并陽性似然比為30.513（95%CI：18.536～50.226），合并陰性似然比為0.414（95%CI：0.357～0.481），合并診斷比值比為77.408（95%CI：46.090～130.010），合并曲線下面積為0.9680，合并Q*值為0.9167。Deek's漏斗圖提示不存在發(fā)表偏倚（P＞0.05）。結(jié)論" 宏基因組二代測(cè)序技術(shù)對(duì)結(jié)核病具有較高的診斷價(jià)值，可作為快速診斷的有效方法。

關(guān)鍵詞：宏基因組二代測(cè)序；分子診斷技術(shù)；結(jié)核病

中圖分類號(hào)：R825.2" " " " " " " " " " " " " " " " "文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.05.003

文章編號(hào)：1006-1959（2024）05-0020-07

Meta-analysis of the Diagnostic Value of Metagenomic Next-generation Sequencing Technology

for Tuberculosis

WANG Chao-ran1，2，YANG Zong-qiang1，NIU Ning-kui1

（1.Department of Orthopedics，General Hospital of Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，Ningxia，China;

2.School of Clinical Medicine，Ningxia Medical University，Yinchuan 750004，Ningxia，China）

Abstract：Objective" To evaluate the diagnostic value of metagenomic next-generation sequencing technology for tuberculosis using Meta-analysis.Methods" PubMed MEDLINE， Ovid MEDLINE， Web of Science， Cochrane Library， EMbase， Scopus， CNKI， Wanfang， and VIP databases were searched for relevant literature on the application of metagenomic next-generation sequencing technology in the diagnosis of tuberculosis. The search time was from the establishment of the database to October 31， 2021. Two researchers independently performed literature search， screening， data extraction， and quality evaluation. MetaDISc 1.4 software was used to test the threshold effect and heterogeneity， and the data were combined and analyzed. StataMP 16 software was used to draw Deek's funnel plot to evaluate publication bias.Results" A total of 623 papers were retrieved. According to inclusion and exclusion criteria， 14 studies involving 2159 samples， including 964 tuberculosis samples. Meta-analysis showed that the pooled sensitivity of metagenomic next-generation sequencing technology for the diagnosis of tuberculosis was 0.600 （95%CI：0.568-0.631）， the pooled specificity was 0.985 （95%CI：0.976-0.991）， the pooled positive likelihood ratio was 30.513 （95%CI：18.536-50.226）， the pooled negative likelihood ratio was 0.414 （95%CI：0.357-0.481）， the pooled diagnostic odds ratio was 77.408 （95%CI：46.090-130.010）， the pooled area under the curve was 0.9680 and the pooled Q*-value was 0.9167. Deek's funnel plot suggested no publication bias （Pgt;0.05）.Conclusion" The metagenomic next-generation sequencing technology has high diagnostic value for tuberculosis， and can be used as an effective method for rapid diagnosis.

Key words：Metagenomic next-generation sequencing;Molecular diagnostic technology;Tuberculosis

結(jié)核病（tuberculosis，TB）是一個(gè)迄今仍然威脅人類健康的慢性傳染病和重大公共衛(wèi)生問題，其由結(jié)核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）引起，可以累及全身各個(gè)系統(tǒng)，引起肺結(jié)核、結(jié)核性腦膜炎、骨與關(guān)節(jié)結(jié)核在內(nèi)的多種疾病。TB的臨床表現(xiàn)多樣，給臨床診斷帶來極大困難，尤其是肺外結(jié)核病往往十分隱匿[1]。伴隨著耐藥結(jié)核病患者的日益增多，已有模型表明，在缺乏快速診斷和特異性治療的情況下，TB發(fā)病率將繼續(xù)增加[2]。宏基因組二代測(cè)序（metagenomic next-generation sequencing，mNGS）也被稱為高通量或大規(guī)模并行測(cè)序，可以無偏倚地分析臨床樣本中的微生物和宿主核酸含量，具有覆蓋廣、快速等特點(diǎn)，已被應(yīng)用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等多個(gè)領(lǐng)域感染性疾病的病原檢測(cè)[3]。盡管mNGS技術(shù)應(yīng)用于支氣管灌洗液、腦脊液等多種檢材診斷TB的研究日益增多，但單項(xiàng)研究的樣本量不大，報(bào)道的敏感度存在較大差異，因此其診斷價(jià)值仍有爭(zhēng)議。本研究采用Meta分析的方法對(duì)mNGS技術(shù)診斷TB的文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)和客觀評(píng)價(jià)，以評(píng)估m(xù)NGS技術(shù)在TB診斷中的應(yīng)用價(jià)值，為臨床診療提供決策參考。

1資料與方法

1.1檢索策略" 檢索PubMed MEDLINE、Ovid MEDLINE、Web of Science、Cochrane Library、EMbase、Scopus、中國知網(wǎng)（CNKI）、萬方、維普數(shù)據(jù)庫中通過宏基因組二代測(cè)序技術(shù)診斷TB的診斷性研究論文，檢索時(shí)限為建庫起至2021年10月31日，語種限制為中文和英文。中文檢索詞：“宏基因組二代測(cè)序”“二代測(cè)序”“高通量核苷酸序列分析”“結(jié)核”及其他自由詞；英文檢索詞：“Metagenomic Next-generation Sequencing”“Next Generation Sequencing”“High Throughput Nucleotide Sequencing”“Tuberculosis”及其他自由詞。以維普數(shù)據(jù)庫為例，檢索策略如下：（（題名或關(guān)鍵詞=結(jié)核 OR 題名或關(guān)鍵詞=脊柱結(jié)核） AND （（（（（題名或關(guān)鍵詞=宏基因組 OR 題名或關(guān)鍵詞=宏基因組學(xué)） OR 題名或關(guān)鍵詞=宏基因二代測(cè)序） OR 題名或關(guān)鍵詞=宏基因組二代測(cè)序） OR 題名或關(guān)鍵詞=高通量核苷酸序列檢測(cè)） OR 題名或關(guān)鍵詞=二代測(cè)序））。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn)" 納入標(biāo)準(zhǔn)：①研究類型：采用mNGS技術(shù)診斷MTB的前瞻性研究或回顧性研究；②研究對(duì)象：確診為MTB的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)明確，對(duì)照組包括涉及的部位可能存在的結(jié)節(jié)、炎癥、癌癥等其他臨床需要和MTB進(jìn)行鑒別的疾??；③結(jié)局指標(biāo)：真陽性值（true positive，TP）、假陽性值（1 positive，F(xiàn)P）、假陰性值（1 negative，F(xiàn)N）和真陰性值（true negative，TN）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)；②會(huì)議摘要、學(xué)位論文、病例報(bào)道、綜述、Meta分析、系統(tǒng)評(píng)價(jià)等。

1.3文獻(xiàn)篩選及數(shù)據(jù)提取" 使用Endnote X9軟件剔除重復(fù)文獻(xiàn)，由2名獨(dú)立研究員閱讀初檢文獻(xiàn)的標(biāo)題、摘要，按照文獻(xiàn)的納入與排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行文獻(xiàn)篩選，對(duì)篩選出的文獻(xiàn)進(jìn)一步閱讀全文，最終確定納入分析的文獻(xiàn)。同樣由以上2名獨(dú)立研究員對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行信息采集和數(shù)據(jù)提取，包括第一作者、發(fā)表年份、研究對(duì)象、樣本量、診斷標(biāo)準(zhǔn)、診斷試驗(yàn)參數(shù)TP、FP、TN、FN等。如有不一致可以通過討論達(dá)成共識(shí)，或向?qū)＜易稍兘鉀Q問題。

1.4文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)" 由2名獨(dú)立研究員使用Review Manager 5.4軟件，根據(jù)診斷準(zhǔn)確性研究質(zhì)量評(píng)價(jià)工具-2（quality assessment of diagnostic accuracy studies-2，QUADAS-2）[4]評(píng)價(jià)文獻(xiàn)質(zhì)量，包括病例選擇、待評(píng)價(jià)試驗(yàn)、金標(biāo)準(zhǔn)、病例流程及進(jìn)展情況4個(gè)部分，共11個(gè)評(píng)價(jià)條目，對(duì)每個(gè)條目做出“是”“否”“不清楚”的判斷。若一個(gè)范圍內(nèi)所有標(biāo)志性問題判斷均為“是”，則評(píng)定為“低偏倚風(fēng)險(xiǎn)”；若所有信息化問題判斷中有一個(gè)為“否”，則評(píng)定為“高偏倚風(fēng)險(xiǎn)”；若文獻(xiàn)中沒有提供詳細(xì)的內(nèi)容以致評(píng)價(jià)者難以做出判斷，則評(píng)定為“不清楚”。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 使用MetaDISc 1.4軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的合并分析。納入研究的閾值效應(yīng)通過計(jì)算Spearman相關(guān)系數(shù)并擬合受試者工作特征曲線（summary receiver operating characteristic，SROC）進(jìn)行評(píng)估，標(biāo)準(zhǔn)如下：①存在閾值效應(yīng)：Spearman相關(guān)系數(shù)呈現(xiàn)相關(guān)性且P＜0.05；②不存在閾值效應(yīng)：Spearman相關(guān)系數(shù)較小且P＞0.05。通過診斷比值比Cochrane-Q檢驗(yàn)I2值評(píng)估納入研究的異質(zhì)性，相應(yīng)地選擇模型對(duì)納入研究的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析，標(biāo)準(zhǔn)如下：I2≤25%為異質(zhì)性較小，25%＜I2≤50%為中度異質(zhì)性，選擇固定效應(yīng)模型（fixed effect model，F(xiàn)EM）；I2＞50%為高度異質(zhì)性，選擇隨機(jī)效應(yīng)模型（random effects model，REM）。使用StataMP 16軟件繪制Deek's漏斗圖評(píng)估發(fā)表偏倚。

2結(jié)果

2.1文獻(xiàn)篩選流程及檢索結(jié)果" 根據(jù)預(yù)先設(shè)定的檢索策略，初步獲得相關(guān)文獻(xiàn)623篇，剔除重復(fù)文獻(xiàn)后剩余381篇，剔除綜述、系統(tǒng)評(píng)價(jià)、Meta分析、學(xué)位論文等文獻(xiàn)62篇，剩余319篇閱讀題目和摘要后排除不相關(guān)文獻(xiàn)250篇，剩余69篇獲取全文進(jìn)行閱讀，再次排除不符合納入標(biāo)準(zhǔn)和診斷標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)55篇，最終共納入14篇文獻(xiàn)[5-18]，文獻(xiàn)篩選流程及結(jié)果見圖1。

2.2納入文獻(xiàn)的基本特征及質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果" 共納入14項(xiàng)原始研究，基本情況見表1。所有原始研究類型均為采用mNGS技術(shù)診斷MTB的前瞻性研究或回顧性研究，研究對(duì)象均為經(jīng)過病原學(xué)（包括細(xì)菌學(xué)和分子生物學(xué)）或臨床上結(jié)合流行病史、臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查、結(jié)核免疫學(xué)檢測(cè)、鑒別診斷及抗結(jié)核藥物治療等確診為MTB的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)明確，對(duì)照組均包括涉及的部位可能存在的結(jié)節(jié)、炎癥、癌癥等其他臨床需要和MTB進(jìn)行鑒別的疾病。納入文獻(xiàn)的質(zhì)量均較高，其QUADAS-2偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)見圖2、圖3。

2.3閾值效應(yīng)和異質(zhì)性檢驗(yàn)" Spearman相關(guān)系數(shù)=0.220，P=0.449，SROC曲線中各數(shù)據(jù)點(diǎn)未呈“肩臂狀”分布，表明本次Meta分析納入的原始研究間不存在閾值效應(yīng)，見圖4。異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果為：敏感度（？字2=59.82，P=0.000，I2=78.10%）、特異度（？字2=9.38，P=0.744，I2=0）、陽性似然比（positive likelihood ratio，PLR）（Cochran-Q=3.98，P=0.991，I2=0）、陰性似然比（negative likelihood ratio，NLR）（Cochran-Q=39.11，P=0.000，I2=66.80%）、診斷比值比（diagnostic odds ratio，DOR）（Cochran-Q=6.74，P=0.915，I2=0），其中敏感度與NLR異質(zhì)性較大，采用REM合并效應(yīng)量，特異度、PLR、DOR異質(zhì)性較小，采用FEM合并效應(yīng)量。

2.4診斷性實(shí)驗(yàn)的評(píng)價(jià)指標(biāo)" Meta分析結(jié)果顯示，mNGS技術(shù)診斷TB的合并敏感度為0.600（95%CI：0.568～0.631），合并特異度為0.985（95%CI：0.976～0.991），合并PLR為30.513（95%CI：18.536～50.226），合并NLR為0.414（95%CI：0.357～0.481），合并DOR為77.408（95%CI：46.090～130.010），合并計(jì)算曲線下面積（area under the curv，AUC）為0.9680，合并Q=0.9167，見圖5。

2.5 Deek's發(fā)表偏倚檢驗(yàn)" 由Deek's模型繪制的漏斗圖中各研究散點(diǎn)在中線左右兩側(cè)基本呈對(duì)稱分布，P＞0.05，見圖6，提示納入研究的原始文獻(xiàn)之間存在發(fā)表偏倚的可能性較小。

3討論

早診斷、早治療是實(shí)現(xiàn)“終結(jié)結(jié)核病”戰(zhàn)略、實(shí)現(xiàn)早期干預(yù)及個(gè)體化治療、改善預(yù)后效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，延遲診斷將導(dǎo)致個(gè)體化治療的延誤和MTB的傳播[19]。實(shí)驗(yàn)室檢查對(duì)TB的防治及診斷起著不可或缺的作用，包括以全菌體為靶標(biāo)的細(xì)菌學(xué)診斷、以細(xì)菌核酸為靶標(biāo)的分子生物學(xué)診斷、以機(jī)體免疫反應(yīng)及其產(chǎn)物為靶標(biāo)的血清學(xué)診斷、病理學(xué)診斷及影像學(xué)診斷[20]。細(xì)菌學(xué)診斷包括涂片鏡檢和MTB培養(yǎng)，前者廉價(jià)、快速、方便、簡(jiǎn)單，但敏感度不高、易受染色及鏡檢技術(shù)影響、不能區(qū)分MTB及非MTB；后者被世界衛(wèi)生組織稱為TB診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但檢測(cè)周期較長(zhǎng)，難以為臨床提供時(shí)效性的檢測(cè)結(jié)果。近年來，隨著技術(shù)日趨成熟，出現(xiàn)了GeneXpert MTB/RIF、線性探針、T-SPOT等一系列診斷方法[21-23]，但也存在著以下不足：GeneXpert MTB/RIF對(duì)于肺外結(jié)核，尤其是對(duì)于菌量極少的標(biāo)本檢出率不高；線性探針技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及人員水平要求較高，且受膜上探針的限制，不能檢測(cè)出所有的突變類型；T-SPOT難以區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核和潛伏性結(jié)核感染。

mNGS技術(shù)通過對(duì)疑似感染患者樣本中微生物和宿主的核酸進(jìn)行高通量測(cè)序，可以無偏倚地分析臨床樣本中包括病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲在內(nèi)的多種微生物、耐藥基因和毒力因子[24，25]，有研究顯示其敏感度、特異度高于傳統(tǒng)MTB培養(yǎng)[26]。近年來mNGS技術(shù)應(yīng)用于支氣管灌洗液、腦脊液等多種檢材診斷TB的研究在逐漸增多，但單項(xiàng)研究的樣本量不大，報(bào)道的敏感度存在較大差異，因此其診斷價(jià)值仍有爭(zhēng)議。為了評(píng)估m(xù)NGS技術(shù)在TB中的診斷價(jià)值，為臨床提供參考，本研究采用Meta分析的方法對(duì)mNGS技術(shù)診斷TB的文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)和客觀評(píng)價(jià)，以期更精確地早期診斷TB。

本研究共納入14項(xiàng)通過mNGS技術(shù)診斷TB的原始研究，涉及2159個(gè)樣本，通過Meta分析對(duì)診斷指標(biāo)進(jìn)行計(jì)算并定量合并分析。本研究納入的14項(xiàng)研究無閾值效應(yīng)，除敏感度與NLR異質(zhì)性較大，采用REM進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析外，其余指標(biāo)均采用FEM進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，結(jié)果顯示mNGS技術(shù)診斷TB的合并敏感度為0.600（95%CI：0.568～0.631），合并特異度為0.985（95%CI：0.976～0.991），合并PLR為30.513（95%CI：18.536～50.226），合并NLR為0.414（95%CI：0.357～0.481），合并DOR為77.408（95%CI：46.090～130.010），合并AUC=0.9680，合并Q=0.9167，合并PLR＞10，提示mNGS在TB的診斷中具有較高的臨床價(jià)值，可作為TB快速診斷的有效方法。

盡管通過mNGS技術(shù)進(jìn)行的泛病原體檢測(cè)的潛力已在許多研究和臨床環(huán)境中得到證實(shí)，該技術(shù)目前也存在著一部分弊端。首先，mNGS操作過程復(fù)雜，檢測(cè)成本高，邊際效用低[27]，且目前沒有國家和地區(qū)正式批準(zhǔn)mNGS用于臨床感染性疾病的病原診斷[28]，導(dǎo)致其結(jié)果原則上都需要其他方法驗(yàn)證，使用受到限制。其次，臨床提供的檢驗(yàn)樣本多元，對(duì)mNGS結(jié)果的解釋缺乏可信的標(biāo)準(zhǔn)[26]，造成檢測(cè)質(zhì)量良莠不齊。但隨著測(cè)序技術(shù)的不斷進(jìn)步，有專家預(yù)測(cè)在未來5年，更多前瞻性臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)將評(píng)估m(xù)NGS的臨床效用，其總體成本和周轉(zhuǎn)時(shí)間將繼續(xù)下降，在對(duì)抗傳染病方面發(fā)揮關(guān)鍵作用[29]。

本研究存在著以下局限性：目前有關(guān)mNGS診斷TB的原始研究較少，檢材的處理方法存在差異，可能造成偏倚；納入的原始研究所涉及到的檢材性質(zhì)、疾病類型不同，患者間具有個(gè)體差異，將導(dǎo)致潛在的臨床異質(zhì)性；納入的原始研究中，大部分為回顧性設(shè)計(jì)類型，降低了研究的質(zhì)量；本研究只納入了中、英文文獻(xiàn)，可能造成語言偏倚。

綜上所述，宏基因組二代測(cè)序技術(shù)對(duì)結(jié)核病具有較高的診斷價(jià)值，可作為快速診斷的有效方法，其發(fā)展前景樂觀，但在相關(guān)部門批準(zhǔn)應(yīng)用之前尚需更多前瞻性、大樣本、高質(zhì)量的臨床對(duì)照研究對(duì)其進(jìn)行持續(xù)性評(píng)估。

參考文獻(xiàn)：

[1]Dheda K，Gumbo T，Maartens G，et al.The epidemiology， pathogenesis， transmission， diagnosis， and management of multidrug-resistant， extensively drug-resistant， and incurable tuberculosis[J].Lancet Respir Med，2017，5（4）：291-360.

[2]高磊，張慧，胡茂桂，等.基于多中心調(diào)查數(shù)據(jù)和空間統(tǒng)計(jì)模型的全國結(jié)核分枝桿菌潛伏感染率估算[J].中國防癆雜志，2022，44（1）：54-59.

[3]Gu W，Miller S，Chiu CY.Clinical Metagenomic Next-Generation Sequencing for Pathogen Detection[J].Annu Rev Pathol，2019，14：319-338.

[4]Whiting PF，Rutjes AW，Westwood ME，et al.QUADAS-2： a revised tool for the quality assessment of diagnostic accuracy studies[J].Ann Intern Med，2011，155（8）：529-536.

[5]孫雯雯，顧瑾，范琳.宏基因組二代測(cè)序?qū)Σ煌愋徒Y(jié)核病的診斷價(jià)值[J].中華結(jié)核和呼吸雜志，2021，44（2）：96-100.

[6]Zhu N，Zhou D，Li S.Diagnostic Accuracy of Metagenomic Next-Generation Sequencing in Sputum-Scarce or Smear-Negative Cases with Suspected Pulmonary Tuberculosis[J].Biomed Res Int，2021，2021：9970817.

[7]Yu G，Wang X，Zhu P，et al.Comparison of the efficacy of metagenomic next-generation sequencing and Xpert MTB/RIF in the diagnosis of tuberculous meningitis[J].J Microbiol Methods，2021，180：106124.

[8]Sun W，Lu Z，Yan L.Clinical efficacy of metagenomic next-generation sequencing for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in smear-negative extrapulmonary specimens in a high tuberculosis burden area[J].Int J Infect Dis，2021，103：91-96.

[9]Liu X，Chen Y，Ouyang H，et al.Tuberculosis Diagnosis by Metagenomic Next-generation Sequencing on Bronchoalveolar Lavage Fluid： a cross-sectional analysis[J].Int J Infect Dis，2021，104：50-57.

[10]Lin A，Cheng B，Han X，et al.Value of next-generation sequencing in early diagnosis of patients with tuberculous meningitis[J].J Neurol Sci，2021，422：117310.

[11]Chao Y，Li J，Gong Z，et al.Rapid discrimination between tuberculosis and sarcoidosis using next-generation sequencing[J].Int J Infect Dis，2021，108：129-136.

[12]Yan L，Sun W，Lu Z，et al.Metagenomic Next-Generation Sequencing （mNGS） in cerebrospinal fluid for rapid diagnosis of Tuberculosis meningitis in HIV-negative population[J].Int J Infect Dis，2020，96：270-275.

[13]Shi CL，Han P，Tang PJ，et al.Clinical metagenomic sequencing for diagnosis of pulmonary tuberculosis[J].J Infect，2020，81（4）：567-574.

[14]Jin W，Pan J，Miao Q，et al.Diagnostic accuracy of metagenomic next-generation sequencing for active tuberculosis in clinical practice at a tertiary general hospital[J].Ann Transl Med，2020，8（17）：1065.

[15]Chen P，Sun W，He Y.Comparison of metagenomic next-generation sequencing technology， culture and GeneXpert MTB/RIF assay in the diagnosis of tuberculosis[J].J Thorac Dis，2020，12（8）：4014-4024.

[16]Zhou X，Wu H，Ruan Q，et al.Clinical Evaluation of Diagnosis Efficacy of Active Mycobacterium tuberculosis Complex Infection via Metagenomic Next-Generation Sequencing of Direct Clinical Samples[J].Front Cell Infect Microbiol，2019，9：351.

[17]Wang S，Chen Y，Wang D，et al.The Feasibility of Metagenomic Next-Generation Sequencing to Identify Pathogens Causing Tuberculous Meningitis in Cerebrospinal Fluid[J].Front Microbiol，2019，10：1993.

[18]周晛，艾靜文，崔鵬，等.二代測(cè)序技術(shù)對(duì)活動(dòng)性結(jié)核病患者的診斷價(jià)值[J].中國防癆雜志，2018，40（2）：153-156.

[19]賈忠偉，陸祖宏.診斷與治療延誤對(duì)結(jié)核病傳播作用[J].系統(tǒng)科學(xué)與數(shù)學(xué)，2016，36（1）：28-36.

[20]Furin J，Cox H，Pai M.Tuberculosis[J].Lancet，2019，393（10181）：1642-1656.

[21]Nathavitharana RR，Cudahy PG，Schumacher SG，et al.Accuracy of line probe assays for the diagnosis of pulmonary and multidrug-resistant tuberculosis： a systematic review and meta-analysis[J].Eur Respir J，2017，49（1）：1601075.

[22]蘭汀隆，董偉杰，范俊，等.分子線性探針技術(shù)在檢測(cè)脊柱標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌及其耐藥性中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國脊柱脊髓雜志，2020，30（6）：552-557.

[23]鄢志輝，孫立，簡(jiǎn)月奎.結(jié)核IgG抗體檢測(cè)、T-SPOT及痰結(jié)核分枝桿菌核酸檢測(cè)對(duì)骨關(guān)節(jié)結(jié)核的診斷價(jià)值[J].醫(yī)學(xué)信息，2021，34（7）：85-87.

[24]王玉靜，陸梓涔，陳俊煜，等.高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展及其在臨床檢測(cè)中的應(yīng)用[J].廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2021，60（5）：811-820.

[25]Wang J，Han Y，F(xiàn)eng J.Metagenomic next-generation sequencing for mixed pulmonary infection diagnosis[J].BMC Pulm Med，2019，19（1）：252.

[26]Miao Q，Ma Y，Wang Q，et al.Microbiological Diagnostic Performance of Metagenomic Next-generation Sequencing When Applied to Clinical Practice[J].Clin Infect Dis，2018，67（suppl_2）：S231-S240.

[27]Greninger AL.The challenge of diagnostic metagenomics[J].Expert Rev Mol Diagn，2018，18（7）：605-615.

[28]Deurenberg RH，Bathoorn E，Chlebowicz MA，et al.Application of next generation sequencing in clinical microbiology and infection prevention[J].J Biotechnol，2017，243：16-24.

[29]Chiu CY，Miller SA.Clinical metagenomics[J].Nat Rev Genet，2019，20（6）：341-355.

收稿日期：2023-04-02；修回日期：2023-04-17

編輯/王萌