張梅?閔敏?趙姝旻

摘 要：目的：通過(guò)對(duì)儀征市2012—2018年食源性疾病病原菌檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，了解儀征市食源性疾病主要病原體的感染情況及其變化趨勢(shì)。方法：對(duì)儀征市食源性哨點(diǎn)醫(yī)院2012年4月至2018年11月腸道門(mén)診就診的急性腹瀉患者肛門(mén)拭子進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)。結(jié)果：1 767份肛拭子標(biāo)本共檢測(cè)出112株致病菌，檢出率為6.33%，其中沙門(mén)氏菌10株，副溶血性弧菌101株，志賀氏菌1株。結(jié)論：儀征市2012—2018年食源性疾病的病原菌主要是副溶血性弧菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌。

關(guān)鍵詞：食源性疾??；病原菌；結(jié)果分析

Analysis of the Detection Results of Pathogenic Bacteria of Foodborne Diseases in Yizheng City from 2012 to 2018

Abstract： Objective： Through the analysis of the detection results of pathogens of food-borne diseases in Yizheng city from 2012 to 2018， the distribution and changing trend of main pathogens of food-borne diseases in Yizheng city were understood. Method： The anal swabs of acute diarrhea patients in Yizheng food-borne sentinel hospital from April 2012 to November 2018 were examined by bacteriology. Result： 112 strains of pathogenic bacteria were detected in 1 767 anal swab samples， with a detection rate of 6.33%; among them， 10 strains of Salmonella， 101 strains of Vibrio parahaemolyticus and 1 strain of Shigella. Conclusion： The pathogenic bacteria of foodborne diseases in Yizheng city from 2012 to 2018 were mainly Vibrio parahaemolyticus， Salmonella， and Shigella.

Keywords： foodborne diseases; pathogenic bacteria; result analysis

食源性致病菌引起的感染性腹瀉嚴(yán)重危害人們的身體健康，尤其是處在生長(zhǎng)發(fā)育期的兒童及青少年。食源性疾病是由食用不潔食物引起的疾病，其中細(xì)菌污染食物引起的食源性疾病居多[1]。我國(guó)感染性腹瀉病的發(fā)病率常年居高不下，食源性致病菌導(dǎo)致的食品安全問(wèn)題已成為公眾關(guān)注的重點(diǎn)[2]。本文針對(duì)儀征市腸道病門(mén)診1 767份腹瀉樣進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測(cè)，并對(duì)病原菌檢測(cè)結(jié)果及分布情況進(jìn)行分析，以為食源性疾病的防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣本來(lái)源

取2012年4月至2018年11月在儀征市食源性哨點(diǎn)醫(yī)院腸道門(mén)診就診的急性腹瀉患者的肛門(mén)拭子1 767份，做細(xì)菌學(xué)鑒定。

1.2 試劑與儀器

三糖鐵（TSI）、伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）、SS瓊脂、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、改良Y、MYP瓊脂和金黃色葡萄球菌顯色、阪崎腸桿菌顯色、李斯特氏菌顯色、志賀氏菌顯色培養(yǎng)基，均為北京陸橋生產(chǎn)；改良科馬嘉0157顯色、科馬嘉弧菌顯色、沙門(mén)氏菌屬顯色培養(yǎng)基，均由鄭州博賽生物提供；血平板，溫州市康泰生物提供；小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌生化鑒定套裝，為北京陸橋提供；膽汁七葉苷、桿菌肽紙片、optochin紙片，杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡，美國(guó)BioMerievxINC生產(chǎn)；腸桿菌和其他非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒，法國(guó)BioMerievx.Sa生產(chǎn)；沙門(mén)氏菌屬、志賀氏菌屬診斷血清，浙江天潤(rùn)生物制品有限公司；革蘭染液，北京陸橋技術(shù)股份有限公司。以上試劑均在有效期內(nèi)使用。

VITEK2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)，生物梅里埃（美國(guó)）公司；DPH-9082型電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海一恒科學(xué)技術(shù)有限公司；AB2-4SI型生物安全柜，新加坡ESCO公司；303A-4型數(shù)顯式電熱培養(yǎng)箱，上海榮豐科學(xué)儀器有限公司。

1.3 檢驗(yàn)方法

參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）[3]、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.5—2012）[4]、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.6—2016）[5]、《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 副溶血性弧菌檢驗(yàn)》（GB 4789.7—2013）[6]等系列食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及2012—2018年江蘇省食源性疾病監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)進(jìn)行食源性疾病病原菌檢測(cè)。根據(jù)國(guó)家二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室的要求，進(jìn)行嚴(yán)格操作。

1.3.1 增菌培養(yǎng)

將標(biāo)本分別置于堿性蛋白胨水、GN菌液和氯化鈉結(jié)晶紫菌液中18～24 h后，再分別接種至慶大霉菌素瓊脂、SS瓊脂、氯化鈉蔗糖瓊脂和麥康凱瓊脂平板，37 ℃下培養(yǎng)18～24 h。

1.3.2 平板接種

將增菌后的培養(yǎng)物進(jìn)行平板接種，分別在志賀氏菌、改良科馬嘉0157、阪崎腸桿菌、科馬嘉弧菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌等顯色培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；并接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂、血平板以及SS、EMB平板上（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h；在MYP平板上（36±1）℃培養(yǎng)20 h；改良Y平板上（26±1）℃培養(yǎng)48 h。

1.3.3 挑選可疑菌落

在SS培養(yǎng)基上篩選出菌落呈無(wú)色、半透明、中間呈黑色、革蘭染色為G-桿菌的菌株，接種于TSI培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)18～24 h。在TSI上生長(zhǎng)特性為“斜面產(chǎn)堿，底層產(chǎn)酸產(chǎn)氣，硫化氫陽(yáng)性或陰性”的菌株為目標(biāo)沙門(mén)氏菌，生長(zhǎng)特性為“斜面產(chǎn)堿，底層產(chǎn)酸，硫化氫陰性”的菌株為目標(biāo)志賀氏菌。在氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基上篩選出外形呈圓形隆起、光滑濕潤(rùn)淡藍(lán)的菌落，接種于3.5%TSI培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)18～24 h，在3.5%TSI上生長(zhǎng)特性為“斜面產(chǎn)堿，底層產(chǎn)酸，硫化氫陰性”的菌株即為目標(biāo)副溶血性弧菌；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上挑取多個(gè)乳糖發(fā)酵及不發(fā)酵的，同時(shí)氧化酶陰性和革蘭氏染色陰性的菌落接種于TSI培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，未見(jiàn)可疑菌落。

1.3.4 血清學(xué)和生化試驗(yàn)

（1）沙門(mén)菌、志賀菌鑒定。挑取1.3.3中疑似沙門(mén)菌、志賀菌的目標(biāo)菌落，做生化試驗(yàn)。生化試驗(yàn)結(jié)果為表1的菌株可鑒定為沙門(mén)氏菌，表2的菌株可鑒定為志賀氏菌。

（2）副溶血性弧菌鑒定。挑取1.3.3中疑似副溶血性弧菌的目標(biāo)菌落，做生化實(shí)驗(yàn)。對(duì)于動(dòng)力實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性的菌落，利用多價(jià)血清不凝集排除霍亂弧菌。嗜鹽性試驗(yàn)：挑取菌落分別接種在不含鹽胨水、7%鹽胨水、11%鹽胨水中，37 ℃培養(yǎng)24 h觀察生長(zhǎng)情況。副溶血性弧菌在不含鹽及11%鹽胨水中無(wú)法生長(zhǎng)，在7%鹽胨水中生長(zhǎng)旺盛。符合上述生化反應(yīng)的菌落再進(jìn)一步做生化試驗(yàn)，生化試驗(yàn)結(jié)果符合表3的菌株可鑒定為副溶血性弧菌。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品檢測(cè)結(jié)果

對(duì)1 767份肛拭子標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，共檢測(cè)出112株致病菌，檢出率6.33%。其中，檢出沙門(mén)氏菌10株、副溶血性弧菌101株、志賀氏菌1株。

2.2 致病菌檢出情況分析

對(duì)2012—2018年度儀征市1 767名腹瀉病人的病原菌檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。由表4可知，副溶血性弧菌的檢出率為5.72%（101/1 767），沙門(mén)氏菌檢出率為0.57%（10/1 767），志賀氏菌檢出率為0.057%（1/1 767），致瀉大腸艾希氏菌未檢出。其中，副溶血性弧菌的檢出率較高，其余致病菌檢出率較低，分析原因如下。

（1）隨著生活水平的提高，公眾對(duì)海產(chǎn)品的需求越來(lái)越多，而海鮮制品的儲(chǔ)存、加工、烹飪等環(huán)節(jié)容易受到細(xì)菌污染，從而導(dǎo)致廣泛存在于海產(chǎn)品中的副溶血性弧菌的感染率上升。江蘇屬于沿海省份，目前我國(guó)沿海地區(qū)的副溶血性弧菌感染率已超過(guò)常見(jiàn)腸道病原菌沙門(mén)氏菌、志賀氏菌等，已成為夏秋季細(xì)菌性腹瀉的主要病原菌[7]。

（2）樣本需在使用抗生素前采集，有些微生物在抗生素的作用下，生物性狀及數(shù)量會(huì)受到嚴(yán)重影響，從而導(dǎo)致檢出率降低；樣本采集時(shí)應(yīng)嚴(yán)格實(shí)行無(wú)菌操作，避免由于樣本受到污染、采集部位不準(zhǔn)確、虛假采樣，導(dǎo)致的無(wú)效檢測(cè)；腸道中大腸菌群為優(yōu)勢(shì)菌，樣本保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致大腸菌群過(guò)度繁殖，影響其他致病菌的檢出。

（3）由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)員的個(gè)人素質(zhì)、經(jīng)驗(yàn)、習(xí)慣不同，導(dǎo)致不同的檢驗(yàn)人員得到的結(jié)果可能不一致。對(duì)此，必須要求檢驗(yàn)人員按規(guī)范程序操作。對(duì)于革蘭染色鏡檢、發(fā)酵產(chǎn)氣、觸酶、氧化酶等鑒別試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)仔細(xì)觀察[8]，避免經(jīng)驗(yàn)主義。有些細(xì)菌存在血清的交叉凝集，判定時(shí)一定要先做生化試驗(yàn)，生化試驗(yàn)結(jié)果符合后，再做血清凝集試驗(yàn)，生理鹽水不凝集，才能判定為某種細(xì)菌。同時(shí)，要嚴(yán)格實(shí)行雙復(fù)核制度，避免產(chǎn)生漏檢。

（4）本次檢測(cè)未關(guān)注某些腸道病毒、寄生蟲(chóng)等引起的感染性腹瀉，如諾如病毒、輪狀病毒、柯薩奇病毒、溶組織阿米巴原蟲(chóng)等，可能造成漏檢。

3 結(jié)論

通過(guò)對(duì)儀征市食源性哨點(diǎn)醫(yī)院腸道門(mén)診就診的急性腹瀉患者的1 767份肛門(mén)拭子進(jìn)行細(xì)菌學(xué)鑒定及結(jié)果分析，得出儀征市2012—2018年食源性病原菌主要是副溶血性弧菌、沙門(mén)氏菌、志賀氏菌。為確保檢測(cè)質(zhì)量，今后應(yīng)規(guī)范樣本采集送檢流程，加強(qiáng)檢測(cè)人員的責(zé)任意識(shí)，強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室管理，為預(yù)防食源性疾病發(fā)生、病原菌的溯源以及醫(yī)學(xué)救治等方面提供有力的科學(xué)技術(shù)支持。

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