張鑫瑜,陳雪蓮,趙衛(wèi)秀

上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院婦產(chǎn)科,上海 200127

近年來,隨著人們生活條件及方式的改變,妊娠期糖尿病(GDM)發(fā)生率呈逐年升高趨勢[1]。GDM不僅可增加孕婦及其后代發(fā)生2型糖尿病(T2DM)的風險,也可引發(fā)胎膜早破、巨大兒等并發(fā)癥[2-3]。尋找與GDM發(fā)病相關(guān)的因素,對及時干預并改善GDM妊娠結(jié)局甚是重要。既往研究表明,GDM與微小RNA(miRNA)異常表達、炎癥水平、長鏈非編碼RNA(lncRNA)表達失調(diào)、糖代謝紊亂、胰島素抵抗(IR)等有關(guān)[4-5]。lncRNA、miRNA是兩種非編碼RNA分子,且二者均可輔助診斷GDM[4,6]。lncRNA尿路上皮癌胚抗原1(lncRNA-UCA1)作為lncRNA的一員,在T2DM中呈低表達,lncRNA-UCA1可能是診治T2DM的新靶點[7];而微小RNA-145-5p(miR-145-5p)作為miRNA的一員,在GDM中往往表達上調(diào),miR-145-5p可作為診治GDM的分子靶標[8]。ZENG等[9]研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-UCA1可調(diào)控miR-145-5p表達水平。基于上述研究,本文通過測定lncRNA-UCA1、miR-145-5p在GDM孕婦胎盤組織、臍血中的表達水平,旨在探討二者與GDM及新生兒結(jié)局的關(guān)系,初步了解二者在GDM發(fā)病過程中的作用,也為妊娠期糖尿病的診治提供新的靶點。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年3月至2021年7月上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院收治的經(jīng)口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)確定為GDM的86例孕婦作為GDM組,年齡21～37歲、平均(29.63±5.16)歲;分娩孕周37～40周、平均(38.33±0.91)周。入組患者均通過合理飲食,控制血糖水平,選擇低糖、低脂、高纖維食物,避免高糖食物,避免暴飲暴食,并且每天進行適度有氧運動,如散步。另納入同期經(jīng)OGTT確定為正常糖耐量(NGT)的86例孕婦作為對照組,年齡22～37歲、平均(29.85±5.23)歲;分娩孕周37～40周、平均(38.45±0.95)周。對照組孕婦每天也進行適度運動,并避免高糖飲食。GDM組、對照組年齡、分娩孕周比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究符合《赫爾辛基宣言》要求,獲得上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院倫理委員會批準(審批號:2019-0013605)。所有受試者對本研究知情同意。

GDM組孕婦納入標準:(1)符合文獻[10]中GDM的判定標準;(2)單胎妊娠;(3)臨床資料完善。排除標準:(1)孕前患有糖尿病、高血壓者;(2)合并心功能不全、多囊卵巢綜合征、急慢性炎癥者;(3)合并垂體腎上腺、甲狀腺疾病或其他內(nèi)分泌疾病者;(4)合并艾滋病、肝腎功能障礙、惡性腫瘤者;(5)存在飲酒、吸煙等不良嗜好者;(6)服用激素類藥物或因其他因素造成血糖升高者。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集GDM組、對照組新生兒體重及孕婦年齡、分娩孕周、收縮壓、舒張壓、空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、甘油三酯(TG)的水平等資料。對照組與GDM組的年齡、BMI、孕周、收縮壓和舒張壓比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),GDM組TG水平高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001),見表1。另外,收集孕婦分娩前空腹外周血4～5 mL,分離血清,分別使用全自動生化分析儀(AU5800,Beckman公司)、電化學發(fā)光免疫分析儀(Cobas e 601,羅氏公司)檢測FBG、FINS水平,并依據(jù)穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FINS×FBG/22.5公式計算HOMA-IR,評估孕婦的IR程度。

表1 兩組臨床資料對比

1.2.2標本收集 胎盤組織收集:于孕婦娩出胎盤15 min內(nèi),在胎盤中央位置剪取1.5 cm×1.5 cm×1.5 cm的胎盤組織,用生理鹽水洗3次,即刻置于液氮,凍存一夜,移至-80 ℃冰箱。臍血收集:剪斷臍帶,收集新生兒臍血2～3 mL,靜置30 min,4 500 r/min離心7 min,離心半徑8 cm,分離上清液,置于-80 ℃冰箱。

1.2.3實時熒光定量PCR(qPCR)法檢測血清lncRNA-UCA1、miR-145-5p表達水平 取胎盤組織、臍血標本,使用TRIzol試劑(15596-026,Invitrogen公司)提取胎盤組織及臍血中的總RNA;之后,以M-MLV first strand cDNA Synthesis Kit(TQ2501-01,OMEGA公司)制備cDNA;最后,利用Real-time PCR Master Mix(KGA1339-1,江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司)、qPCR儀(MyGo Pro,IT-IS公司)擴增cDNA,檢測lncRNA-UCA1、miR-145-5p的相對表達水平(以2-ΔΔCt法計算)。

2 結(jié) 果

2.1對照組和GDM組胎盤組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1、miR-145-5p表達水平比較 與對照組相比,GDM組孕婦胎盤組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達水平均降低(P<0.05),miR-145-5p表達水平均升高(P<0.05)。見表2。

表2 對照組和GDM組胎盤組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1、miR-145-5p表達水平比較

2.2對照組和GDM組孕婦IR相關(guān)指標及新生兒體重比較 與對照組相比,GDM組孕婦FINS、FBG、HOMA-IR、HbA1c水平及新生兒體重均顯著升高(P<0.05)。見表3。

表3 對照組和GDM組孕婦FINS、FBG及HOMA-IR、新生兒體重比較

2.3GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1、miR-145-5p表達水平與HOMA-IR、新生兒體重的相關(guān)性 Pearson法分析顯示,GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與HOMA-IR、新生兒體重呈負相關(guān)(P<0.05),miR-145-5p表達水平與HOMA-IR、新生兒體重呈正相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1、miR- 145-5p表達水平與HOMA-IR、新生兒體重的相關(guān)性

2.4GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與miR-145-5p的相關(guān)性 Pearson法分析顯示,GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與miR-145-5p均呈負相關(guān)(r=-0.576、-0.570,均P<0.05)。

3 討 論

lncRNA是一種可穩(wěn)定存在于臍血、胎盤組織中的長鏈非編碼RNA分子,其可介導氧化應(yīng)激反應(yīng),影響滋養(yǎng)層細胞增殖、凋亡,調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導過程,lncRNA可能參與并影響GDM發(fā)生發(fā)展[11-12]。有研究發(fā)現(xiàn),lncRNA-UCA1在糖尿病腎病中表達下調(diào),其可能通過影響炎癥反應(yīng)進而影響糖尿病腎病進程[13];另外,lncRNA-UCA1可通過靶向調(diào)控miR-528-5p修復高糖造成的血管平滑肌細胞損傷,從而緩解糖尿病血管病變[7]。本研究中,GDM孕婦胎盤組織、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達水平均較低,與其在T2DM中的趨勢一致[7],提示lncRNA-UCA1表達水平下調(diào)可能與GDM病理發(fā)展相關(guān),由此推測,lncRNA-UCA1可能通過與有關(guān)靶基因結(jié)合,進而影響滋養(yǎng)細胞遷移、凋亡,調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng),從而在GDM中起調(diào)控作用。另外,本研究結(jié)果顯示,GDM孕婦FBG、FINS、HOMA-IR水平較高,與郭碧蓮等[14]研究趨勢相符,且GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與HOMA-IR均呈負相關(guān),提示lncRNA-UCA1表達水平可能與GDM孕婦糖代謝紊亂、IR密切相關(guān),其有作為GDM診治靶點的潛力。有研究顯示,新生兒體重異常增加、巨大兒是GDM的常見并發(fā)癥。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),GDM組新生兒體重顯著高于對照組,且GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與新生兒體重也呈負相關(guān),提示lncRNA-UCA1表達水平降低可能增加GDM孕婦分娩巨大兒的風險,臨床及時監(jiān)控lncRNA-UCA1表達水平可能有益于降低巨大兒出生率。

miRNA是一種短鏈非編碼RNA,在臍血、胎盤組織中可穩(wěn)定存在,其可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細胞侵襲,介導自噬,調(diào)控信號轉(zhuǎn)導,參與炎癥反應(yīng),在GDM中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[15-16]。有關(guān)報道顯示,miR-145-5p在糖尿病視網(wǎng)膜病變中呈高表達,下調(diào)miR-145-5p可延緩糖尿病視網(wǎng)膜病變的病情進展[17];另外,SHAHROKHI等[18]研究發(fā)現(xiàn),miR-145-5p在T2DM中表達失調(diào),miR-145-5p可能是診斷T2DM的潛在標志物。本研究中,GDM孕婦胎盤組織、臍血中miR-145-5p表達水平較高,與ZAMANIAN等[8]研究結(jié)果相符,提示miR-145-5p可能參與GDM發(fā)病過程。分析原因,miR-145-5p可能通過影響炎癥反應(yīng),調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細胞侵襲、凋亡,從而影響GDM疾病進展。本研究結(jié)果還顯示,GDM孕婦胎盤組織、臍血miR-145-5p表達水平與HOMA-IR、新生兒體重呈正相關(guān),提示miR-145-5p的表達水平可能與IR、新生兒體重密切相關(guān),miR-145-5p可能是預防GDM孕婦發(fā)生IR及新生兒體重異常的潛在標志物,推測miR-145-5p表達水平升高會通過影響炎癥反應(yīng)抑制胰島細胞活性,進而導致孕婦胰島素抵抗,升高血糖并通過影響炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細胞侵襲、凋亡參與GDM疾病發(fā)展,引發(fā)孕婦不良妊娠結(jié)局。此外,本研究經(jīng)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),GDM孕婦胎盤組織、臍血lncRNA-UCA1表達水平與miR-145-5p均呈負相關(guān),提示lncRNA-UCA1可能與miR-145-5p協(xié)同影響GDM疾病進展。

綜上所述,GDM孕婦胎盤、臍血中l(wèi)ncRNA-UCA1表達水平較低,miR-145-5p表達水平較高,二者均與IR、新生兒體重顯著相關(guān),可能為臨床防治GDM、預防巨大兒出生提供新思路。本文結(jié)合既往研究,從基因表達失調(diào)方面初步探討了與GDM發(fā)病相關(guān)的機制,為臨床防治GDM、預防巨大兒出生提供了一定的參考,但后期仍需擴大樣本量,并需結(jié)合患者指標動態(tài)水平變化及基礎(chǔ)實驗,探究lncRNA-UCA1與miR-145-5p在GDM中的作用機制,為靶向診治GDM孕婦并改善妊娠結(jié)局提供依據(jù)。