許振業(yè) 孫杰 程國杰

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）主要是冠狀動脈堵塞及供血不足所致的心肌壞死，嚴(yán)重者易發(fā)生心律失常、心力衰竭及心源性休克等心血管事件，增加死亡風(fēng)險［1-2］。探尋可靠、準(zhǔn)確的臨床指標(biāo)對AMI 早期診斷、治療及預(yù)后評估尤為重要。臨床研究發(fā)現(xiàn)，微小RNA（MicroRNA，miRNA）在心肌病、心力衰竭及心肌梗死等心臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［3］。國內(nèi)報道認(rèn)為，miRNA-21在AMI 患者血清中呈高表達(dá)，可能成為AMI 早期診斷的潛在標(biāo)志物［4］。AMI 發(fā)生過程中缺氧缺血不僅會引起氧化應(yīng)激損傷，還會激活細(xì)胞凋亡［5］。半胱氨酸天冬酶-3（cysteine proteinase-3，Caspase-3）、可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)性凋亡誘導(dǎo)配體（soluble tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，sTRAIL）、可溶性凋亡相關(guān)因子（soluble apoptosis-related factor，sFas）是細(xì)胞凋亡過程中的重要因子，Caspase-3 屬于細(xì)胞凋亡執(zhí)行因子［6］；sTRAIL 具有凋亡誘導(dǎo)功能，可提高Caspase 的促凋亡活性［7］；sFas 能影響Caspase 介導(dǎo)的級聯(lián)放大反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞凋亡［8］。本研究通過檢測AMI 患者血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 水平，分析四者相關(guān)性及對AMI 的診斷價值，旨在為臨床診斷AMI 提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取北京市大興區(qū)人民醫(yī)院2020 年4 月至2022 年4 月112 例AMI 患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①滿足《急性心肌梗死診斷和治療指南》［9］中AMI 標(biāo)準(zhǔn)；②首次確診；③年齡不低于18 歲；④患者家屬簽署知情同意書；⑤發(fā)病至入院時間≤12 h；⑥既往無心臟手術(shù)史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝、腦、腎等臟器損傷者；②妊娠或哺乳期；③其他心臟疾病，如心肌炎、心臟瓣膜病及心肌病等；④認(rèn)知功能及凝血功能障礙者；⑤近期接受其他相關(guān)治療者；⑥感染性疾病、惡性腫瘤、自身免疫缺陷者。選取同期健康體檢者70 名作為對照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 血清miRNA-21及細(xì)胞凋亡因子水平檢測

對照組于體檢當(dāng)日、研究組于入院當(dāng)日采集空腹靜脈血5 mL，以3 500 r/min 離心10 min（離心半徑10 cm）后取血清樣本待測。采用Trizol 試劑盒對血清進(jìn)行總RNA 提取，驗(yàn)證完整性后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，采用實(shí)時熒光定量聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測血清miRNA-21。內(nèi)參選擇U6，miRNA-21上游引物序列：5′-TTTCTTGCCGTTCTGTAAGTG-3′，下游引物序列：5′-TGGATATGGATGGTCAGATGAA-3′，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min，95℃變形35 s，60℃退火1 min，72℃延伸30 s，連續(xù)循環(huán)40 次，采用2-ΔΔCt計算miRNA-21表達(dá)水平。采用Caspase-3 酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技公司）檢測血清Caspase-3 水平，采用sTRAIL 酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（上海晶抗生物工程有限公司）檢測血清sTRAIL 水平，采用sFas 酶聯(lián)免疫吸附法試劑盒（上?？道噬锟萍加邢薰荆z測血清sFas 水平。

1.2.2 冠脈病變程度評估

研究組患者行雙側(cè)冠狀動脈造影檢測，病變血管定義為：造影結(jié)果顯示，左冠狀動脈回旋支（LCX）、前降支（LAD）、左主干（LM）、右冠狀動脈（RCA），任一節(jié)段阻塞程度≥50%。根據(jù)冠脈病變程度分為單支組（n=30）、雙支組（n=48）及三支組（n=34）。病變血管及冠脈病變程度均參考《急性心肌梗死診斷和治療指南》［9］診斷。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用（）表示，三組間比較行單因素方差分析，兩組間比較行t檢驗(yàn)；采用Pearson 系數(shù)分析miRNA-21與Caspase-3、sTRAIL 及sFas 的相關(guān)性；采用ROC 曲線分析血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 對AMI 的診斷價值；采用Spearman 系數(shù)分析相關(guān)性。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、總膽固醇、糖尿病史、高血壓史比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（），n（%）］

表1 兩組一般資料比較［（），n（%）］Table 1 Comparison of general data between the two groups［（），n（%）］

2.2 兩組血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平比較

研究組血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 水平均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平比較（）Table 2 Comparison of serum miRNA-21 and apoptosis factors between the two groups（）

表2 兩組血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平比較（）Table 2 Comparison of serum miRNA-21 and apoptosis factors between the two groups（）

2.3 血清miRNA-21水平與細(xì)胞凋亡因子的相關(guān)性

Pearson 相關(guān)性分析顯示，血清miRNA-21均與Caspase-3（r=0.639）、sTRAIL（r=0.751）、sFas（r=0.728）呈正相關(guān)（P＜0.05）。

2.4 血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平對AMI的診斷價值

由ROC 曲線可知，血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 聯(lián)合診斷AMI 的AUC 為0.940，高于四者單獨(dú)診斷（P＜0.05）。見表3、圖1。

圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curves

表3 血清miRNA-21及細(xì)胞凋亡因子水平對AMI的診斷價值Table 3 Diagnostic value of serum miRNA-21 and apoptosis factors for AMI

2.5 AMI 不同冠脈病變程度患者血清miRNA-21及細(xì)胞凋亡因子水平比較

三組血 清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 水平相比：三支組＞雙支組＞單支，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 AMI 不同冠脈病變程度患者血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平比較（）Table 4 Comparison of serum miRNA-21 and apoptosis factors in AMI patients with different severity of coronary lesions（）

表4 AMI 不同冠脈病變程度患者血清miRNA-21 及細(xì)胞凋亡因子水平比較（）Table 4 Comparison of serum miRNA-21 and apoptosis factors in AMI patients with different severity of coronary lesions（）

注：與單支組比較，aP＜0.05；與雙支組比較，bP＜0.05。

2.6 血清miRNA-21 及與細(xì)胞凋亡因子與冠脈病變程度的相關(guān)性

Spearman 相關(guān)性 分析顯 示，miRNA-21（r=0.645）、Caspase-3（r=0.691）、sTRAIL（r=0.768）及sFas 均與冠脈病變程度呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

隨著飲食結(jié)構(gòu)變化及生活方式轉(zhuǎn)變，我國AMI 患病人數(shù)不斷增加，且出現(xiàn)年輕化趨勢［10］。AMI 具有起病急驟、進(jìn)展迅速、預(yù)后不良率較高等特點(diǎn)，以心律失常、胸痛及循環(huán)功能損傷等表現(xiàn)為主，屬于嚴(yán)重的冠心?。?1］。及早診斷AMI 有利于提高治療效果、促進(jìn)患者轉(zhuǎn)歸。心電圖是診斷AMI 的常用手段，具有良好的診斷效果，但其存在一定的漏診及誤診，可能是電極傳導(dǎo)阻滯、心肌受損范圍、部位及嚴(yán)重程度等因素所致［12］。冠脈造影是診斷AMI 的有效方法，但其屬于有創(chuàng)檢查，且檢測費(fèi)用高，在常規(guī)篩查、病情監(jiān)測等方面存在局限［13］。因此，探尋無創(chuàng)、準(zhǔn)確、適用于普檢及監(jiān)測的血清學(xué)指標(biāo)對AMI 診斷及預(yù)后改善具有重要的價值。

miRNA是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的非編碼RNA，可以調(diào)控細(xì)胞生長、分化、增殖和代謝過程，并能通過配對靶基因mRNA，誘導(dǎo)沉默復(fù)合體，從而調(diào)控mRNA 翻譯過程［14］。研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-21與心肌纖維化和心肌肥厚的發(fā)生存在聯(lián)系，有望成為心臟疾病的潛在標(biāo)記物［15］。國內(nèi)報道也顯示，miRNA-21在心臟負(fù)荷明顯增加時會出現(xiàn)表達(dá)上調(diào)，miRNA-21過表達(dá)對纖維化基因程序有激活作用，可加快心肌細(xì)胞纖維化過程［16］。臨床研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-21在冠心病患者外周血中呈高表達(dá)，且表達(dá)水平與冠狀動脈病變程度呈正相關(guān)［17］。AMI 發(fā)生后，機(jī)體缺氧缺血不僅會促進(jìn)氧自由基釋放，引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，還會激活細(xì)胞凋亡過程［18］。在細(xì)胞凋亡過程中，Caspase-3、sTRAIL 及sFas 發(fā)揮著重要作用，Caspase-3 是細(xì)胞凋亡程序的執(zhí)行分子，sTRAIL 及sFas 均屬于腫瘤壞死因子超家族的成員。

本研究結(jié)果提示miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 與AMI 發(fā)生有關(guān)。分析原因?yàn)椋簃iRNA-21能影響冠狀動脈粥樣硬化過程，對炎性因子釋放及炎癥反應(yīng)具有調(diào)控作用，可影響斑塊穩(wěn)定性，加重病情進(jìn)展；Caspase-3 能通過促進(jìn)DNA 雙聯(lián)斷裂過程，影響心肌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)AMI 發(fā)生［19］；sTRAIL 可通過結(jié)合膜受體增強(qiáng)Caspase 活性，從而誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，加重AMI 病情進(jìn)展；Fas 抗原表達(dá)水平增加導(dǎo)致的冠狀動脈血管平滑肌細(xì)胞凋亡是引起不穩(wěn)定斑塊破裂的主要因素［20］，而血清sFas 水平能反映Fas 抗原表達(dá)水平，其可逃避Fas/FasL 激活的細(xì)胞凋亡，引起細(xì)胞增殖及凋亡平衡被破壞，從而導(dǎo)致動脈粥樣硬化，引起AMI。進(jìn)一步的相關(guān)性分析提示miRNA-21與細(xì)胞凋亡因子水平關(guān)系密切，推測miRNA-21對AMI 的作用機(jī)制可能與細(xì)胞凋亡過程有關(guān)。ROC 曲線分析發(fā)現(xiàn)提示臨床應(yīng)密切監(jiān)測血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 水平變化，及早診斷AMI。本研究結(jié)果說明血清miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 水平與AMI 患者冠脈病變程度相關(guān)。進(jìn)一步的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas 均與冠脈病變程度呈正相關(guān)，也證明miRNA-21、Caspase-3、sTRAIL 及sFas能用于評估冠脈病變程度。

綜上所述，miRNA-21與細(xì)胞凋亡因子在AMI患者血清中呈高表達(dá)，且均與冠脈病變程度相關(guān)，有望成為診斷AMI 的參考指標(biāo)。