◎ 金 定

（扎魯特旗市場(chǎng)檢驗(yàn)檢測(cè)中心，內(nèi)蒙古 通遼 029100）

氯芬新是一種殺菌劑和消毒劑，長(zhǎng)期食用含有氯芬新殘留的水產(chǎn)品，會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生不良影響。氯芬新是一種長(zhǎng)效殘留農(nóng)藥，當(dāng)水產(chǎn)品中存在氯芬新殘留時(shí)，可能會(huì)造成環(huán)境污染，對(duì)水生生物和生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生負(fù)面影響。此外，氯芬新還可能在食品加工過(guò)程中轉(zhuǎn)化為有毒物質(zhì)，增加食品安全風(fēng)險(xiǎn)。為此，檢驗(yàn)水產(chǎn)品中的氯芬新殘留，探尋可靠、精確的檢測(cè)方法是必要的[1]。

1 材料與設(shè)備

1.1 材料與試劑

從當(dāng)?shù)厥袌?chǎng)中購(gòu)買草魚、牡蠣、對(duì)蝦、梭子蟹、中華鱉、海參等常見的水產(chǎn)品。本研究所用試劑如表1 所示。

表1 試劑表

1.2 儀器與設(shè)備

研究所用儀器與設(shè)備見表2。

表2 儀器設(shè)備表

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液與流動(dòng)相配置

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制表如表3 所示。在標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的基礎(chǔ)上，按照定容的配置方法，分別配置0.5、1.0、2.0、10.0、50.0、100.0 ng·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

表3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制表

水相的配置方法：準(zhǔn)確稱取0.077 08 g 的乙酸銨，將乙酸銨加入燒杯中攪拌，直到完全溶解，將溶解后的乙酸銨轉(zhuǎn)移至一個(gè)500 mL 的容量瓶中，超聲處理10 min，使溶液更加均勻、穩(wěn)定。

有機(jī)相的配置方法：使用適當(dāng)?shù)娜萘科苛咳?00 mL 的色譜級(jí)乙腈，將乙腈緩慢倒入流動(dòng)相瓶中，并超聲波處理10 min。

2 方法

2.1 樣品前處理

樣品制備：將新鮮的草魚、牡蠣、對(duì)蝦、梭子蟹、中華鱉和海參，切碎放入高速組織均質(zhì)機(jī)中。完成均質(zhì)后，將樣品轉(zhuǎn)移到干凈的食品容器中，并用標(biāo)簽標(biāo)明樣品的名稱和日期，確保封閉容器以防止空氣和異物進(jìn)入。

樣品提取方法：使用電子天平分別稱取5.00 g 的魚、蝦、貝、海參、甲魚和蟹試樣，準(zhǔn)備50 mL 具有螺旋蓋的聚丙烯離心管，加入陶瓷均質(zhì)子和均質(zhì)樣品，向離心管中加入10 mL 乙腈、4 g 無(wú)水Na2SO4和1 g NaCl，放入離心機(jī)中，以8 000 rpm 的速度，離心5 min。

樣品凈化方法：準(zhǔn)備一個(gè)含有400 mg PSA、400 mg C18 和1 200 mg 無(wú)水MgSO4的15 mL 離心管，使用移液器將6 mL 上清液吸取到離心管中，渦旋攪拌1 min。隨后，放入離心機(jī)中以8 000 rpm 的速度離心5 min，取出上清液，使用0.22 μm 濾膜進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾后的上清液轉(zhuǎn)移到進(jìn)樣瓶中，并密封好。

2.2 儀器條件

本文所用的儀器條件和質(zhì)譜參數(shù)如表4、5 所示。

表4 儀器條件表

表5 質(zhì)譜參數(shù)表

3 結(jié)果分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性

使用乙腈溶劑將購(gòu)置的標(biāo)準(zhǔn)品溶解，并配制成所需的適量濃度的儲(chǔ)備液，將配制好的儲(chǔ)備液分裝到棕色西林瓶中。使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，并記錄每次測(cè)定的峰面積[2]。根據(jù)氯芬新標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定結(jié)果來(lái)看，氯芬新的峰面積變化率不大，保持在97%～98%，故標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液在-20 ℃條件下的放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)6 個(gè)月。

3.2 前處理?xiàng)l件的選擇

根據(jù)本研究結(jié)果，乙腈和甲醇的提取效率較高，可以有效提取樣品中的油脂和色素[3]。1%甲酸乙腈在提取草魚和對(duì)蝦樣品時(shí)，也表現(xiàn)出良好的提取效果。

試驗(yàn)中為優(yōu)化提取次數(shù)，選擇2 組空白樣本進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn)，對(duì)照樣品中加入10 mL 的乙腈重復(fù)提取1次[4]。根據(jù)結(jié)果來(lái)看，提取1 次即可完成對(duì)氯芬新藥物的提取要求，并且與多次提取相比，1 次提取的回收率、檢出限和重復(fù)性沒有顯著變化。因此，考慮到試劑成本和前處理時(shí)間的因素，選擇1 次提取是符合實(shí)際要求的最佳選擇。

本文選擇不同量的C18 和PSA 填料的QuEChERS復(fù)合凈化劑，分別對(duì)魚和蝦凈化后的基質(zhì)效應(yīng)展開分析。其中，復(fù)合凈化劑 A 指含 150 mg PSA、150 mg C18、900 mg 無(wú)水MgSO4；復(fù)合凈化劑B 為含400 mg PSA、400 mg C18、1 200 mg 無(wú)水Mg SO4。將兩個(gè)獨(dú)立的樣本進(jìn)行t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，兩種復(fù)合凈化劑對(duì)于對(duì)蝦基質(zhì)，P（F≤f）單尾＞0.025，整體差異不顯著。

3.3 質(zhì)譜條件的選擇

在負(fù)離子模式下，取1 μg·m L-1氯芬新標(biāo)準(zhǔn)溶液，以流動(dòng)注射的方式，注入質(zhì)譜儀中進(jìn)行全掃描，對(duì)噴霧電壓源的離子傳輸管溫度、鞘氣電壓和輔助氣電壓等離子源參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，進(jìn)而確定測(cè)定離子源的最佳條件。以氯芬新的離子峰為母離子，分別優(yōu)化碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)，使分子離子和特征碎片離子強(qiáng)度達(dá)到最大，進(jìn)而確定以豐度最大的二級(jí)碎片離子作為定量離子，次強(qiáng)碎片離子作為定性離子[5]。

3.4 方法學(xué)評(píng)價(jià)

本實(shí)驗(yàn)采用配制溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液取向和基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液曲線建立數(shù)學(xué)模型，來(lái)評(píng)價(jià)運(yùn)用HPLC-MS/MS檢測(cè)的基質(zhì)效應(yīng)。按照公式（1）計(jì)算基質(zhì)（ME）。

式中，A為建立溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線后線性方程斜率；B為機(jī)制標(biāo)準(zhǔn)曲線建立后的線性方程斜率。當(dāng)ME絕對(duì)值小于20%，說(shuō)明基質(zhì)效應(yīng)較弱；若在20%～50%，說(shuō)明中等；若大于50%，則表明基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)。

根據(jù)表6 結(jié)果來(lái)看，氯芬新殘留在上述 6 種水產(chǎn)品中的基質(zhì)效應(yīng)絕對(duì)值在5.83%～74.61%。其中，對(duì)蝦、牡蠣和海參3 種水產(chǎn)品基質(zhì)對(duì)目標(biāo)物信號(hào)影響存在較弱的基質(zhì)效應(yīng)，其余均有較強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)且均為抑制作用。綜合來(lái)看，相較于液相色譜法，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法結(jié)合了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)，具有高選擇性、高靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)目標(biāo)物的分離度和響應(yīng)度更好。

表6 氯芬新機(jī)制匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線的比較表