鄧 杰，周長(zhǎng)明，丁 銳，張雪艷

（北京市藥品檢驗(yàn)研究院·國(guó)家藥品監(jiān)督管理局創(chuàng)新藥物安全研究與評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室·中藥成分分析與生物評(píng)價(jià)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102206）

甘油果糖氯化鈉注射液在臨床主要用于治療腦血管病、腦外傷、腦腫瘤、顱內(nèi)炎癥及其他原因引起的急慢性顱內(nèi)壓增高和腦水腫等［1］。其處方為甘油、果糖和氯化鈉3種主成分，無其他輔料，溶劑為注射用水，部分企業(yè)的甘油果糖氯化鈉注射液處方中含有適量鹽酸，用于調(diào)節(jié)pH。目前，甘油果糖氯化鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有2020年版《中國(guó)藥典（二部）》［2］和國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH13712021［3］。離子色譜法是一種用于分析陽離子、陰離子等離子性物質(zhì)的檢測(cè)方法［4-6］，具有良好的選擇性和較高的靈敏度，逐漸成為測(cè)定各種陽離子或陰離子的必要方法［7-10］。離子色譜- 抑制電導(dǎo)法的背景電導(dǎo)能通過其抑制器明顯減少，且能有效增加分析物信號(hào)。本研究中建立了測(cè)定甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量的離子色譜法，旨在提高甘油果糖氯化鈉注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Dionex ICS-6000型離子色譜儀，Dionex CSRS 300型抑制器（規(guī)格為4 mm），均購(gòu)自Thermo Fisher科技公司；頗爾PALL Cascada 型超純水系統(tǒng)（美谷富迪生物儀器＜上海＞有限公司）；XA205DU 型分析天平（梅特勒托利多儀器＜上海＞有限公司，精度為0.01 mg）。

1.2 試藥

氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)為GBW06103e，含量為99.992%），氯化鉀標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)為GBW06109b，含量為99.97%），均購(gòu)自中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院；氯化銨標(biāo)準(zhǔn)品（國(guó)防科技工業(yè)應(yīng)用化學(xué)一級(jí)計(jì)量站，批號(hào)為GBW＜E ＞060322，含量為99.98%）；氯化鎂容量分析用溶液標(biāo)準(zhǔn)品（北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)為GBW ＜E ＞0084284，濃度為0.100 0 mol/L）；氯化鈣（美國(guó)Sigma-Aldrich 公司，批號(hào)為499609，含量為99.99%）；甲烷磺酸（分析純，上海麥克林生化科技有限公司）；水為超純水；甘油果糖氯化鈉注射液（廠家A，批號(hào)分別為A220117302，A220118301，A220314305；廠家B，批號(hào)分別為20022631，20022831，20030131；廠家C，批號(hào)為T21121303）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Dionex IonPacTMCS12A 分析柱（250 mm ×4 mm，8 μm），Dionex IonPacTMCG12A 保護(hù)柱（50 mm ×4 mm，8 μm）；淋洗液：25 mmol/L 甲烷磺酸溶液；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器；抑制器電流：79 mA；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：25 μL。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液在此色譜條件下的色譜圖見圖1，各陽離子間分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于2 000。

圖1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)離子色譜圖1.Na + 2.NH4+ 3.K + 4.Mg2+ 5.Ca2+Fig.1 Ion chromatogram of the system suitability test

2.2 溶液制備

取氯化鈉、氯化鉀、氯化銨標(biāo)準(zhǔn)品和氯化鈣各適量，精密稱定，精密量取氯化鎂容量分析用溶液標(biāo)準(zhǔn)品（濃度為0.100 0 mol/L）適量，用水制成質(zhì)量濃度約為10 μg/mL 的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液。取氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)品18.65 mg，精密稱定，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，用水溶解并定容，搖勻，精密量取5.0 mL，置20 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，作為對(duì)照品貯備液（質(zhì)量濃度為93.24 μg/ mL）；精密量取對(duì)照品貯備液1.0，1.0，1.0，1.0，2.0，4.0 mL，分別置100，25，10，5，5，5 mL聚乙烯容量瓶中，用水定容，搖勻，即得質(zhì)量濃度分別為0.93，3.73，9.32，18.65，37.30，74.59 μg/mL的系列對(duì)照品溶液。精密量取甘油果糖氯化鈉注射液2.5 mL，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，作為供試品貯備液；精密量取供試品貯備液1.0 mL，置25 mL 聚乙烯容量瓶中，用水定容，搖勻，作為供試品溶液。以水作為空白溶劑。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.2 項(xiàng)下對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為18.65 μg/mL）、供試品溶液和空白溶劑各適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖中，相同保留時(shí)間處均有鈉離子（Na+）峰出現(xiàn)，且空白溶劑不干擾Na+的測(cè)定。詳見圖2。

A. 對(duì)照品溶液 B. 供試品溶液 C. 空白溶劑圖2 專屬性試驗(yàn)離子色譜圖1.Na+A.Reference solution B.Test solution C.Blank solventFig.2 Ion chromatograms of the specificity test

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2 項(xiàng)下系列對(duì)照品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以氯化鈉的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.102 4X+0.056 1（r=0.999 6，n=6）。結(jié)果表明，氯化鈉的質(zhì)量濃度在0.93～74.59 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

定量限與檢測(cè)限確定：精密吸取對(duì)照品貯備液（質(zhì)量濃度為93.24 μg/mL）適量，置10 mL 聚乙烯容量瓶中，加水逐級(jí)稀釋成系列質(zhì)量濃度，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別以信噪比（S/N）為10 倍和3 倍時(shí)的質(zhì)量濃度為定量限和檢測(cè)限。結(jié)果氯化鈉的定量限為0.03 μg/mL，檢測(cè)限為0.01 μg/mL。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為A220117302）適量，按2.2 項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6 份，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果氯化鈉的平均含量為102.97%，RSD為0.69%（n= 6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取樣品（批號(hào)為A220117302）適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果Na+峰面積的RSD為0.83%（n=6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品（批號(hào)為A220117302）2.5 mL，置50 mL 聚乙烯容量瓶中，加水定容，搖勻，精密量取1.0 mL，置25 mL 聚乙烯容量瓶中，平行9份，分別精密加入對(duì)照品貯備液（質(zhì)量濃度為93.24 μg/mL）4.0，5.0，6.0 mL，各3 份，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.4 樣品含量測(cè)定

精密量取樣品（批號(hào)分別為A220117302，A220118301，A220314305，20022631，20022831，20030131，T21121303）適量，按2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算樣品中氯化鈉的含量，并與法定檢驗(yàn)方法測(cè)定結(jié)果比較［2-3］。結(jié)果見表2。

表2 樣品中氯化鈉含量測(cè)定結(jié)果（%）Tab.2 Results of the content determination of sodium chloride in samples（%）

3 討論

3.1 檢測(cè)方法選擇

2020年版《中國(guó)藥典（二部）》標(biāo)準(zhǔn)中，氯化鈉、果糖、甘油的含量測(cè)定采用高效液相色譜-紫外光譜（HPLC-UV）法，以磺酸型聚苯乙烯與二乙烯苯共聚體H型陽離子交換樹脂為色譜柱，以0.04 mol/L 磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為200 nm；國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH13712021中，氯化鈉、果糖、甘油的含量測(cè)定采用高效液相色譜-示差折光檢測(cè)（HPLC- RID）法。這2 種方法存在以下缺點(diǎn)，色譜柱價(jià)格較貴，使用壽命短，適用面窄［11］；UV 檢測(cè)器中，氯化鈉在200 nm 波長(zhǎng)處吸收弱［1］，專屬性不高，重復(fù)性較差，不利于產(chǎn)品的質(zhì)量控制；RID 主要用于測(cè)定果糖含量［12-13］，對(duì)氯化鈉測(cè)定專屬性一般，且這類檢測(cè)器普及程度較低，受環(huán)境溫度、流動(dòng)相組成等影響較大，穩(wěn)定性較差［14-15］。除HPLC 法外，甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的檢測(cè)還可采用滴定法［1］。滴定溶液常采用硝酸銀溶液，其原理是利用銀離子與氯離子發(fā)生沉淀反應(yīng)，以滴定樣品中的氯化鈉含量。滴定法因指示劑量多少、指示劑變色終點(diǎn)和肉眼判斷終點(diǎn)的差異會(huì)引起誤差。另外，部分生產(chǎn)企業(yè)甘油果糖氯化鈉注射液的處方工藝中用鹽酸作為pH 調(diào)節(jié)劑。因此，滴定法不能準(zhǔn)確測(cè)定甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的含量。

離子色譜法具有快速方便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，不僅可用于多種注射液的含量測(cè)定［7，16-18］，還可用于藥品、食品、能源、水質(zhì)等領(lǐng)域測(cè)定Na+或氯化鈉含量［19-24］。該方法對(duì)氯化鈉的分離效果良好，但在試驗(yàn)過程中要使用聚乙烯材料容器，有效降低了Na+的引入，故最終采用離子色譜法。

3.2 色譜柱選擇

甘油果糖氯化鈉注射液現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，2020年版《中國(guó)藥典（二部）》推薦使用H 型陽離子柱；國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH13712021 中，推薦使用強(qiáng)陽離子鈣型交換柱。但上述2個(gè)色譜柱的價(jià)格昂貴，使用壽命短，且適用面窄。柳楊等［11］推薦使用的氨基柱雖價(jià)格便宜易得，但使用壽命極短，且流動(dòng)相中水相比例越高，越易發(fā)生水解。離子色譜分析柱的效率和容量高，穩(wěn)定性好，使用壽命長(zhǎng)，故選擇此色譜柱。

3.3 方法評(píng)價(jià)

2020年版《中國(guó)藥典（二部）》和國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)YBH13712021 中規(guī)定，甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉含量應(yīng)為標(biāo)示量的93.0%～107.0%。本研究中建立的離子色譜法測(cè)定的含量均在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，與法定檢驗(yàn)方案測(cè)定結(jié)果比較，多數(shù)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差在2%以內(nèi)。同一廠家、不同批次間，離子色譜法測(cè)定結(jié)果較法定檢驗(yàn)方法測(cè)定結(jié)果波動(dòng)小。本研究中建立的方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高，可用于甘油果糖氯化鈉注射液中氯化鈉的含量測(cè)定。