◎ 曹 佳，陳旭晉，周鋒杰，陸宇陽

（蘇州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測中心，江蘇 蘇州 215000）

常見的甜味劑如甜蜜素（環(huán)己基氨基磺酸鈉）和紐甜，它們是一類食品添加劑，往往添加于加工后的食品和飲料中[3]?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）規(guī)定，新鮮水果中不允許使用香料、香精等食品添加劑[4]。

目前甜味劑的常用檢測方法有氣相色譜法[5-6]、液相色譜法[7-9]、液質(zhì)聯(lián)用法[10-12]，其中氣相色譜法和液相色譜法的前處理過程較為煩瑣，涉及目標(biāo)物的轉(zhuǎn)化，步驟較多，且試劑消耗量大，目前針對固體樣品主要采取此類方法。而液質(zhì)聯(lián)用法的前處理過程相對簡單，但目前的文獻(xiàn)資料主要用于白酒[13]、飲料[14]等液體樣品，在固體樣品中的應(yīng)用較少。

本文建立一種使用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀檢測葡萄樣品中甜蜜素和紐甜的檢測方法，前處理方法參考現(xiàn)有的國標(biāo)和文獻(xiàn)方法中水果的液相法和酒類的液質(zhì)的方法，并進(jìn)行優(yōu)化完善，具有操作簡單、分辨率高、抗干擾力強(qiáng)等特點(diǎn)，為檢測包括新鮮水果在內(nèi)的固體樣品中的甜味劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮葡萄樣品（市售）；環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品（1 000 mg·L-1，上海安譜）；紐甜標(biāo)準(zhǔn)品（1 000 mg·L-1，上海安譜）；甲醇（Honeywell，色譜純）；乙酸銨（Honeywell，色譜純）；實(shí)驗(yàn)用超純水為一級水（超純水機(jī)Dinect Q-3 制備）。

1.2 儀器與設(shè)備

三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀（型號HPMS-TQ，華譜儀器）；超純水機(jī)（Dinect Q-3）；高速離心機(jī)（德國eppendorf 公司）；百分之一電子天平（ADAM PGC1502i）；超聲波清洗機(jī)（深圳潔盟）；試管振蕩器（CST）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

單標(biāo)儲備液（100 mg·L-1）：分別精確吸取1 mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液和紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液于各自的10 mL 容量瓶中，定容至刻度。

混標(biāo)中間液a（1 mg·L-1）：分別精確吸取100 μL上述各單標(biāo)儲備液于同一10 mL容量瓶中，定容至刻度。

經(jīng)權(quán)之間是相輔相成的關(guān)系，是你中有我、我中有你的辯證思維?！敖?jīng)”是恒常不變的原則與規(guī)律，如果固守于經(jīng)，便會走向極端與僵化；“權(quán)”是達(dá)經(jīng)的方法與手段，如若執(zhí)意行權(quán)而無視經(jīng)，則會使思想行為失去理論指導(dǎo)。經(jīng)與權(quán)都是人們在面對具體事物和情境時，做出具體的實(shí)踐活動，理解、分析、權(quán)衡、判斷都是具體體現(xiàn)?！睹献印るx婁上》對“嫂溺，則援之以手乎？”悖論境地的處置，就是權(quán)變的最好詮釋。

混標(biāo)中間液b（0.1 mg·L-1）：精確吸取1 mL 上述混標(biāo)中間液a 于10 mL 容量瓶中，定容至刻度。

標(biāo)準(zhǔn)曲線：分別吸取100 μL、200 μL、500 μL 的混標(biāo)中間液b 和100 μL、200 μL、500 μL 的混標(biāo)中間液a 于各自的10 mL 容量瓶中，定容至刻度，得到濃度為1 μg·L-1、2 μg·L-1、5 μg·L-1、10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 樣品前處理

稱取勻漿后的樣品10 g（精確到0.01 g）于50 mL離心管中，加10 mL 超純水，振蕩2 min 后超聲提取10 min，8 000 r·min-1轉(zhuǎn)速下離心3 min，取上清液過0.22 μm 水系濾膜，收集于進(jìn)樣小瓶中，待測。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。流動相A：5 mmol·L-1乙酸銨；流動相B：甲醇；流速：0.3 mL·min-1；色譜柱：waters ACQUITY UPLC HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；梯度洗脫條件如表1 所示。

表1 流動相梯度洗脫條件表

（2）質(zhì)譜條件。ESI 離子源，多反應(yīng)監(jiān)測MRM模式，掃描方式：負(fù)離子掃描；離子源溫度400 ℃，噴霧電壓-4 500 V，氣簾氣35 psi，輔助加熱氣50 psi。其他質(zhì)譜條件如表2 所示。

表2 質(zhì)譜條件表

1.3.4 結(jié)果計(jì)算

樣品中被測物質(zhì)含量計(jì)算公式為

式中：X為樣品中被測物的含量，mg·kg-1；c為從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中得到的進(jìn)樣液中被測物的質(zhì)量濃度，μg·mL-1；V為樣品中加入的提取液的體積，mL；m為樣品的質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

選用電噴霧離子源（ESI），甜蜜素僅在負(fù)離子模式掃描時有較高的響應(yīng)值，178.0/79.9 離子對的響應(yīng)值最高，適合作為定量離子對，其他離子對中響應(yīng)值較高的為178.0/178.0，作為定性離子對；紐甜則在正負(fù)離子模式時均有較高的響應(yīng)，考慮到流動相選擇的便捷性以及避免正負(fù)模式切換對檢測結(jié)果造成不利影響，最終也選擇負(fù)離子作為紐甜的特征離子，以377.0/199.8 作為定量離子對，377.0/257.2 作為定性離子對。去簇電壓和碰撞電壓均選用響應(yīng)離子對響應(yīng)值最高時候的數(shù)值。采用多反應(yīng)監(jiān)測模式同時掃描。

2.2 液相條件的選擇

T3 色譜柱和C18色譜柱的實(shí)驗(yàn)效果接近，故選用能更好地耐受高水相的T3 柱。由于采用負(fù)離子掃描模式，避免在流動相中添加乙酸或甲酸，又考慮到堿性條件對色譜柱的損傷，最終選擇在水相中添加乙酸銨來作為改性劑和緩沖劑。實(shí)驗(yàn)過程中先后驗(yàn)證了2 mmol·L-1、5 mmol·L-1、10mmol·L-1乙酸銨對實(shí)驗(yàn)效果的影響，最后發(fā)現(xiàn)乙酸銨濃度為5 mmol·L-1時有較高的響應(yīng)值，故最終選用5 mmol·L-1的乙酸銨作為水相的流動相。有機(jī)相為甲醇或乙腈時對檢測結(jié)果影響不大，乙腈時的出峰時間略早，甲醇時的響應(yīng)值略高，峰型相對較好，最終選擇甲醇為流動相的有機(jī)相。各參數(shù)的特征離子色譜圖如圖1 和圖2 所示。

圖1 甜蜜素特征離子對色譜圖

圖2 紐甜特征離子對色譜圖

2.3 線性關(guān)系和定量限

進(jìn)樣量為5 μL，以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，儀器響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。各目標(biāo)物在1 ～50 ng·mL-1時呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r＞0.999，如表3 所示。以信噪比（S/N）大于10 且回收率、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足條件來確定定量限，得到該方法的定量限為5 μg·kg-1。

表3 甜蜜素和紐甜的線性關(guān)系表

2.4 回收率與精密度

將同一無本底值的陰性葡萄樣品作為基質(zhì)，分別進(jìn)行5 μg·kg-1、10 μg·kg-1、50 μg·kg-1的加標(biāo)后，按照1.3.2 前處理方法平行測定6 次，平均檢測結(jié)果如表4 所示。甜蜜素回收率為87.6%～93.6%，RSD為1.2%～5.8%；紐甜回收率為91.2%～96.8%，RSD為2.0%～5.3%，都能夠滿足檢測的需求。

表4 甜蜜素和紐甜的回收率和精密度情況表

2.5 樣品測定

選取多種類的葡萄樣品如夏黑、紅富士、巨峰、醉金香、陽光玫瑰等按本文方法進(jìn)行檢測，共檢測40 份樣品，均未檢出甜蜜素和紐甜，未發(fā)現(xiàn)傳言中的非法添加情況，但進(jìn)行持續(xù)的監(jiān)測仍然十分必要。

3 結(jié)論

葡萄是一種常見的、較為受歡迎的水果，其安全性也備受廣大消費(fèi)者的關(guān)注。本文采用三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式，負(fù)離子掃描，T3 色譜柱，5 mmol·L-1乙酸銨和甲醇為流動相，梯度洗脫，對葡萄樣品中的甜蜜素和紐甜進(jìn)行定性、定量分析。兩種目標(biāo)物按照本文的方法前處理上機(jī)檢測都有較好的添加回收率和精密度，為檢測新鮮水果或其他固體樣品中的甜味劑提供了參考。