曹珊珊，袁詩宇，史磊磊，張瑞華，張雨涵，石 勇，王 欣，韓朝軍*，劉繼平

（1.陜西中醫(yī)藥大學藥學院，陜西 咸陽 712046； 2.陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712046）

重度抑郁癥又稱為抑郁障礙，現代醫(yī)學認為其主要特征是持續(xù)的情緒或心境低落，常伴食欲不振、身體不適等各種軀體癥狀以及生理功能障礙等，屬于精神類疾病，本病具有患病率高、復發(fā)率高、致殘率高、疾病負擔高的特點［1］。據世界衛(wèi)生組織統計，重度抑郁癥已成為世界第四大疾病，目前其臨床治愈率僅為27%［2］，已成為嚴重的醫(yī)學與社會難題。

滋水清肝飲方源自 《醫(yī)宗己任編·四明心法》［3］，云“疏肝益腎湯，凡胃脘痛，大便秘結者，肝血虛也，此方主之，逍遙散所不能愈者，此方妙。柴胡、白芍、熟地、山藥、萸肉、丹皮、茯苓、澤瀉，加歸身、棗仁、山梔，名滋腎清肝飲”，以其滋腎養(yǎng)陰、清瀉肝火功效用于臨床治療抑郁、失眠等精神類疾病。研究發(fā)現，滋水清肝飲能有效降低抑郁患者漢密爾頓抑郁量表評分，抑制血清孤啡肽水平，進而提高機體內5-羥色胺（5-HT） 表達，改善抑郁癥狀［4］，還能有效改善慢性腎衰竭伴發(fā)抑郁癥患者的抑郁狀況［5］。因此，本研究采用慢性束縛應激 （chronic restraint stress，CRS） 建立小鼠重度抑郁癥模型，進一步研究滋水清肝飲防治抑郁癥的作用和可能的機制。

1 材料

1.1 動物 60 只SPF 級C57BL 雄性小鼠，6 ～8周齡，體質量（20±2） g，購自成都達碩實驗動物有限公司［實驗動物生產許可證號SCXK （川）2020-030］，飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)藥大學中藥藥理實驗動物房，墊料和飼料均購自成都達碩實驗動物有限公司。動物實驗經陜西中醫(yī)藥大學動物倫理委員會批準（倫理號SUCMDL20210310006）。

1.2 藥物 滋水清肝飲組方藥材（熟地黃10 g、山茱萸10 g、山藥10 g、當歸10 g、白芍10 g、牡丹皮10 g、茯苓10 g、澤瀉10 g、梔子10 g、酸棗仁10 g、柴胡6 g） 均購自陜西中醫(yī)藥大學校醫(yī)院，經陜西中醫(yī)藥大學藥學院中藥鑒定教研室顏永剛教授鑒定為正品，符合2020 年版《中國藥典》 一部相關規(guī)定，飲片加10 倍量水浸泡40 min，武火煮沸后轉文火慢煎1 h，趁熱過濾，濾渣加8 倍量水，武火煮沸，文火慢煎40 min，合并濾液，常壓80 ℃濃縮，即得高劑量滋水清肝飲（1.7 g/mL），稀釋2 倍為中劑量，稀釋4 倍為低劑量。滋水清肝飲總方106 g，按人與小鼠體表面積換算，等效劑量為17.670 g/kg，即中劑量，同時設定低、高劑量分別為8.835、35.340 g/kg。鹽酸氟西汀（批號33323） 購自美國MedChemExpress 公司，每1 mg溶于2 mL 純水中，給藥劑量為10 mg/kg，現用現配。

1.3 試劑與儀器 小鼠5-HT 試劑盒 （批號20221020，上海酶聯生物科技有限公司）； 小鼠腫瘤壞死因子-α （TNF-α）、白介素-1β （IL-1β） 試劑盒（批號202209、202209，江蘇酶免實業(yè)有限公司）； 丙二醛 （MDA）、總超氧化物歧化酶（SOD） 試劑盒（批號20220831、20221213，南京建成生物工程研究所有限公司）； ERK1/2、p-ERK、GSK-3β、p-GSK3β、GAPDH 抗體（批號00115457、00106696、00117935、00106696、10017731，美國Proteintech 公司）； CREB 抗體（批號4000000113，武漢愛博泰克生物科技有限公司）； 羊抗小鼠二抗、羊抗兔二抗、BDNF 抗體、超敏ECL 化學發(fā)光液（批號BA1050、BA1051、GB11559、AR1197，武漢博士德生物工程有限公司）； RNAiso Plus、Oligo dT （50 μmol/L）、5 × M-MLV Buffer、dNTP （10 mmol/L）、RTase M-MLV （200 U/mL）、RTase inhibitor （40 U/mL）、TB Green Premix Ex Taq、50× ROX Reference Dye Ⅱ （ 批號 AL11814A、AL11594A、2641Q、AKE1955A、AK71336A、AKF1047A、AK90852A、SDO384，日本TaKaRa 公司）。酶標儀、多功能酶標儀 （美國BioTek 公司）； 電泳儀（美國Bio-Rad 公司）； PCR 儀（杭州博日科技股份有限公司）； 熒光定量PCR 儀（美國Thermo Fisher Scientific 公司）。

2 方法

2.1 分組、造模及給藥 小鼠適應性喂養(yǎng)7 d，空白組不作處理，造模組采用自制打孔離心管進行21 d 慢性束縛應激處理，即每天將小鼠禁錮于安靜昏暗的環(huán)境6 h［6-7］。造模結束后，進行糖水偏好實驗，以糖水偏好率小于75% 為造模成功標準［8］。將造模成功的小鼠隨機分為模型組、鹽酸氟西汀組（10 mg/kg） 和滋水清肝飲低、中、高劑量組（8.835、17.670、35.340 g/kg），每組10只，模型組和空白組灌胃生理鹽水，各給藥組灌胃相應劑量藥液，容積0.4 mL/20 g，給藥結束30 min 后除空白組外，其余小鼠繼續(xù)進行CRS 處理。

2.2 行為學實驗

2.2.1 糖水偏好實驗 小鼠暴露于2 個完全相同的水瓶中，分別裝有1%蔗糖水和飲用水，以排除小鼠對個別水瓶的偏好。第1 天適應24 h 后互換1%糖水、飲用水的水瓶位置，以避免小鼠在飲水期間形成特殊的位置偏好； 第2 天繼續(xù)適應24 h；第3 天所有小鼠禁水禁食24 h，結束后進行2 h 的糖水偏好檢測，檢測前對1%糖水和自來水瓶分別稱重，2 h 后取下2 瓶再次稱重，計算糖水偏好率，公式為糖水偏好率＝ ［糖水飲用量/（自來水飲用量＋糖水飲用量）］ ×100%。

2.2.2 懸尾實驗 將小鼠倒掛在頭部距離地面20 cm 高的裝置上，記錄6 min 內懸尾不動狀態(tài)，當其表現為被動懸掛、沒有任何肢體活動時可判定為不動，秒表計算后4 min 內累積不動時間。

2.2.3 強迫游泳實驗 將小鼠放入高24.5 cm、直徑16 cm 的高硼硅玻璃容器中，盛有20 cm 深的水，水溫保持在（23±2）℃，視頻記錄6 min 內游泳狀態(tài)，當其沒有明顯的游泳動作時被認為漂浮不動，秒表計算后4 min 內累積不動時間。

2.3 HE 染色觀察海馬組織病理形態(tài)變化 取固定24 h 以上的全腦組織，石蠟切片4 μm，脫水，脫蠟，蘇木素染色3～5 min，自來水洗，返藍，脫水，伊紅染色5 min，脫水，透明，中性樹膠封片，于顯微鏡下觀察小鼠海馬CA1 區(qū)細胞形態(tài)和數量變化。

2.4 血清生化指標檢測 采用試劑盒檢測小鼠血清SOD 活性和MDA 水平，ELISA 試劑盒檢測血清5-HT、TNF-α、IL-1β 水平。

2.5 RT-qPCR 法檢測海馬組織BDNF、TNF-α、IL-1βmRNA 表達 采用氯仿提取法提取各組總RNA，核酸定量法檢測濃度后逆轉錄為cDNA，隨后進行PCR 擴增反應。反應體系（20 μL） 為TB Green Premix Ex Taq 10 μL、正反向引物 （10 μmol/L） 各0.4 μL、50×ROX Reference Dye Ⅱ0.4 μL、DNA 模板2 μL、RNase free H2O 6.8 μL，反應程序為95 ℃預變性30 s； 95 ℃5 s，60 ℃30 s，95 ℃5 s，60 ℃1 min，共40 個循環(huán)，定量PCR 特異產物通過熔解曲線分析，引物序列見表1。以GAPDH為內參，2-ΔΔCT法計算目的基因mRNA 相對表達。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

2.6 Western blot 法檢測海馬組織ERK1/2、GSK-3β、CREB、BDNF 蛋白表達 取小鼠一側海馬組織，加入RIPA 裂解液、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，在低溫冷凍研磨儀中充分研磨，4 ℃離心取上清液，BCA 法蛋白定量后取等量蛋白上樣，通過SDS-PAGE 凝膠電泳分離，并轉移至0.22 μm PVDF 膜上，TBST 清洗后在5% 脫脂牛奶中封閉2 h，分別加入一抗ERK1/2 （1 ∶1 000）、p-ERK1/2 （1 ∶3 000）、GSK3β （1 ∶4 000）、p-GSK3β（1 ∶3 000）、CREB （1 ∶ 1 000）、BDNF （1 ∶5 000）、GAPDH （1 ∶25 000），4 ℃孵育過夜，TBST 洗膜3 次，加入二抗室溫孵育1 h，TBST 洗膜3 次，ECL 化學發(fā)光顯影，利用Image J 軟件計算目的蛋白相對表達量。

2.7 統計學分析 通過SPSS 26.0 軟件進行處理，若符合正態(tài)分布，計量資料以（±s） 表示，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊時組間比較采用LSD 法，方差不齊時組間比較采用Games-Howell 法； 若不符合正態(tài)分布，多組間比較采用非參數檢驗。P＜0.05 表示差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠行為學的影響

3.1.1 糖水偏好率 與空白組比較，給藥前模型組及各給藥組糖水偏好率降低（P＜0.01）。給藥7 d后，與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲中劑量組糖水偏好率升高（P＜0.05），滋水清肝飲低、高劑量組糖水偏好率無明顯變化 （P＞0.05）。給藥14 d 后，與模型組比較，各給藥組糖水偏好率升高（P＜0.05，P＜0.01），見表2。

表2 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠糖水偏好率的影響（±s，n＝8）Tab.2 Effects of Zishui Qinggan Decoction on preference rate of sugar water in CRS depressed mice （±s，n＝8）

表2 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠糖水偏好率的影響（±s，n＝8）Tab.2 Effects of Zishui Qinggan Decoction on preference rate of sugar water in CRS depressed mice （±s，n＝8）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別糖水偏好率/%給藥前給藥7 d 后給藥14 d 后空白組88.27±2.7190.08±4.5689.78±6.14模型組54.03±13.87＃＃51.06±17.77＃＃46.77±14.94＃＃鹽酸氟西汀組52.34±15.20＃＃71.87±8.85*83.22±12.16**滋水清肝飲低劑量組52.27±6.07＃＃66.22±16.8781.50±7.88**滋水清肝飲中劑量組50.06±12.82＃＃74.69±13.83*85.52±5.44**滋水清肝飲高劑量組54.11±10.90＃＃68.55±17.8779.34±7.55*

3.1.2 懸尾實驗不動時間 與空白組比較，模型組小鼠懸尾實驗不動時間延長（P＜0.01）； 給藥7、14 d 后，與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲各劑量組小鼠懸尾實驗不動時間縮短（P＜0.05，P＜0.01），見表3。

表3 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠懸尾實驗不動時間的影響（±s，n＝8）Tab.3 Effects of Zishui Qinggan Decoction on immobilization time of tail suspension experiment in CRS depressed mice （±s，n＝8）

表3 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠懸尾實驗不動時間的影響（±s，n＝8）Tab.3 Effects of Zishui Qinggan Decoction on immobilization time of tail suspension experiment in CRS depressed mice （±s，n＝8）

注： 與空白組比較，＃＃P ＜0.01； 與模型組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01。

組別不動時間/s給藥7 d 后給藥14 d 后空白組81.98±27.9179.55±30.94模型組142.23±19.03＃＃146.60±13.94＃＃鹽酸氟西汀組96.45±38.95*83.07±21.76**滋水清肝飲低劑量組97.85±24.61*99.71±21.11**滋水清肝飲中劑量組85.55±19.81**83.10±13.81**滋水清肝飲高劑量組92.75±20.95*106.54±35.95*

3.1.3 強迫游泳實驗不動時間 與空白組比較，模型組小鼠強迫游泳實驗不動時間延長 （P＜0.01）； 給藥7、14 d后，與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲各劑量組小鼠強迫游泳實驗不動時間縮短（P＜0.05，P＜0.01），見表4。

表4 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠強迫游泳實驗不動時間的影響（±s，n＝8）Tab.4 Effects of Zishui Qinggan Decoction on immobilization time of forced swimming experiment in CRS depressed mice （±s，n＝8）

表4 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠強迫游泳實驗不動時間的影響（±s，n＝8）Tab.4 Effects of Zishui Qinggan Decoction on immobilization time of forced swimming experiment in CRS depressed mice （±s，n＝8）

注： 與空白組比較，＃＃P ＜0.01； 與模型組比較，*P ＜0.05，**P＜0.01。

組別不動時間/s給藥7 d給藥14 d空白組90.80±16.3786.54±18.54模型組150.55±16.74＃＃155.43±13.51＃＃鹽酸氟西汀組83.72±17.60**87.97±14.99**滋水清肝飲低劑量組105.29±12.06*121.81±15.83*滋水清肝飲中劑量組93.08±25.66**96.67±20.84**滋水清肝飲高劑量組111.30±16.15*128.33±19.04*

3.2 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬神經細胞損傷的影響 空白組小鼠海馬神經細胞形態(tài)飽滿，輪廓清晰； 模型組細胞變形，顏色被深染，輪廓模糊，結構形態(tài)較差； 與模型組比較，滋水清肝飲中劑量組及鹽酸氟西汀組病理形態(tài)明顯改善，神經細胞形態(tài)基本正常，核固縮現象較少； 滋水清肝飲低、高劑量組有部分神經細胞結構形態(tài)發(fā)生改變，見圖1。

圖1 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬神經細胞損傷的影響（HE，×400）Fig.1 Effects of Zishui Qinggan Decoction on hippocampal neuron injury in CRS depressed mice （HE，×400）

3.3 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠血清生化指標的影響 與空白組比較，模型組小鼠血清5-HT 水平和SOD 活性降低 （P＜0.01），TNF-α、IL-1β、MDA 水平升高（P＜0.01）； 與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲中劑量組小鼠血清5-HT 水平和SOD 活性升高（P＜0.05，P＜0.01），TNF-α、IL-1β、MDA 水平降低（P＜0.05，P＜0.01），滋水清肝飲低劑量組5-HT、MDA 水平無明顯變化（P＞0.05），TNF-α、IL-1β 水平降低（P＜0.05），SOD活性升高（P＜0.01），滋水清肝飲高劑量組5-HT水平無明顯變化（P＞0.05），TNF-α、IL-1β、MDA水平降低（P＜0.05），SOD 活性升高（P＜0.05），見表5。

表5 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠血清5-HT、TNF-α、IL-1β、MDA 水平和SOD 活性的影響（±s，n＝8）Tab.5 Effects of Zishui Qinggan Decoction on serum levels of 5-HT，TNF-α，IL-1β，MDA and SOD activity in CRS depressed mice （±s，n＝8）

表5 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠血清5-HT、TNF-α、IL-1β、MDA 水平和SOD 活性的影響（±s，n＝8）Tab.5 Effects of Zishui Qinggan Decoction on serum levels of 5-HT，TNF-α，IL-1β，MDA and SOD activity in CRS depressed mice （±s，n＝8）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別5-HT/（ng·mL-1）TNF-α/（pg·mL-1）IL-1β/（pg·mL-1）SOD/（U·mL-1）MDA/（nmol·mL-1）空白組190.35±7.79628.51±15.11108.57±3.31119.66±3.055.30±0.53模型組173.70±5.50＃＃739.02±27.05＃＃133.43±10.83＃＃85.10±14.06＃＃7.43±0.92＃＃鹽酸氟西汀組188.00±9.27**667.61±22.53**113.47±3.75*116.96±13.58**5.45±0.94**滋水清肝飲低劑量組179.47±11.39673.06±21.68*117.25±6.88*101.52±9.77**7.36±1.13滋水清肝飲中劑量組184.76±3.60*665.75±27.38*110.16±3.61*110.53±7.48**5.46±0.35**滋水清肝飲高劑量組177.97±10.30678.91±33.67*113.16±5.31*91.91±12.16*6.28±0.94*

3.4 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織BDNF、TNF-α、IL-1βmRNA 表達的影響 與空白組比較，模型組小鼠海馬組織BDNFmRNA 表達降低（P＜0.01），TNF-α、IL-1βmRNA 表達升高（P＜0.01）；與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲中、高劑量組小鼠海馬組織BDNFmRNA 表達升高（P＜0.01），TNF-α、IL-1βmRNA 表達降低（P＜0.05，P＜0.01），滋水清肝飲低劑量組小鼠海馬組織BDNFmRNA 表達無明顯變化（P＞0.05），TNF-α、IL-1βmRNA 表達降低（P＜0.05），見表6。

表6 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織BDNF、TNF-α、IL-1β mRNA 表達的影響（±s，n＝5）Tab.6 Effects of Zishui Qinggan Decoction on hippocampal mRNA expressions of BDNF，TNF-α and IL-1β of CRS depressed mice （±s，n＝5）

表6 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織BDNF、TNF-α、IL-1β mRNA 表達的影響（±s，n＝5）Tab.6 Effects of Zishui Qinggan Decoction on hippocampal mRNA expressions of BDNF，TNF-α and IL-1β of CRS depressed mice （±s，n＝5）

注： 與空白組比較，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別BDNF mRNATNF-α mRNAIL-1β mRNA空白組1.00±0.081.00±0.111.00±0.06模型組0.64±0.12＃＃3.00±0.80＃＃3.01±0.13＃＃鹽酸氟西汀組1.01±0.36**1.47±0.46**1.71±0.75**滋水清肝飲低劑量組0.64±0.072.01±0.49*2.15±0.91*滋水清肝飲中劑量組1.38±0.37**1.74±0.60**1.95±0.31**滋水清肝飲高劑量組1.09±0.26**2.14±0.43*2.33±0.98*

3.5 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織ERK1/2、GSK3β、CREB、BDNF 蛋白表達的影響 與空白組比較，模型組小鼠海馬組織p-ERK1/2、p-GSK3β、CREB、BDNF 蛋白表達降低（P＜0.05，P＜0.01）； 與模型組比較，鹽酸氟西汀組及滋水清肝飲各劑量組小鼠海馬組織p-ERK1/2、p-GSK3β、CREB、BDNF 表達升高（P＜0.05，P＜0.01），見圖2、表7。

圖2 各組小鼠海馬組織ERK1/2、GSK3β、CREB、BDNF 蛋白電泳圖Fig.2 Electropherograms of ERK1/2，GSK3β，CREB and BDNF proteins in hippocampus of mice in each group

表7 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織ERK1/2、GSK3β、CREB、BDNF 蛋白表達的影響（±s，n＝3）Tab.7 Effects of Zishui Qinggan Decoction on hippocampal protein expressions of ERK1/2，GSK3β，CREB and BDNF of CRS depressed mice （±s，n＝3）

表7 滋水清肝飲對CRS 抑郁小鼠海馬組織ERK1/2、GSK3β、CREB、BDNF 蛋白表達的影響（±s，n＝3）Tab.7 Effects of Zishui Qinggan Decoction on hippocampal protein expressions of ERK1/2，GSK3β，CREB and BDNF of CRS depressed mice （±s，n＝3）

注： 與空白組比較，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01； 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別p-ERK1/2/ERK1/2p-GSK3β/GSK3βCREB/GAPDHBDNF/GAPDH空白組0.64±0.040.89±0.070.68±0.020.26±0.02模型組0.23±0.04＃＃0.53±0.12＃＃0.32±0.03＃＃0.16±0.01＃鹽酸氟西汀組0.82±0.09**0.68±0.10*0.63±0.01**0.50±0.02**滋水清肝飲低劑量組0.75±0.05**0.77±0.02*0.92±0.07**0.33±0.30**滋水清肝飲中劑量組0.96±0.06**0.89±0.05**0.95±0.02**0.51±0.01**滋水清肝飲高劑量組0.82±0.11**0.72±0.05*0.78±0.03**0.41±0.05**

4 討論

眾所周知，壓力是重度抑郁癥發(fā)展的致病因素之一［9］。CRS 是抑郁動物研究中常見的慢性應激模型，是一種同時誘導心理和生理壓力的經典方法。本研究采用糖水偏好實驗判斷小鼠是否存在快感缺失的狀況，并根據小鼠快感缺失的情況進行剔除和分組，在一定程度上保證后續(xù)驗證滋水清肝飲抗抑郁效果的準確性。懸尾實驗及強迫游泳實驗的不動時間主要用來評估抑郁中的絕望行為，不動時間越長表示小鼠對生存的意愿越低、絕望性越高。研究表明，海馬CA1 容易受到壓力的影響，導致神經元的樹突分枝和脊椎密度的減少進而影響其海馬體積及細胞形態(tài)［10］，本研究結果顯示，中劑量滋水清肝飲及鹽酸氟西汀可對CRS 抑郁小鼠神經細胞的損傷起到一定的防治作用。當給予滋水清肝飲后抑郁小鼠對糖水的偏好性增強，不動時間縮短，小鼠血清5-HT 水平和SOD 活性升高，MDA及炎癥因子TNF-α、IL-1β 水平降低，提示滋水清肝飲具有一定的抗抑郁作用［11］。

BDNF 作為與神經可塑性、記憶力和情感表達相關的重要因子，是抑郁障礙發(fā)病機制的關鍵因素之一，且BDNF 水平隨著抑郁嚴重程度的增加而降低［12］。在抑郁自殺患者的大腦中發(fā)現BDNF 蛋白表達降低［13］，給予抑郁癥病人抗抑郁藥物治療后能夠使血液中BDNF 水平回到正常范圍［14］； 嚙齒動物暴露于慢性應激，早年生活應激或不可預測應激都會使海馬體中BDNF 表達降低［15-16］，這些研究都表明BDNF 水平升高可支持抗抑郁藥賦予其有益功能的機制［17］。CREB 作為BDNF 的正向靶點，已被證明是BDNF 介導細胞存活的關鍵介質，兩者的表達有一定的相關性［18］。CREB 可以被各種激酶激活，包括ERK、GSK3β 等。GSK3β 是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，廣泛存在于中樞神經系統，主要分布在神經元，GSK3β 活性增加支持細胞凋亡，活性減弱增強神經可塑性和細胞彈性［19］，神經元調節(jié)GSK3β 活性的主要方式是通過控制Ser9 的磷酸化，GSK3β 在Ser9 殘基處的磷酸化可以抑制GSK3β 響應正向信號的活性［20］。研究表明GSK3β活性的調節(jié)與許多情緒穩(wěn)定劑和抗抑郁藥的直接或下游作用機制有關［21］，主要通過CREB 為中介，調節(jié)BDNF 的轉錄從而達到抗抑郁樣作用的效果。ERK 為絲裂原活化蛋白激酶的原型亞家族，在幾種ERK 亞型（ERK1/2/3/4/5/7） 中，ERK1/2 在中樞神經系統中的研究和表征最為顯著［22］。現有數據顯示，ERK1/2 在包括抑郁癥在內的各種神經精神疾病中起著關鍵作用［23］，不僅可以激活CREB 參與神經元存活和神經保護，還可以促進BDNF 對神經元細胞發(fā)揮抗損傷和促生長的作用，從而影響抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展［24］。本研究結果顯示，當給予抑郁小鼠滋水清肝飲及鹽酸氟西汀后，小鼠海馬組織 BDNF、CREB、p-ERK1/2、p-GSK3β 蛋白表達升高，海馬組織BDNFmRNA 表達升高，表明滋水清肝飲可以通過ERK1/2/GSK3β/CREB/BDNF 通路參與抑郁癥發(fā)病進展。

綜上所述，滋水清肝飲可以通過上調抑郁小鼠糖水偏好率，降低抑郁小鼠對生存的絕望性，提高5-HT 水平，降低炎癥因子水平，調控ERK1/2/GSK3β/CREB/BDNF 通路發(fā)揮抗抑郁作用，有望成為治療抑郁癥的潛在新策略。