韓明磊 劉振 侯永蘭 崔佳佳 金衛(wèi)東

(新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第四臨床學(xué)院心血管內(nèi)科,河南 新鄉(xiāng) 453000)

缺血性心臟病是世界范圍內(nèi)致死率最高的疾病之一,也是心力衰竭最為常見的病因〔1,2〕。盡管隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療技術(shù)的進(jìn)步,越來(lái)越多的心肌梗死患者可以及時(shí)接受血運(yùn)重建治療〔3〕。但值得注意的是,心肌梗死所引起的心肌細(xì)胞急性壞死及其伴隨的修復(fù)性纖維化瘢痕的形成可導(dǎo)致心臟重塑與心肌纖維化,而后兩者是心力衰竭的重要誘因〔4〕。因此,積極探究改善心臟重塑和心肌纖維化的新型治療策略對(duì)于患者的長(zhǎng)期生活質(zhì)量具有重要意義。

石蒜堿(LYC)是一種植物生物堿,主要存在于幾種石蒜屬植物中。既往的研究表明,LYC具有抗炎、抗腫瘤和抗病毒等作用〔5,6〕。但近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道,LYC還能改善組織或器官纖維化,如在博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),LYC可通過(guò)靶向抑制含NLR家族Pyrin域蛋白(NLRP)3炎性小體的激活,改善肺纖維化的進(jìn)展〔7〕。在一項(xiàng)基于天然化合物文庫(kù)進(jìn)行高通量篩選新型抗心臟纖維化的研究中發(fā)現(xiàn),LYC可改善兩種高血壓依賴的心肌纖維化嚙齒動(dòng)物模型的心臟舒張功能,提示其可作為治療心肌纖維化和舒張功能障礙的候選藥物〔8〕,但其具體作用機(jī)制尚不明確。在腫瘤領(lǐng)域的研究中證實(shí),LYC不僅可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖還能通過(guò)下調(diào)腫瘤組織中腫瘤壞死因子(TNF)-α與誘導(dǎo)型一氧化氮合酶等炎癥因子的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗炎作用〔9〕。此外,左旋LYC已被用作治療肺部和支氣管急性炎癥性疾病的臨床用藥〔10〕。提示LYC具有顯著的抗炎作用。

NLRP3炎癥小體是由胞內(nèi)模式識(shí)別感受器NLRP3、接頭蛋白凋亡相關(guān)的斑點(diǎn)樣蛋白(ASC)和效應(yīng)型酶原蛋白酶含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(pro-caspase-1)3部分組成的的蛋白復(fù)合體〔2,11〕。有數(shù)據(jù)表明,NLRP3炎癥小體在識(shí)別外源性危險(xiǎn)信號(hào)和心肌梗死的無(wú)菌炎癥反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用〔11,12〕。如上述研究所報(bào)道,LYC具有顯著的抗炎作用,且在肺纖維化中LYC可通過(guò)抑制NLRP3炎癥小體的激活發(fā)揮改善作用〔7〕,但在心肌梗死所致的心肌重塑與心肌纖維化中,LYC是否同樣能夠通過(guò)抑制NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)尚不清楚。本研究通過(guò)分離原代心肌細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞探討LYC對(duì)心肌損傷與心肌纖維化的活化與膠原分成的影響及其生物學(xué)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料 1～3日齡的SPF級(jí)的雄性SD新生乳鼠購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;胎牛血清(FBS),青霉素與鏈霉素混合液(均為100 U/ml,美國(guó)Hyclone公司);5-溴脫氧核苷、NLRP3特異性抑制劑MCC940、LYC、血管緊張素(Ang)Ⅱ(美國(guó)Sigam公司);TUNEL染色試劑盒(瑞士羅氏公司);兔抗大鼠NLRP3、白細(xì)胞介素(IL)-1β、Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(SMA,美國(guó)Cell Signaling Technology公司);兔抗ASC、caspase-1(武漢愛博泰克生物科技有限公司);兔抗大鼠IL-18、消皮素(GSDM)D、Col Ⅲ(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司);兔抗大鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β、β-actin(美國(guó)Santa CruZ公司);大鼠IL-1β、IL-18、TNF-α和乳酸脫氫酶(LDH)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司);異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的山羊抗兔二抗(美國(guó)Invitrogen公司);EDU細(xì)胞增殖活力檢測(cè)試劑盒(廣州銳博生物科技有限公司);Transwell小室(8 μm,美國(guó)Millipore公司)。

1.2原代心肌細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 參考文獻(xiàn)方法〔13〕進(jìn)行分離原代心肌細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞：①原代心肌細(xì)胞的分離：處死新生SD乳鼠,快速取出心臟,在預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)中擠出多余血液,無(wú)菌眼科剪將心尖部心室組織剪碎成1 mm×1 mm×1 mm大小后,應(yīng)用含0.08%的中性蛋白酶與Ⅱ型膠原酶進(jìn)行消化后,置于含10%胎牛血清(FBS)與1%青鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基中于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),2 h后更換培養(yǎng)液并去除貼壁的成纖維細(xì)胞,收集未貼壁細(xì)胞,按3×105/ml接種至6孔板中,并加入含0.1 mmol/L 5-溴脫氧核苷的上述完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,按需更換培養(yǎng)液,約72 h可觀察到細(xì)胞成片跳動(dòng)即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。②原代心肌成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)：按上述方法取SD大鼠乳鼠心室肌細(xì)胞,使用含0.2%Ⅱ型膠原酶在37 ℃水浴鍋中震蕩消化10 min,1 000 r/min離心5 min,收集上層細(xì)胞懸液后,繼續(xù)此方法分離底層組織沉淀,重復(fù)5～6次。將收集的細(xì)胞懸液,1 500 r/min離心5 min,用含10% FBS,1%青鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,置于37 ℃,5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。1 h后更換細(xì)胞培養(yǎng)并去除未貼壁細(xì)胞。細(xì)胞生長(zhǎng)融合至70%～80%時(shí)進(jìn)行常規(guī)消化傳代,取3代以后的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.3細(xì)胞處理與分組 ①心肌細(xì)胞處理與分組：取上述分離的原代心肌細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)前用含1%FBS的完全培養(yǎng)饑餓細(xì)胞12 h后,參考文獻(xiàn)方法〔14〕將其置于含95%N2與5%CO2的低氧培養(yǎng)箱中進(jìn)行建立心肌細(xì)胞缺氧模型。按處理方式的不同將心肌細(xì)胞分為4組：對(duì)照(Ctl)組：使用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行正常培養(yǎng)的心肌細(xì)胞;缺氧(Hyp)組：低氧環(huán)境下使用含0%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的心肌細(xì)胞;缺氧與LYC聯(lián)合處理(Hyp+LYC)組：低氧環(huán)境下使用含5 μmol/L的石蒜堿〔15〕,0%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的心肌細(xì)胞;缺氧與NLRP3抑制劑MCC950聯(lián)合處理(Hyp+MCC950)組：缺氧條件下使用含10 μmol/L的MCC950〔16〕,0%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的心肌細(xì)胞。②心肌成纖維細(xì)胞的處理與分組：取傳至3代以后的原代心肌成纖維細(xì)胞,按處理方式的不同將細(xì)胞同樣分為4組：對(duì)照(Control)組：使用含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行正常培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞;Ang Ⅱ處理(Ang Ⅱ)組：參考文獻(xiàn)方法〔17〕使用含1 nmol/L的Ang Ⅱ與10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞;聯(lián)合使用Ang Ⅱ與LYC處理(Ang Ⅱ+LYC)組：使用含1 nmol/L的Ang Ⅱ、5 μmol/L與10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞;聯(lián)合使用Ang Ⅱ與MCC950處理(Ang Ⅱ+MCC950)組：使用含1 nmol/L的Ang Ⅱ、10 μmol/L的MCC950與10%FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞。上述各組心肌細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞處理24 h后用于后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

1.4TUNEL染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡 取各組心肌細(xì)胞,PBS溶液輕輕洗滌細(xì)胞后,4%多聚甲醛固定10 min,室溫下晾干后,PBS溶液進(jìn)行水合,隨后按TUNEL試劑盒說(shuō)明書方法加入50 μl的試劑進(jìn)行反應(yīng),37 ℃下避光孵育30 min后,加入30 μl的4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)試劑進(jìn)行染核10 min,再次避光孵育5 min,熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察,并隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍照,計(jì)算分析TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比率。TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞為紅色熒光,細(xì)胞核為藍(lán)色熒光。實(shí)驗(yàn)單獨(dú)重復(fù)3次。

1.55-乙炔基-2′-脫氧尿嘧啶核苷(EDU)染色檢測(cè)細(xì)胞增殖 取各組心肌成纖維細(xì)胞,加入100 μl含50 μmol/L EDU試劑進(jìn)行孵育2 h后,使用4%多聚甲醛進(jìn)行固定30 min,在加入2 mg/ml甘氨酸5 min,PBS洗滌后,吸棄染色液,0.5%TritonX-100透化細(xì)胞10 min后,再次用PBS洗滌,添加DAPI試劑進(jìn)行染核。PBS溶液充分洗滌后,用熒光顯微鏡隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行拍照觀察EDU陽(yáng)性細(xì)胞。EDU陽(yáng)性細(xì)胞為紅色熒光,細(xì)胞核DAPI為藍(lán)色熒光。實(shí)驗(yàn)單獨(dú)重復(fù)3次。

1.6Transwell檢測(cè)細(xì)胞遷移 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的心肌成纖維細(xì)胞,將其按5×105個(gè)/孔接種至Transwell上室中,并將其浸沒(méi)于按方法1.3進(jìn)行處理的下室溶液中,37 ℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)24 h后,取出小室,棉簽擦拭上室底部未穿出的細(xì)胞,4%的多聚甲醛室溫下固定15 min,0.1%的結(jié)晶紫染色,最后使用倒置顯微鏡進(jìn)行觀察拍照。實(shí)驗(yàn)單獨(dú)重復(fù)3次。

1.7免疫熒光(IHC)染色觀察α-SMA蛋白表達(dá) 取各組心肌成纖維細(xì)胞,使用4%的多聚甲醛固定24 h后,0.2%的Trixon X-100進(jìn)行透化10 min,5%的牛血清白蛋白室溫下進(jìn)行抗體封閉1 h,加入稀釋后兔抗α-SMA抗體(1∶200),4 ℃孵育過(guò)夜,充分洗滌玻片后,加入FITC標(biāo)記的山羊抗兔IgG(1∶500)于室溫下孵育1 h,30 μl的DAPI染核10 min后,使用熒光顯微鏡隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行觀察拍照。上述實(shí)驗(yàn)均單獨(dú)重復(fù)3次。

1.8Western印跡 使用含蛋白酶抑制劑的細(xì)胞裂解液提取各組心肌細(xì)胞與心肌成纖維細(xì)胞中總蛋白,BCA法檢測(cè)蛋白濃度。取約35 μg的蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進(jìn)行蛋白質(zhì)分離。電泳結(jié)束后,采用濕轉(zhuǎn)法將分離的蛋白轉(zhuǎn)至聚偏氟乙烯(PVDF)膜上,5%的脫脂牛奶于室溫下封閉2 h后,分別加入NLRP3(1∶800),ASC(1∶500)與caspase-1(1∶300)、IL-1β(1∶1 000)和IL-18(1∶500)及GSDMD(1∶300)、Col Ⅰ(1∶1 000)、Col Ⅲ(1∶800)、α-SMA(1∶1 000)和TGF-β(1∶500)、β-actin(1∶1 500)一抗,4 ℃搖床孵育過(guò)夜。 TBST溶液清洗3次,5 min/次,以辣根酶標(biāo)記的二抗(1∶5 000)室溫孵育1 h,以TBST溶液清膜。最后均勻滴加高靈敏電化學(xué)發(fā)光液于ChemiDoc MP凝膠成像儀進(jìn)行曝光拍照。ImageJ軟件測(cè)定條帶灰度值,以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參β-actin的比值作為其相對(duì)含量。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Graph Prism5.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1缺氧對(duì)心肌細(xì)胞中NLRP3表達(dá)的影響 與Ctl組(0.13±0.02)相比,缺氧處理1、2、4、8 h后心肌細(xì)胞中NLRP3蛋白表達(dá)(0.44±0.07、0.61±0.19、1.23±0.15、0.54±0.18)均顯著增加(P<0.05,P<0.01),其中以處理4 h時(shí)細(xì)胞中NLRP3的增加趨勢(shì)最為顯著(P<0.01),見圖1。因此,后續(xù)選擇缺氧處理心肌細(xì)胞4 h進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

圖1 各組NLRP3蛋白表達(dá)

2.2LYC改善缺氧條件下心肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)與損傷 與Ctl組相比,Hyp組中IL-1β、IL-18與TNF-α濃度均顯著增加,心肌細(xì)胞TUNEL染色陽(yáng)性率與LDH濃度顯著升高(P<0.05,P<0.01);與Hyp組相比,Hyp+LYC組與Hyp+MCC950組上述炎癥因子濃度及TUNEL染色陽(yáng)性率、LDH濃度顯著降低(P<0.05);Hyp+LYC組與Hyp+MCC950組上述指標(biāo)均無(wú)明顯差異(均P>0.05),見圖2、表1。

表1 各組心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α與LDH濃度及TUNEL陽(yáng)性率比較

圖2 LYC對(duì)缺氧條件下各組心肌細(xì)胞凋亡的影響(TUNEL染色,×200)

2.3LYC對(duì)缺氧條件下心肌細(xì)胞中NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白表達(dá)的影響 與Ctl組相比,Hyp組心肌細(xì)胞中NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白NLRP3、ASC與活性caspase-1(cleaved caspase-1/procaspase-1)、IL-1β(cleaved IL-1β/pro-IL-1β)和IL-18(cleaved IL-18/pro-IL-18)及GSDMD(cleaved GSDMD/pro-GSDMD)均顯著增加(P<0.05,P<0.01);與Hyp組相比,Hyp+LYC組與Hyp+MCC950組上述指標(biāo)明顯降低(P<0.05);Hyp+LYC組與Hyp+MCC950組上述指標(biāo)無(wú)明顯差異(P>0.05),見表2、圖3。

表2 各組心肌細(xì)胞中NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白表達(dá)

1～4：Ctl組、Hyp組、Hyp+LYC組、Hyp+MCC950組圖3 Western印跡檢測(cè)各組NLRP3炎癥小體相關(guān)蛋白表達(dá)

2.4LYC對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響 與Ctl組相比,Ang Ⅱ組細(xì)胞的EDU陽(yáng)性率均顯著增加(P<0.01);較Ang Ⅱ組相比,Ang Ⅱ+LYC組與Ang Ⅱ+MCC950組細(xì)胞的EDU陽(yáng)性率卻明顯降低(P<0.05);AngⅡ+LYC組與AngⅡ+MCC950組上述指標(biāo)無(wú)明顯差異(P>0.05),見表3、圖4。

表3 各組心肌成纖維細(xì)胞EDU陽(yáng)性率、遷移能力及細(xì)胞中纖維化標(biāo)志分子蛋白表達(dá)比較

圖4 各組心肌成纖維細(xì)胞增殖活力(×200)

2.5IHC檢測(cè)各組心肌成纖維細(xì)胞中α-SMA蛋白的表達(dá) 與Control組相比,Ang Ⅱ組細(xì)胞中α-SMA蛋白表達(dá)均明顯增加;與Ang Ⅱ組相比,Ang Ⅱ+LYC組與Ang Ⅱ+MCC950組中α-SMA蛋白表達(dá)明顯降低;后兩組細(xì)胞中無(wú)α-SMA表達(dá)差異,見圖5。

圖5 各組心肌成纖維細(xì)胞中α-SMA蛋白表達(dá)(×400)

2.6LYC對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞遷移的影響 與Control組相比,Ang Ⅱ組細(xì)胞的遷移能力顯著增加(P<0.01);與Ang Ⅱ組相比,Ang Ⅱ+LYC組與Ang Ⅱ+MCC950組遷移能力明顯降低(P<0.05);AngⅡ+LYC組與AngⅡ+MCC950組細(xì)胞遷移能力無(wú)明顯差異(P>0.05),見表3、圖6。

圖6 各組心肌成纖維細(xì)胞遷移能力(結(jié)晶紫染色,×400)

2.7Western印跡檢測(cè)各組成纖維細(xì)胞中纖維化標(biāo)志分子Col Ⅰ、Col Ⅲ、α-SMA和TGF-β蛋白表達(dá) 與Control組相比,Ang Ⅱ組心肌成纖維細(xì)胞中上述蛋白表達(dá)均顯著增加(P<0.05,P<0.01);與Ang Ⅱ組相比,Ang Ⅱ+LYC組與Ang Ⅱ+MCC950組中上述蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.05);AngⅡ組與AngⅡ+MCC950組無(wú)明顯差異(P>0.05),見表3、圖7。

3 討 論

心肌梗死引起的心肌細(xì)胞急性壞死與成纖維細(xì)胞膠原過(guò)度分泌而導(dǎo)致的瘢痕修復(fù)是防止梗死后室壁破裂的一種自然保護(hù)機(jī)制。心臟中過(guò)度的纖維化可能會(huì)導(dǎo)致心功能的逐漸惡化,甚至心力衰竭的發(fā)生〔4〕。同時(shí),心肌梗死后的無(wú)菌性炎癥反應(yīng)也是影響心功能和心臟重構(gòu)重要因素〔18〕。本研究結(jié)果表明,LYC可有效減輕缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷,并抑制心肌成纖維的活化及其對(duì)促纖維化介質(zhì)的表達(dá)。提示LYC有望成為一種新的、有效的改善心功能的治療策略。

LYC具有治療臨床多種疾病的巨大潛力〔5,6〕。然而,LYC對(duì)心肌損傷與纖維化的影響卻少有報(bào)道。但近期在肺纖維化的研究中顯示,LYC能夠通過(guò)抑制NLRP3的激活發(fā)揮改善疾病的作用〔7〕。在體內(nèi),NLRP3激活導(dǎo)致ASC聚集,隨后ASC招募pro-caspase-1的靠近,并誘導(dǎo)其自身催化,發(fā)生蛋白水解,以產(chǎn)生具有活性的cleaved caspase-1亞基。caspase-1激活發(fā)生在組裝后活化的炎癥小體復(fù)合體內(nèi),在這里具有活性的cleaved caspase-1裂解GSDMD前體,并釋放其活性形式(cleaved GSDMD),而后者可與膜磷脂成分進(jìn)行結(jié)合,將cleaved caspase-1通過(guò)蛋白水解切割產(chǎn)生的成熟促炎因子,IL-1β(cleaved IL-1β)和IL-18 (cleaved IL-18)釋放至細(xì)胞外〔11,12〕。故NLRP3、Asc和caspase-1、IL-1β和IL-18由損傷心肌表達(dá)和分泌,且該炎性小體成分的早期激活能促進(jìn)損傷心肌的修復(fù)與愈合。然而,上述成分的長(zhǎng)期慢性激活可最終導(dǎo)致心血管纖維化的病理機(jī)制發(fā)生〔12〕。此外,有研究〔7〕報(bào)道,NLRP3的特異性抑制劑MCC950能在體內(nèi)外通過(guò)抑制NLRP3炎癥小體介導(dǎo)的小鼠心肌梗死模型中的早期炎癥反應(yīng),從而減輕梗死心肌的纖維化水平。表明抑制NLRP3炎癥小體的活化在心肌梗死轉(zhuǎn)歸中具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),缺氧可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞中NLRP3過(guò)度表達(dá)。而LYC的干預(yù)可顯著降低心肌細(xì)胞對(duì)IL-1β、IL-18與TNF-α的分泌,這與前述文獻(xiàn)報(bào)道的LYC具有抗炎作用的結(jié)論一致〔9,10〕。同時(shí),利用心肌細(xì)胞凋亡水平與損傷的標(biāo)志分子LDH表達(dá)說(shuō)明,LYC可改善缺氧誘導(dǎo)的心肌損傷。而LYC的上述保護(hù)作用與MCC950的處理類似,提示LYC可能通過(guò)抑制NLRP3炎癥小體的激活發(fā)揮心肌保護(hù)作用。本研究結(jié)果證實(shí),LYC可通過(guò)抑制缺氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞中NLRP3的激活。

纖維化是由于心血管損傷引起的成纖維細(xì)胞過(guò)度分泌細(xì)胞外基質(zhì)(ECM),并誘導(dǎo)心臟和血管形成瘢痕修復(fù)的過(guò)程,其幾乎是所有心血管疾病在修復(fù)階段的共同特征〔19〕。眾所周知,在心肌損傷的炎癥期,心肌組織可分泌大量促炎和促纖維化介質(zhì),如TNF-α、TGF-β、Col Ⅰ、Col Ⅲ和幾種ILs,如IL-1β、IL-18等,刺激能夠產(chǎn)生ECM的成纖維細(xì)胞活化,進(jìn)而促進(jìn)損傷創(chuàng)面的愈合〔19,20〕。在生理基礎(chǔ)條件下,成纖維細(xì)胞產(chǎn)生少量的ECM蛋白,以維持ECM緩慢而穩(wěn)定的周轉(zhuǎn)。然而,當(dāng)在心肌損傷發(fā)生時(shí),上述這些不同的促炎、促纖維化因子可刺激成纖維細(xì)胞快速增殖并分化為能夠合成并分泌更多ECM的肌成纖維細(xì)胞,而后者的特征是細(xì)胞內(nèi)α-SMA表達(dá)明顯增多〔19〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,LYC可能通過(guò)NLRP3小體的激活發(fā)揮抑制成纖維細(xì)胞的促纖維化作用。而這與其在肺纖維化中的保護(hù)機(jī)制相似。

綜上,LYC可能通過(guò)降低NLRP3炎癥小體的激活在體外改善缺氧誘導(dǎo)的心肌損傷與炎癥反應(yīng),并抑制心肌成纖維細(xì)胞活化與促纖維介質(zhì)的釋放。