唐 瑞 ，吳杭莎 ，李亞飛 ，趙明方 ，方可兒 ，張海瑞 ，葛衛(wèi)紅 *，杜偉鋒 ,

1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江 杭州 311402

2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥炮制技術(shù)研究中心，浙江 杭州 311401

3.浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，浙江 杭州 311401

杜仲在中醫(yī)藥方面的使用已有2 000 多年的歷史，首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1]，“杜仲，味辛，平。主腰脊痛。補(bǔ)中，益精氣，堅筋骨，強(qiáng)志，除陰下癢濕，小便余瀝。久服輕身，耐老。一名思仙”，將其列為上品，屬于名貴滋補(bǔ)藥材之一，具有獨特的藥用價值。現(xiàn)代藥理研究表明，杜仲具有抗骨質(zhì)疏松[2]、降壓[3]、保護(hù)腎臟[4-5]、調(diào)血脂[6]、抗腫瘤[7]、保護(hù)神經(jīng)[8]、安胎[9]等作用。其中杜仲含有較多的硬性橡膠類物質(zhì)杜仲膠，研究表明這種膠質(zhì)會對有效成分的溶出產(chǎn)生抑制作用[10]，而經(jīng)高溫加熱后，硬性橡膠可被破壞，可促進(jìn)有效成分溶出，提高治療效果，因而中醫(yī)臨床上常以炮制品為主。歷版《中國藥典》中收錄的杜仲炮制品以鹽制為主，研究表明鹽杜仲中的浸出物含量比杜仲高，而鉛含量比杜仲低，可達(dá)到減毒增效的作用[11]，此外，鹽杜仲的補(bǔ)腎健骨作用也優(yōu)于杜仲[12]。由此可見，杜仲鹽制的必要性與優(yōu)越性。通過對杜仲資料的收集與梳理，目前共有17 個省市的炮制規(guī)范收載了杜仲及鹽杜仲，除上海市的中藥炮制規(guī)范對杜仲以松脂醇二葡萄糖苷作為含量測定指標(biāo)，其他省市最新炮制規(guī)范均未對杜仲及鹽杜仲規(guī)定含量測定項?！吨袊幍洹?020 年版對于杜仲藥材、飲片及鹽杜仲均采用松脂醇二葡萄糖苷作為含量測定指標(biāo)，未存在限度上的差異，無法全面體現(xiàn)出杜仲鹽制前后的專屬性與整體性變化；同時在實際生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)杜仲膠炮制斷絲時，松脂醇二葡萄糖苷的含量一般低于標(biāo)準(zhǔn)的限度，質(zhì)量無法合格，這說明僅檢測該指標(biāo)可能無法全面判定炮制飲片的質(zhì)量、無法體現(xiàn)出炮制特色。因此，有必要進(jìn)行杜仲鹽制前后的差異研究并尋找潛在差異性成分。近年來，對鹽制杜仲的相關(guān)研究主要有鹽制杜仲的溫度研究[13]，杜仲鹽制前后指紋圖譜的構(gòu)建及化學(xué)成分含量的變化[14-16]，腎纖維化藥動學(xué)研究[17]等。但對杜仲鹽制的增效物質(zhì)基礎(chǔ)還未有系統(tǒng)研究，無法準(zhǔn)確全面的對杜仲鹽制的增效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行闡述。

液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對中藥中復(fù)雜的成分具有很好的分離能力和結(jié)構(gòu)鑒別的能力，現(xiàn)常應(yīng)用于化學(xué)藥物、復(fù)方中藥、不同產(chǎn)地中藥、炮制前后中藥及單味中藥的成分定性及定量等分析。近年來，中藥炮制過程中成分的變化和藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究已成為中藥領(lǐng)域的一大熱點。已有學(xué)者運(yùn)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對中藥炮制的物質(zhì)組學(xué)基礎(chǔ)進(jìn)行了探索，王祎等[18]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合多元統(tǒng)計分析篩選得到，葫蘆巴中的黃酮碳苷類成分在鹽制后溶出增加，皂苷類成分發(fā)生了結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，這2 類成分可能是葫蘆巴鹽制前后差異性成分，吳杭莎等[19]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合化學(xué)計量法篩選續(xù)斷鹽制前后質(zhì)量差異成分，初步篩選了12 個主要差異性成分。文旺等[20]利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合植物代謝組學(xué)，并通過化學(xué)統(tǒng)計分析篩選甘草清炒和蜜制后化學(xué)成分的變化，最終鑒定出10 個顯著差異成分，主要為甘草苷和甘草酸的衍生物。

本研究采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對杜仲鹽制前后的化學(xué)成分組成進(jìn)行鑒定，經(jīng)化學(xué)計量法分析可視化展示杜仲及鹽杜仲中化學(xué)成分的組間差異并篩選出影響杜仲鹽制前后質(zhì)量變化的潛在差異性成分。

1 儀器與材料

1.1 儀器

UPLC-Triple-TOF/MS 系統(tǒng)：AcquityTMultra 型高效液相色譜儀，美國Waters 公司；Triple TOF 5600+型飛行時間質(zhì)譜，配有電噴霧離子源，美國AB Sciex公司；U3000 型高效液相色譜儀，美國Thermo Fisher公司；ME-204E 型電子分析天平（0.01 g）、XS105型電子分析天平（0.01 mg），瑞士Mettler Toledo 公司；Centrifuge 5425 型離心機(jī)，德國Eppendorf 公司；DFT-200 型手提式高速中藥粉碎機(jī)，溫嶺市林大機(jī)械有限公司；DFD-700 型電熱恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司；KQ-500DB 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；TG16-WS 型臺式高速離心機(jī)，上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.2 試藥

1.2.1 對照品 京尼平苷酸（批號111828-201805，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.10%）、綠原酸（批號110753-201817，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.80%）、紫丁香苷（批號111574-201605，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95.20%）、松脂醇二葡萄糖苷（批號111537-201706，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為91.70%）、金絲桃苷（批號111521-201809，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為94.90%）、京尼平苷（批號 110749-201919，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97.10%），均購自于中國食品藥品檢定研究院；京尼平（批號21041202，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.40%）、中脂素二葡萄糖苷（批號20031903，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98.46%），均購自于成都格利普生物科技有限公司；咖啡酸（批號110002-202005，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.00%）、蘆?。ㄅ?00080-201811，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98.00%），均購自于上海鴻永生物科技有限公司。

1.2.2 試劑 甲醇、乙腈、甲酸為色譜純，美國Tedia公司；磷酸，分析純，浙江漢諾化工科技有限公司；甲醇，分析純，廣東光華科技股份有限公司；純凈水購自杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。

1.2.3 藥材 杜仲飲片5 批，購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，編號為S1～S5，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院葛衛(wèi)紅教授鑒定，為杜仲科杜仲屬植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.干燥樹皮的加工品。鹽杜仲飲片由杜仲飲片制備而得（炮制方法參考2005 版《浙江省中藥飲片炮制規(guī)范》[21]，具體炮制工藝按浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司鹽杜仲生產(chǎn)工藝進(jìn)行炮制：取杜仲，加鹽水，悶透，置炒制容器中，220 ℃加熱炒制7～9 min，至絲易斷、表面焦黑色，取出放涼，即得。每100 千克杜仲，用食鹽2 kg 拌勻），編號為Y1～Y5。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 供試品溶液 取杜仲樣品粉末（過三號篩）約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理（頻率40 kHz、功率500 W）40 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取25 mL 續(xù)濾液于蒸發(fā)皿中，蒸干，用50%甲醇定容于5 mL 量瓶中，過0.45 μm 微孔濾膜，即得。

2.1.2 對照品溶液 取對照品松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷、京尼平苷酸、京尼平、紫丁香苷、金絲桃苷、綠原酸、咖啡酸、蘆丁、中脂素二葡萄糖苷適量，精密稱定，置于20 mL 量瓶中，加50%甲醇制成分別含177.0、205.8、213.9、197.0、113.1、188.9、190.7、193.1、311.6、173.3 μg/mL 的混合對照品溶液，即得。

2.2 色譜條件

色譜柱為Waters HSS-T3 柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液（A）-0.1%甲酸乙腈溶液（B），梯度洗脫：0～20 min，2%～30%B；20～35 min，30%～50% B；35～42 min，50%～95% B；體積流量為0.3 mL/min；柱溫為50 ℃；檢測波長254 nm；進(jìn)樣量3 μL。

2.3 質(zhì)譜條件

UPLC-Triple-TOF 5600+飛行時間液質(zhì)聯(lián)用儀：負(fù)離子掃描模式；掃描范圍m/z100～1 500；霧化氣（GS1）344.738 kPa（50 psi）；霧化氣（GS2）344.738 kPa（50 psi）；氣簾氣（CUR）241.317 kPa（35 psi）；離子源溫度（TEM）550 ℃；離子源電壓（IS）?4 500 V；一級掃描：去簇電壓（DP）100 V，聚焦電壓（CE）10 V；二級掃描：使用TOF MS～Product Ion～I(xiàn)DA模式采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，碎片碰撞電壓（CID）為20、40、60 V，進(jìn)樣前，用CDS 泵做質(zhì)量軸校正，使質(zhì)量軸誤差小于2×10?6。

2.4 化學(xué)成分分析

將杜仲樣品供試品溶液按上述“2.2”和“2.3”項下的色譜和質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，得到樣品鹽制前后UPLC-Triple-TOF/MS 負(fù)離子模式下的總離子流圖，結(jié)果見圖1。通過Analyst?TF 1.6 軟件采集數(shù)據(jù)，Peak view 軟件擬合化合物的分子式，比對Scifinder 和Reaxy 數(shù)據(jù)庫以及國內(nèi)外杜仲化學(xué)成分研究相關(guān)文獻(xiàn)和對照品數(shù)據(jù)，結(jié)合裂解規(guī)律的分析，結(jié)果共推斷出杜仲中52 個化合物，如表1 所示。

表1 杜仲中化學(xué)成分的鑒定結(jié)果Table 1 Identification results of chemical constituents in EC

圖1 杜仲與鹽杜仲在UPLC-Triple-TOF/MS 負(fù)離子模式下的總離子流圖Fig.1 Total ion current diagram of Eucommiae Cortex (EC) and salt-processed Eucommiae Cortex (spEC) in UPLC-Triple-TOF/MS negative ion mode

2.4.1 環(huán)烯醚萜類化合物 環(huán)烯醚萜類化合物在負(fù)離子模式下易形成[M－H]?和[M＋HCOO]?這2 種準(zhǔn)分子離子，其在裂解過程中易失去葡萄糖結(jié)構(gòu)，得到苷元碎片離子[M－H－Glc]?，同時苷元碎片進(jìn)一步易失去H2O 和CO2分子，從而得到[M－H－Glc－H2O]?、[M－H－Glc－CO2]?、[M－H－Glc－H2OCO2]?等碎片離子。

峰11 化合物準(zhǔn)分子離子為m/z373.113 8 [MH]?，擬合分子式為 C16H22O10，根據(jù)二級質(zhì)譜211.060 1、193.049 4、167.070 7、149.060 1，推測其裂解后形成[M－H－Glc]?、[M－H－Glc－H2O]?、[M－H－Glc－CO2]?、[M－H－Glc－H2O－CO2]?等碎片離子，推測化合物存在葡萄糖結(jié)構(gòu)，母核為環(huán)烯醚萜，結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索及文獻(xiàn)對比[31-35]推測該化合物為京尼平苷酸，其裂解途徑如圖2 所示。

圖2 京尼平苷酸的裂解途徑Fig.2 Fragmentation pathway of geniposidic acid

峰25 化合物的準(zhǔn)分子離子為m/z433.134 8[M＋HCOO]?，擬合分子式為C17H24O10，根據(jù)二級質(zhì)譜387.130 1、225.075 7、207.064 9，推測其裂解后形成[M－H－Glc]?、[M－H－Glc－H2O]?等碎片離子，結(jié)合數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)對比[34-35,45]推測該化合物為京尼平苷，其裂解途徑如圖3 所示。

圖3 京尼平苷裂解過程Fig.3 Fragmentation pathway of geniposide

2.4.2 有機(jī)酸類化合物 杜仲中的有機(jī)酸類化合物主要有脂肪族羧酸、糖衍生有機(jī)酸及酚酸類，其在負(fù)離子模式下均易形成[M－H]?準(zhǔn)分子離子。脂肪族羧酸包括檸檬酸、異檸檬酸等。糖衍生有機(jī)酸在裂解過程中易失去葡萄糖結(jié)構(gòu)，得到苷元碎片離子[M－H－Glc]?，同時苷元碎片進(jìn)一步易失去CH3和CO2分子，從而得到[M－H－Glc－CH3]?、[M－HGlc－CO2]?、[M－H－Glc－CH3－CO2]?等碎片離子。峰14 化合物的準(zhǔn)分子離子為m/z359.097 8 [M－H]?，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為C15H20O10，二級質(zhì)譜為197.044 7、153.055 2、138.031 8，推測該化合物存在葡萄糖結(jié)構(gòu)，裂解形成[M－H－Glc]?、[M－H－Glc－CO2]?、[M－H－Glc－CO2－CH3]?碎片離子，結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索，推測該化合物母核為丁香酸，結(jié)合文獻(xiàn)對比[38]推測該成分為丁香酸葡萄糖苷，其裂解途徑如圖4 所示。

圖4 丁香酸葡萄糖苷的裂解過程Fig.4 Fragmentation pathway of syringic acid glucoside

酚酸類成分為含有酚環(huán)的有機(jī)酸，其在裂解過程中易形成咖啡酸特征碎片離子m/z179 及奎寧酸特征碎片離子m/z191，隨后進(jìn)一步丟失CO2或H2O分子。峰19 化合物的準(zhǔn)分子離子為m/z353.087 6[M－H]?，擬合分子式為C16H18O9，根據(jù)二級質(zhì)譜191.054 7、179.033 3、173.044 7、135.044 4，推測化合物存在咖啡酸和奎寧酸結(jié)構(gòu)，根據(jù)數(shù)據(jù)庫檢索，結(jié)合文獻(xiàn)對比[36-38,41]推測該化合物為綠原酸，其裂解途徑如圖5 所示。

圖5 綠原酸的裂解過程Fig.5 Fragmentation pathway of chlorogenic acid

2.4.3 木脂素類化合物 木脂素類化合物在負(fù)離子模式下易形成[M－H]?和[M＋HCOO]?這2 種準(zhǔn)分子離子，其在裂解過程中易失去葡萄糖結(jié)構(gòu)，得到碎片離子[M－H－Glc]?或[M－H－2Glc]?，同時苷元碎片進(jìn)一步易失去CH3、CO 等分子，從而得到[M－H－Glc－CH3]?、[M－H－2Glc－CH3]?、[MH－Glc－CO]?、[M－H－2Glc－CO]?等碎片離子。峰31 化合物的準(zhǔn)分子離子為m/z727.247 0 [M＋HCOO]?，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為C32H42O16，根據(jù)二級質(zhì)譜681.241 3、519.190 9、357.135 4，推測化合物存在2 個葡萄糖結(jié)構(gòu)且母核為松脂醇，根據(jù)數(shù)據(jù)庫檢索及文獻(xiàn)對比[24,35,46-48]推測該化合物為松脂醇二葡萄糖苷，其裂解途徑如圖6 所示。

圖6 松脂醇二葡萄糖苷的裂解途徑Fig.6 Fragmentation pathway of pinoresinol diglucoside

2.4.4 黃酮類化合物 黃酮類化合物在負(fù)離子模式下易形成[M－H]?準(zhǔn)分子離子，在裂解過程中經(jīng)常發(fā)生糖苷鍵的斷裂，丟失葡萄糖分子或鼠李糖分子，得到苷元碎片離子[M－H－Glc]?或[M－H－Rha]?等，苷元碎片后續(xù)進(jìn)一步發(fā)生CH3、CO、H2O、CHO等分子的丟失。峰50 化合物的準(zhǔn)分子離子為m/z463.094 9 [M－H]?，擬合分子式為C21H20O12，根據(jù)二級質(zhì)譜301.053 1、255.163 9，結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索及文獻(xiàn)對比[52]，推測該化合物為金絲桃苷，其裂解途徑如圖7 所示。

圖7 金絲桃苷的裂解途徑Fig.7 Fragmentation pathway of hyperoside

2.5 杜仲鹽制前后差異性成分篩選

使用Peakview 軟件對樣品中所有鑒定的化合物的質(zhì)譜峰數(shù)據(jù)進(jìn)行提取，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入SIMCA 14.1軟件進(jìn)行主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal partial least squares method-discriminant analysis，OPLS-DA）進(jìn)行多元統(tǒng)計分析，篩選出潛在差異性成分。

2.5.1 聚類分析 將5 批杜仲及鹽杜仲的質(zhì)譜峰數(shù)據(jù)導(dǎo)入MetaboAnalyst 5.0 中，得到杜仲與鹽杜仲樣品的聚類熱圖，結(jié)果見圖8。樣品中化合物含量越高，熱圖上所顯示的顏色就越深。Pearson 聚類熱圖表明各樣品可分為2 類，S1～S5 聚為一類，Y1～Y5 聚為一類。

圖8 杜仲與鹽杜仲各化學(xué)成分聚類熱圖Fig.8 Cluster heat map of chemical components of EC and spEC

2.5.2 PCA 將各樣品在負(fù)離子模式下已鑒別的52 個成分的質(zhì)譜峰數(shù)據(jù)導(dǎo)入到SIMCA 14.1 中進(jìn)行PCA，結(jié)果如圖9 所示，在無監(jiān)督的情況下，杜仲樣品分布于第1、4 象限，鹽杜仲樣品分布于第2、3 象限，兩者具有明顯的區(qū)分，表明杜仲鹽制前后其總體化學(xué)特征發(fā)生了改變，可能存在化學(xué)成分種類或含量的變化；各組中不同樣本點之間離散較小，說明各批次樣品組內(nèi)均一性較高。

圖9 杜仲與鹽杜仲PCA 得分圖Fig.9 PCA score plot of EC and spEC

2.5.3 OPLS-DA 將各樣品在負(fù)離子模式下已鑒別的52 個成分的質(zhì)譜峰數(shù)據(jù)導(dǎo)入到SIMCA 14.1 中進(jìn)行OPLS-DA，以此來篩選影響杜仲與鹽杜仲分類判別的潛在差異成分。樣品得分散點圖如圖10 所示，杜仲與鹽杜仲聚為2 類，模型的累積解釋能力參數(shù)RX2、RY2及預(yù)測能力參數(shù)Q2分別0.957、1.000、1.000，說明模型可靠，擬合效果較好。由圖11 所示的200次置換檢驗圖中可知，R2和Q2的回歸線分別與左側(cè)縱軸相交于2 條回歸線，斜率均較大，且左側(cè)隨機(jī)排列得到的R2和Q2隨機(jī)值均小于右側(cè)的原始值，說明所建立的原模型有效、穩(wěn)定，且未出現(xiàn)過擬合，可用于進(jìn)行進(jìn)一步的數(shù)據(jù)分析。

圖10 杜仲與鹽杜仲OPLS-DA 得分圖Fig.10 OPLS-DA score plot of EC and spEC

圖11 杜仲與鹽杜仲OPLS-DA 模型置換檢驗圖Fig.11 Permutation validation figure of OPLS-DA model of EC and spEC

進(jìn)一步生成模型的VIP 圖（圖12）和S-Plot 圖（圖13），導(dǎo)出得到VIP 值及p(corr)和P值，計算|p(corr)|和?lgP值，以VIP＞1，|p(corr)|≥0.5 和?lgP＞1.3 為條件對影響杜仲鹽制前后質(zhì)量差異的潛在差異性成分進(jìn)行篩選，得到14 種潛在的差異性化學(xué)成分，分別為峰25（京尼平苷）、19（綠原酸）、46（杜仲醇）、6（桃葉珊瑚苷）、31（松脂醇二葡萄糖苷）、11（京尼平苷酸）、32（京尼平）、41（eucomoside B）、47（異綠原酸C）、8（teuhircoside硫酸脂）、20（橄欖素二葡萄糖苷）、35（丁香脂素二葡萄糖苷）、34（中脂素二葡萄糖苷）和37（去氫二松柏醇葡萄糖苷），結(jié)果見表2。

表2 杜仲與鹽杜仲差異性成分篩選結(jié)果Table 2 Screening results of differential components between EC and spEC

圖12 杜仲與鹽杜仲52 個共同成分VIP 圖Fig.12 VIP diagram of 52 common components of EC and spEC

圖13 杜仲與鹽杜仲52 個共有成分S-Plot 圖Fig.13 S-plot spectrogram of 52 common components of EC and spEC

各成分所對應(yīng)的峰面積表示含量的變化，本研究計算了5 批杜仲與鹽杜仲的同一成分質(zhì)譜峰面積占該批次的峰面積總值的百分比，分別以杜仲與鹽杜仲各成分峰面積百分比平均值做比較，結(jié)果如表3 所示，杜仲經(jīng)鹽制后桃葉珊瑚苷、京尼平苷酸、綠原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、異綠原酸C 和eucomoside B 呈上升趨勢，而杜仲醇、京尼平、teuhircoside 硫酸脂、橄欖素二葡萄糖苷、丁香脂素二葡萄糖苷、中脂素二葡萄糖苷和去氫二松柏醇葡萄糖苷呈下降趨勢。

表3 杜仲與鹽杜仲差異性成分的峰面積變化結(jié)果Table 3 Results of peak area changes of differential components of EC and spEC

3 討論

本研究采用UPLC-Triple-TOF/MS 建立了杜仲化學(xué)成分的定性分析方法，通過Scifinder、Reaxys數(shù)據(jù)庫、相關(guān)文獻(xiàn)的搜索以及裂解規(guī)律的分析，共鑒定出52 種化合物，主要類別有環(huán)烯醚萜類、黃酮類、木脂素類和有機(jī)酸類等。

炮制前后僅發(fā)現(xiàn)有成分含量高低的變化，并未發(fā)現(xiàn)有新增或消失的成分。PCA 與OPLS-DA 結(jié)果顯示，杜仲與鹽杜仲在有監(jiān)督和無監(jiān)督的情況下均能得到較好地區(qū)分，利用液質(zhì)聯(lián)用數(shù)據(jù)共篩選出京尼平苷、綠原酸、杜仲醇、桃葉珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、京尼平、eucomoside B、異綠原酸C、teuhircoside 硫酸脂、橄欖素二葡萄糖苷、丁香脂素二葡萄糖苷、中脂素二葡萄糖苷和去氫二松柏醇葡萄糖苷這14 個潛在差異成分。桃葉珊瑚苷屬于環(huán)烯醚萜苷類化合物，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗炎、抗骨質(zhì)疏松、保護(hù)肝腎的作用[53]。京尼平、京尼平苷、京尼平苷酸均屬于環(huán)烯醚萜類化合物，現(xiàn)代藥理研究表明京尼平、京尼平苷均具有較好的治療糖尿病腎病作用[54-55]，京尼平苷酸是京尼平苷的衍生物，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抗炎、抗氧化應(yīng)激、保護(hù)肝臟等作用[56-58]。

綠原酸屬于多酚類化合物，多個藥理研究表明其具有較強(qiáng)的抗菌作用[59-62]。松脂醇二葡萄糖苷屬于木脂素類化合物，藥理研究表明其具有改善骨質(zhì)疏松的作用，同時可提升骨質(zhì)量和骨堅硬程度[63-64]。杜仲醇屬于環(huán)烯醚萜類化合物，現(xiàn)代藥理研究表明其具有鎮(zhèn)靜催眠、安胎的作用[65-66]。異綠原酸C 屬于苯丙素類化合物，現(xiàn)代藥理作用表明其具有抗炎、保護(hù)肝臟等作用[67-68]。

經(jīng)質(zhì)譜峰面積分析，杜仲鹽制后京尼平苷、綠原酸、桃葉珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、異綠原酸C、eucomoside B 呈上升趨勢，這幾個差異性成分可作為主要的潛在物質(zhì)基礎(chǔ)研究方向，根據(jù)這幾個差異性成分的現(xiàn)代藥理作用，我們推測鹽制后能夠增強(qiáng)杜仲的抗炎、抗骨質(zhì)疏松及保護(hù)肝腎等功效，這同時也印證了杜仲“鹽制入腎”炮制理論，為后續(xù)開展相關(guān)藥理對比研究提供了方向。

本研究采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合化學(xué)計量學(xué)對鹽杜仲增效的物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究，對杜仲各類成分進(jìn)行了較好的分析，結(jié)合化學(xué)計量學(xué)對杜仲鹽制前后進(jìn)行差異性成分篩選，共篩選出14 個潛在差異成分，為后續(xù)杜仲炮制前后藥效學(xué)的物質(zhì)基礎(chǔ)的研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提升提供了科學(xué)依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突