段舟萍,彭洪薇,李 蒲,魏筱華,崔建鑫,韓 盈

(1.南昌大學第一附屬醫(yī)院a.臨床研究中心; b.藥學部,南昌 330006; 2.科文斯醫(yī)藥研發(fā)有限公司,上海 200001)

鹽酸貝那普利片是臨床常用的血管緊張素轉化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors,ACEI)類抗高血壓藥,該藥口服后在體內迅速被吸收,代謝為活性物質貝那普利拉,通過減少醛固酮分泌,降低血管阻力,增高血漿腎素活性,還可抑制緩激肽的降解,從而發(fā)揮降壓作用[1-2]。本研究旨在考察國產10 mg鹽酸貝那普利片制劑在健康人群的藥代動力學參數,并評價其與原研藥品的參比制劑的生物等效性。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

受試制劑(test,T):鹽酸貝那普利片,規(guī)格:10 mg·片-1,批號:DGM20160601,由深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司生產;參比制劑(reference,R):鹽酸貝那普利片(商品名:Cibacen?),規(guī)格:10 mg·片-1,批號:3785401,由原研MEDA Pharma GmbH &Co.KG生產。貝那普利鹽酸鹽的標準品批號為2-FJ-123-1,純度為98.0%;貝那普利拉標準品批號為1-JQW-132-1、純度為98.0%,內標物貝那普利-d5鹽酸鹽標準品批號為1368-087A1、純度為99.4%,貝那普利拉-d5標準品批號為7-JQW-116-1、純度為98.5%,均由TLC Pharmaceutical Standards生產。實驗用水為超純水,乙腈、甲酸、甲醇、二甲基甲酰胺和乙酸乙酯等化學試劑均為HPLC級或化學純級。

1.2 儀器

Nexera UHPLC LC-30A高效液相色譜儀,由日本島津公司生產;Sciex API 5500三重四級桿質譜儀,由美國Series公司生產;微量電子天平MX5,由美國梅特勒-托利多公司生產。

1.3 受試者選擇

本研究經南昌大學第一附屬醫(yī)院倫理專業(yè)委員會批準(倫理號:2017臨倫審087號;餐后及空腹試驗的藥物臨床試驗登記號分別為CTR20181024、CTR20180633),所有志愿者在參加試驗前均簽署知情同意書。本研究空腹組共入組30例健康志愿者,均為漢族,男10人,女20人,年齡(23.90±4.14)歲,身高(161.02±8.33)cm,體重(57.13±8.59)kg,BMI(21.92±1.77)kg·m-2;餐后組共入組30例,28人為漢族,2人為滿族,男14人,女16人,年齡(23.4±4.13)歲,身高(162.00±8.14)cm,體重(57.12±7.18)kg,BMI(21.70±1.26)kg·m-2。

入選及排除標準參考文獻[3]。入選標準:1)年齡≥18周歲;2)男性體重不低于50 kg,女性體重不低于45 kg,BMI在19～26 kg·m-2;3)經病史詢問、全身體檢以及實驗室檢查證明為健康者。排除標準:1)已知對貝那普利或其他ACEI制劑有過敏史者;2)體格檢查異常且有臨床意義者;3)生命體征測量及實驗室檢查異常且有臨床意義者;4)在首次服用試驗用藥品前2周內服用了任何處方及非處方藥、維生素或中草藥者;5)在首次服用試驗用藥品前參加過其他藥物臨床試驗未滿3個月者。

1.4 給藥方案及血樣采集

采用單中心、隨機、開放、兩周期、兩序列、自身交叉對照的試驗設計。將志愿者按照1：1的比例分配至T-R(受試制劑-參比制劑)和R-T(參比制劑-受試制劑)序列組,給藥前至少禁食10 h,服藥前、后1 h禁水,以(240±10)mL溫水送服10 mg受試或參比制劑。空腹組在空腹狀態(tài)下服藥,餐后組在給藥前30 min開始進食高脂餐,并于30 min內服用完畢?？崭购筒秃蠼M分別于給藥4 h進食午餐,10 h后進食晚餐,餐食為營養(yǎng)食堂定制的標準餐,且保持兩周期一致。

空腹、餐后組分別于給藥前0 h和給藥后0.25、0.5、0.75、1.、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h采集4 mL靜脈血至預冷的EDTA-K2抗凝管中,離心分離獲得血漿并存儲于-70 ℃冰箱保存。

1.5 血藥濃度測定

采用高效液相-色譜串聯質譜法測定人血漿中貝那普利及貝那普利拉的血藥濃度,方法學驗證和血藥濃度測定由科文斯醫(yī)藥研發(fā)(上海)有限公司完成。檢測方法經驗證,在選擇性、精密度、準確度、重現性等方面均符合要求,適用人血漿中貝那普利和貝那普利拉的定量測定。

高效液相色譜條件:色譜柱為Phenomenex,C18(50.0 mm×2.0 mm,5 μm),流速為0.60 mL·min-1。流動相A為含0.3%甲酸的水溶液;流動相B為含0.3%甲酸的乙腈：甲醇(50：50,v/v)溶液;進樣量為5 μL,進樣器溫度為5 ℃。

質譜條件:電噴霧電離離子源,噴霧器電壓5000 V;溫度550 ℃;碰撞氣壓力8 psi(1 psi=6.895 kPa);噴霧氣壓力60 psi;氣簾氣體壓力40 psi;輔助氣壓力65 psi;入口電勢10 V;正離子方式檢測;用于定量分析的離子反應分別為m/z 425.2→351.2(貝那普利)、m/z 397.2→351.2(貝那普利拉)、m/z 430.2→356.2(貝那普利-d5)、m/z 402.2→356.2(貝那普利拉-d5)。貝那普利和貝那普利拉的最低定量限和最低質控質量濃度均為1.00 ng·mL-1。

1.6 統(tǒng)計學方法

使用WinNonlin軟件7.0版中的非房室模型,將貝那普利和貝那普利拉的主要藥代動力學參數Cmax、AUC0-t、AUC0-∞經對數轉換后再進行方差分析,方差分析模型中以給藥序列、藥物、周期作為固定效應,受試者順序作為隨機效應,計算主要指標的幾何均值比的90%置信區(qū)間落在80.00%～125.00%,則判斷2種制劑生物等效。對貝那普利及貝那普利拉Tmax進行非參數秩和檢驗,其余描述性與推斷性統(tǒng)計分析使用SAS9.4軟件。生物等效性評價基于原型藥物貝那普利的分析。

2 結果

2.1 血藥濃度-時間曲線

空腹組共篩選72人,最終入組30例健康志愿者;餐后組篩選76人,實際給藥例數為30例。在空腹和餐后狀態(tài)下單次口服10 mg鹽酸貝那普利片的參比制劑和受試制劑后,鹽酸貝那普利及代謝產物貝那普利拉的血藥濃度-時間曲線,分別見圖1及圖2。

時間/h 時間/hA:貝那普利;B:貝那普利拉。圖1 血藥濃度-時間曲線(空腹組)

2.2 藥代動力學參數

在空腹和餐后狀態(tài)下,受試者口服10 mg鹽酸貝那普利片后的藥代動力學參數分別見表1—2。

表1 空腹組口服鹽酸貝那普利片后的藥代動力學參數分析

表2 餐后組口服鹽酸貝那普利片后的藥代動力學參數分析

2.3 生物等效性評價

受試者在空腹及餐后條件下單次口服參比制劑或受試制劑后,血漿中貝那普利及代謝物貝那普利拉經對數轉換的Cmax、AUC0-t和AUC0-∞幾何均值比的90%置信區(qū)間,均在80.00%～125.00%等效區(qū)間內,Tmax在兩種制劑間的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),符合生物等效性評價標準?；谏鲜雠R床試驗數據可以判斷,深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司生產的受試制劑鹽酸貝那普利片與原研的參比制劑鹽酸貝那普利片(商品名:Cibacen?)生物等效。受試制劑相當于參比制劑的生物利用度F=AUC0-t(T)/AUC0-t(R),空腹組的F為(97.87±22.47)%,餐后組的F為(96.07±23.61)%。

2.4 安全性評價

空腹組不良事件發(fā)生率為23.3%(7/30);餐后組不良事件發(fā)生率為30.0%(9/30)。主要不良事件包括:甘油三酯升高、尿酸增高、腹痛、脈搏增快、血壓降低、尿路感染、鼻衄、智齒冠周炎、干眼癥、頭暈。所有不良事件嚴重程度均為1級輕度,無嚴重不良事件發(fā)生。本研究結果表明,單次口服10 mg參比制劑和受試制劑后,受試者對該藥具有良好的安全性和耐受性。

3 討論

本研究數據顯示:健康受試者口服10 mg貝那普利后,吸收迅速,空腹組約30 min達到貝那普利原型血藥濃度的峰值Cmax,餐后組原型藥約在1 h達到血藥濃度的峰值Cmax,與文獻[4-5]報道的一致。空腹組服藥6 h后基本未測出原型藥貝那普利的濃度,24 h基本未檢測出活性代謝物貝那普利拉的濃度;而餐后組在48 h內持續(xù)能檢測到原型藥和活性代謝物的濃度,提示高脂飲食對貝那普利的吸收和代謝具有一定的影響?？崭菇M活性代謝物貝那普利拉的Cmax約出現在1.5 h,餐后組的貝那普利拉的Cmax約出現在2.5 h,均較原型藥有所延長。根據國家藥品監(jiān)督管理局藥品評審中心發(fā)布的《以藥動學參數為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》[6],有原型藥和代謝物的制劑,一般推薦僅測定原型藥物,因為原型藥物的血藥濃度-時間曲線比代謝產物能更靈敏地反映制劑間的差異。本研究同時檢測了原型藥物及活性代謝物的濃度,結果顯示,兩種制劑在健康中國人體內的藥代動力學曲線的擬合度較高,提示該兩種制劑在健康人體的吸收、分布、代謝、排泄等過程的差異較小,受試制劑與原研藥具有生物等效性。